Blutentnahme I

1. Retro-Orbital bluten

1. Ausrüstung
   1. Bereiten Sie eine Glasglocke oder Betäubungsmittel Induktion Kammer, eine betäubende Gas wie Isoflurane verwalten. Bei der Verwendung einer Glasglocke ist es unerlässlich, dass die flüssige Narkose nicht in Kontakt mit dem Tier zur Absorption durch die Haut zu vermeiden. Eine Plattform mit kleinen Löchern kann verwendet werden.
   2. Microhematocrit Rohre, die 50-75 Mikroliter halten werden bevorzugt. Mylar umwickelte Rohre sind weniger wahrscheinlich, zwischen den Fingern des Betreibers zu brechen und gilt als eine Sicherheitsmaßnahme.
   3. Mehreren Papier Handtuch dicken oder anderen isolierenden Materialien befinden sich auf der Arbeitsfläche, die Körperwärme des Tieres während des Verfahrens zu halten.
2. Vorbereitung und Positionierung des Tieres
   1. Das Tier ist mit einer Inhalation Narkose, wie Isoflurane in einer Glasglocke oder Gas Narkose Induktion, Effekt betäubt.
   2. Sobald das Tier vollständig betäubt ist, wird es entfernt und in seitlichen liegen.
   3. Das Auge ist indem man einen Finger auf die Oberseite des Kopfes und entlang der Unterkiefer ragte, und ziehen die Haut zurück und nach unten.
   4. Vermeiden Sie Druck auf die Luftröhre, wie das kann zusammenbrechen oder verdecken die Atemwege verursacht Tod durch Asphyxie.
3. Blutentnahme
   1. Die Microhematocrit ist in der medialen Augenwinkel des Auges platziert und kaudal gerichtet in einem Winkel von 30-45° von der Ebene der Nase.
   2. Druck und leichtes Drehen der Hämatokrit-Röhre. Dies wird Schnitt durch die Bindehaut Membranen und Bruch der okulären Plexus.
   3. Das Blut fließt in die Hämatokrit-Röhre durch Kapillarwirkung.
   4. Zu vermeiden, schieben so tief, dass Sie den Knochen an der Rückseite der okulären Hohlraum getroffen.
   5. Sobald Blut zu fließen beginnt, behalten Sie Druck, ragte Auge bei.
   6. Um mehrere Röhrchen Blut zu sammeln, es ist nicht notwendig, das nächste Rohr in das Okular Plexus, statt, wie das Blut fließen weiterhin und können gesammelt werden, wie es aus der medialen Augenwinkel kommt.
   7. Um die Blutung zu stoppen, die Haut und lassen Sie das Auge in die Normalposition zurück. Druck auf die Umlaufbahn zur Blutstillung zu gewährleisten.

Abbildung 1. Retro-orbital Blutentnahme bei Mäusen.

(2) Tail bluten Verfahren: Tail Snip und Schweif Nick

1. Ausrüstung
   1. Einem sterilen Skalpellklinge, vorzugsweise eine Nummer 11 Blade oder einer Rasierklinge einseitig wird verwendet, um die ersten Amputation für die Heck-Snip-Methode zu machen. Schere sollte nicht verwendet werden, da der Schnitt gemacht durch Scheren damit Gerinnung und Verringerung der Durchblutung zu fördern Zerkleinern ist. Für das Heck-Nick-Verfahren wird eine Nummer 11 oder 15 Skalpellklinge verwendet, um den Schnitt zu machen.
   2. Eine Zurückhaltung-Rohr, das Ende der Maus zuzugreifen ist bereit.
   3. Saugfähiges Küchenpapier oder Mull dienen als Substrat für die Durchführung der Schweif Snip.
   4. Röhrchen oder Hämatokrit Röhren sind ebenfalls erforderlich.
   5. Blutstillenden Puder sollte zur Blutstillung Unterstützung verfügbar sein.
2. Zurückhaltung
   1. Das Tier wird in das Rohr so platziert, dass das Heck zugänglich ist. Für Broome Typ Wachstumsbefürworter wird das Tier Hinterteil zuerst in das Rohr gezogen. Für andere Röhren befindet sich das Tier zuerst Kopf.
   2. Tiere sind in das Rohr gesichert, so dass sie nicht umdrehen oder der Rute zurückziehen.
   3. Einige Mäuse werden die Rute Snip und Blut-Sammlung mit minimalem manuellen Zurückhaltung zulassen, wenn sie berechtigt sind, eine raue Oberfläche zu greifen.
   4. Einige Ratten benötigen Inhalation Anästhesie für diese Methode der Blutentnahme.
3. Blutentnahme
   1. Die Rute wird mit lauwarmem Wasser entfernen Schmutz und leichten Vasodilatation verursachen abgewischt. KEIN verwenden Sie heißes Wasser.
   2. Für den Schweif Snip das Heck verlängert, und zum Ende der Rute (0,5-1 mm bis zu 2 mm für Ratten und Mäuse) wird mit dem Skalpellklinge geschnitten.
   3. Für den Heck-Nick, erstreckt sich das Heck, und machte einen Schnitt mit dem Skalpellklinge ca. 2/3 der Abstand von der Bürzel, direkt über die seitlichen Schweif Vene.
   4. Das Heck kann vom Rumpf bis zur Spitze, Durchblutung fördern streichelte; Allerdings wird dadurch die Qualität der Probe verringern.
   5. Das Blut aus der Spitze oder Hämatokrit Röhren mit Nick gesammelt oder erlaubt, in einen Sammelbehälter Tropfen.

(3) kardiale Blutentnahme

1. Ausrüstung
   1. Für eine Maus ist eine 3 cc Spritze mit einer Spurweite von 22-25 x 1" Nadel bevorzugt. Kleinere Spritzen haben nicht die gleichen Gegendruck und Blutentnahme schwieriger machen können. Kleiner als 25 Gauge Nadeln den Fluss von Blut, was zu erhöhter Blutgerinnung beschränken und Schäden an den Blutzellen. Nadeln kürzer als 1" können nicht erreichen das Niveau des Herzens, bei der Annäherung von der Membran an.
   2. Für eine Ratte ist eine 10-12 cc Spritze mit einer 18-Gauge x 1.5" Nadel bevorzugt. Abhängig von der Größe der Ratte eine kleinere Spritze kann nicht halten das gesamte Blutvolumen gesammelt werden, und somit die Spritze während des Verfahrens geändert werden. Kleiner als 20 Gauge Nadeln beschränken den Fluss des Blutes, was zu erhöhter Blutgerinnung. Nadeln kürzer als 1,5" können nicht erreichen das Niveau des Herzens, bei der Annäherung von der Membran an.
   3. Eine Blut-Sammelrohr von ausreichender Größe wird verwendet, um das Blut gesammelt zu halten.
2. Zurückhaltung
   1. Angemessene Zurückhaltung ist entscheidend für den Erfolg dieser Methode. Das Tier wird durch das Genick mit dem Körper hängen senkrecht gehalten. Es ist wichtig, dass der Körper gerade um Durchbiegung des Herzens oder eine Verdrehung der Brust zu verhindern.
   2. Eine alternative Position ist dorsal liegen, wenn die Nadel zwischen den Rippen des Tieres links platzieren. Dies ist besonders nützlich für sehr große Ratten oder wenn mehrere Tiere müssen entlüftet werden.

Abbildung 2. Kardiale Blutentnahme mit Maus vertikal gehalten.

3. Blutentnahme
   1. Der Ansatz von der hinteren Seite, Punktion der Membran wird leichter erreicht, wenn die Maus oder Ratte durch das Genick vertikal gehalten wird.
      1. Die Nadel wird in die Kerbe nur auf der linken Seite des Tieres Xiphoid vorgeschoben.
      2. Die Nadel sollte parallel zur Wirbelsäule und nur unter den Rippen gelegt.
      3. Das Herz befindet sich etwa auf dem Niveau des Ellenbogens.
      4. Legen Sie die Nadel, Abschrägung, in der Brust, und das Herz zu durchbohren.
      5. Wenden Sie leichten Gegendruck mit der Spritze. Wenn die Nadel im Herzen ist, fließt Blut in die Spritze.
      6. Warten Sie, bis Blut Spritze gefüllt hat, vor dem Hinzufügen von zusätzlichen Gegendruck auf die Spritze.
   2. Die seitlichen Ansatz von der linken Seite des Tieres erfordert Positionierung des Tieres in dorsal liegen.
      1. Der Einstieg ist gegen den Punkt des Ellenbogens auf der Brustwand gemessen. Das Herz befindet sich etwa auf dem Niveau des Ellenbogens.
      2. Die Nadel ist eingefügten senkrecht zur Ebene der Tabelle auf einen Punkt in der Mitte auf der Brustwand dorsoventrally gemessen.
      3. Legen Sie die Nadel, Abschrägung, in der Brust, und das Herz zu durchbohren.
      4. Wenden Sie leichten Gegendruck mit der Spritze. Wenn die Nadel im Herzen ist, fließt Blut in die Spritze.
      5. Warten Sie, bis Blut Spritze gefüllt hat, vor dem Hinzufügen von zusätzlichen Gegendruck auf die Spritze.

Abbildung 3. Kardiale Blutentnahme mit Maus in Position dorsal liegen.

4. Technische Tipps
   1. Die normale Herz liegt mit der Spitze nach links zeigt. In seltenen Fällen kann das Herz aufgehoben werden, was zu Schwierigkeiten bei der Punktion des Herzes.
   2. Übermäßigen Druck auf die Spritze kann das Herz Verschließen der Nadel Abschrägung und stoppen Blutfluss in die Spritze zusammenbrechen.
   3. Anwenden von Gegendruck und es immer wieder die Freigabe initiiert Blutgerinnung in der Spritze.
   4. Sanft Druck auf der Leber kann zusätzliche Blutvolumen in den Blutkreislauf, so dass es zur Auszahlung zur Verfügung erzwingen.

(4) hintere Hohlvene Blutentnahme

4. Ausrüstung
   1. Eine TB-Spritze mit einem 25-29-Gauge-Nadel ist für die Blutentnahme in der Maus verwendet. Für Ratten ist eine 10-12 cc Spritze mit einer Spurweite von 22-25 x 1" Nadel erforderlich.
   2. Eine chirurgische Plattform, Dissektion Tablett oder eine andere Oberfläche, das Tier zu sichern ist zusammen mit Krawatten, Klebeband oder Pins erforderlich, um die Gliedmaßen in Position zu bringen.
   3. Injizierbare Anästhesie oder Inhalation Anästhesie ist notwendig. Wenn Sie einatmen Anästhesie verwenden, ist es wünschenswert, dass die Betäubung über eine Präzision Verdampfer mit einem Prüfkopf geliefert werden. Verfahren ist, dass mit einer Induktion Kammer ohne zusätzliche betäubende Gas-Lieferung nicht zur Verfügung ausreichend Zeit stellen wird für die Blutabnahme abgeschlossen sein, bevor das Tier belebt.
   4. Iris-Schere für die Maus oder OP-Saal Sharp-stumpfe Scheren für die Ratte sind erforderlich, zusammen mit kleinen atraumatische Daumen Zange und einem 2 "x 2" Gaze-Schwamm.
5. Zurückhaltung
   1. Wenn das Tier vollständig betäubt ist, vom Zeh kneifen oder Schweif Prise festgelegten, befindet sich das Tier im dorsalen liegen.
   2. Die Gliedmaßen sind auf der Plattform mit Klebeband oder Stifte gesichert. Die Gliedmaßen sollte vom Körper ausgedehnt werden.
6. Widerrufsrecht
   1. Die Haut wird angehoben und ein kleiner quer-Schnitt erfolgt durch die Haut oberhalb des Beckens bei Frauen oder oberhalb der Vorhaut bei Männern.
   2. Der Punkt der Schere wird in den Schnitt gelegt, und ein Mittellinie Schnitt durch die Haut von der Becken/Vorhaut, die Xiphoid gemacht.
   3. Die Haut spiegelt sich seitlich an jeder Seite. Stumpfe Dissektion möglicherweise notwendig, um ihn aus der darunter liegenden Muskeln zu lösen.
   4. Der Muskel wird angehoben, und ein kleiner quer-Schnitt erfolgt durch den Muskel oberhalb der Haut Schnitt.
   5. Der Punkt der Schere wird in den Bauchraum gelegt und ein Mittellinie Schnitt erfolgt durch den Muskel an der Xiphoid. Achten Sie darauf, die Schere Punkt nach oben, um zu vermeiden, schneiden alle Organe Winkel.
   6. Schnitt quer entlang der Kurve der Rippen auf jeder Seite. Üben Sie besondere Vorsicht walten lassen, nicht, die Leber zu durchbohren.
   7. Sanft bewegen den Darm des Tieres links um die hintere untere Hohlvene verfügbar zu machen.
   8. Legen Sie einen Tupfer auf die Leber und ruhen Sie zeige- und Mittelfinger auf die Leber.
   9. Mit der anderen Hand die Nadel, schräge nach oben, in die Vena Cava auf halbem Weg zwischen der Kreuzung der renalen Schiffe und den Beckenkamm Bifurkation.
   10. Ziehen Sie langsam das Blut während der Druck auf die Leber.

Abbildung 4. Blutentnahme aus der hinteren Hohlvene.