Aufreinigung eines Gesamtlipidextrakts mit Säulenchromatographie

1. Setup und Vorbereitung der Materialien

1. Erhalten Sie eine totale Lipid Extrakt (TLE) Lösemittelextraktion Verfahren (Ultraschall, Soxhlet oder beschleunigte Lösungsmittel Extraktion (ASE)).
2. Sammeln Sie die folgenden: verbrannt Borosilikat Glas, Pipetten und Glühbirnen, Kieselgel, Hexan, Dichlormethan (DCM) und Methanol.
   1. Diese Materialien können von jedem chemischen Händler gekauft werden. Die Reagenzien sollte rein und frei von Kohlenwasserstoffen.
3. Erhalten Sie auch verbrannt Glaswolle und Borosilikatglas 4-mL-Fläschchen.
4. Achten Sie darauf, ein Mittel zur Förderung der Spalte und die Sammlung Fläschchen während des Verfahrens haben. Zum Beispiel einen Stand mit Klammern und einem abscheulichen Rack. Viele Labore haben maßgeschneiderte Gestelle entwickelt, die mehrere Spalten und Sammlung Fläschchen (Abbildung 2) zu halten. Dadurch können viele Spalten gleichzeitig ausgeführt werden.

(2) Methoden

1. Beginnen Sie mit der trockenen Probe in einem 4-mL-Fläschchen. Wenn die Probe wiegt mehr als ~ 10 mg nach dem Trocknen, es müssen aufgeteilt werden, bevor Sie die nächsten Schritte durchführen, wie das Silica-Gel nur mit einer endlichen Masse von organischen Stoffen reagieren zu können.
2. Unterbrechen Sie die Probe in einer kleinen Menge von Hexan. Dies ist die erste und die mindestens drei Lösungsmittel polar in dieses Experiment verwendet.
3. Besteht die Probe an der Innenseite der Flasche stecken, beschallen Sie die Proben 5 min.
4. Laden Sie eine kleine Menge von Glaswolle in den oberen Teil einer Pipette mit einem Satz von sauberen Pinzette. Drücken Sie vorsichtig die Glaswolle am unteren Rand der Pipette, mit einem anderen Pipette, um einen Stecker zu bilden.
5. Übertragen Sie sorgfältig Silica-Gel in die Pipette, bis es etwa halb voll ist.
6. Legen Sie ein Abfallsammlung 4-mL-Fläschchen unter der Spalte.
7. Die Silica-Gel in die Pipette mit 3 Bände von Hexan einweichen. Diese Bedingungen die Spalte Luftblasen entfernt und spült Verunreinigungen aus der Silica-Gel.
8. Sobald die letzte Wäsche fertig ist, entfernen Sie den Abfall Sammelbehälter und ersetzen Sie es durch ein Fläschchen den apolaren Bruch zu sammeln.
9. Die gesamte Probe im Hexan auf die Säule mit einer Pipette vorsichtig zu übertragen. Spülen Sie das Probenfläschchen zwei weitere Male mit kleinen Volumina von Hexan, und übertragen Sie auf die Spalte. Lassen Sie das Hexan, die, dem in die Probe übertragen wurde, vollständig in das Silica-Gel einweichen. Zu keinem Zeitpunkt während des Verfahrens sollte das Silica-Gel austrocknen.
10. Weiter oben im Beispiel Hexan hinzu, bis der Sammelbehälter unterhalb der Spalte fast voll ist (~ 4 mL).
    1. Erlauben Sie all das Hexan Silikagel eingeben, bevor Sie mit dem nächsten Lösungsmittel.
11. Legen Sie den mittleren Polarität Sammelbehälter unter der Spalte.
12. Fügen Sie DCM zu den oberen Rand der Spalte hinzu, bis der Sammelbehälter fast voll ist. Lassen Sie, alle von der DCM in den Sammelbehälter geben vor dem Start der nächsten Lösungsmittel.
13. Legen Sie den polar Sammelbehälter unter der Spalte.
14. Den oberen Rand der Spalte fügen Sie Methanol bis die abscheulichen Sammlung fast voll ist hinzu.