UV/Vis-Spektroskopie

1. kalibrieren Sie das Spektrometer

1. Schalten Sie die UV-Vis-Spektrometer und lassen Sie die Lampen zum Aufwärmen für einen angemessenen Zeitraum (ca. 20 min) um sie zu stabilisieren.
2. Füllen Sie eine Küvette mit dem Lösungsmittel für die Probe und stellen Sie sicher, dass außen sauber ist. Dies wird als eine leere dienen und helfen, leichte Verluste durch Streuung und Absorption durch das Lösungsmittel entfallen.
3. Legen Sie die Küvette in das Spektrometer. Achten Sie darauf, die Küvette richtig auszurichten, so oft die Küvette hat zwei Seiten, die sind für Handhabung (kann genutet) gedacht und sollen nicht durch Licht.
4. Nehmen Sie eine Lesung für den Rohling. Die Extinktion sollte minimal sein, aber Extinktion sollten künftige Proben abgezogen werden. Einige Instrumente könnten die leere Daten speichern und die Subtraktion automatisch durchführen.

2. führen Sie ein Absorptionsspektrum

1. Füllen Sie die Küvette mit der Probe. Um sicherzustellen, dass die Übertragung quantitativ ist, spülen Sie die Küvette zweimal mit der Probe und dann etwa ¾ voll zu füllen. Stellen Sie sicher, dass außen sauber von Fingerabdrücken usw. ist.
2. Legen Sie die Küvette in das Spektrometer in die richtige Richtung.
3. Decken Sie die Küvette um jede Umgebungslicht zu verhindern.
4. Sammeln Sie ein Absorptionsspektrum dadurch, dass das Instrument, um durch verschiedene Wellenlängen zu scannen und die Extinktion zu sammeln. Der Wellenlängenbereich eingestellt werden, mit Informationen über die spezifischen Probe, aber eine Reihe von 200 – 800 nm ist standard. Ein Diodenarray Instrument ist in der Lage, eine gesamte Absorptionsspektrum in einem Durchlauf zu sammeln.
5. Bestimmen Sie aus den gesammelten Absorptionsspektrum, das Absorption Maximum (λ_Max.). Die Sammlung von Spektren in λ_Max.eine Schätzung der Fehler zu wiederholen.
6. Um eine Kalibrierungskurve zu machen, sammeln Sie die UV-Vis-Spektrum einer Vielzahl von unterschiedlichen Konzentration Proben. Spektrometer sind oft im linearen Bereich beschränkt und werden nicht in der Lage, einen Extinktion-Wert größer als 1,5 zu messen. Wenn die Extinktion-Werte für die Stichprobe außerhalb des Instruments linearen Bereich sind, Verdünnen der Probe um die Werte innerhalb des linearen Bereichs zu erhalten.

(3) Kinetik Experimente mit UV-Vis Spektroskopie

1. UV-Vis kann für Kinetik Experimente verwendet werden, durch die Änderung der Extinktion im Laufe der Zeit zu untersuchen. Für ein Experiment Kinetik eine erste Meßwert der Probe.
2. Fügen Sie schnell das Reagenz um die chemische Reaktion zu starten.
3. Rühren sie gut um mit der Probe zu mischen. Wenn eine kleine Menge hinzugefügt wird, könnte dies in eine Küvette erfolgen. Alternativ mischen Sie das Reagenz mit Probe und gießen Sie schnell etwas in eine Küvette für eine Messung.
4. Die Extinktion bei der λ_Max. für den Analyten von Interesse im Laufe der Zeit zu messen. Wenn das Reagenz wird Messung verwenden (d. h. Absorption steigt da gibt es weniger Reagenz aufnehmen), dann der Zerfall der Ordnung der Reaktion zeigen wird.
5. Machen Sie mit Hilfe einer Eichkurve, ein Grundstück von Analyten Konzentrationszeit Vs, Umwandlung den Extinktion Wert in Konzentration. Von dort kann dieses Diagramm mit entsprechenden Gleichungen fit sein, um die Reaktion Rate Konstanten bestimmen.