Name: Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus-Milz mit dem gentleMACS Dissociator (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Lernen Sie die automatisierte Gewebedissektion von Mäusemilzen mit dem gentleMACS Dissociator. Diese Methode erzeugt lebensfähige Einzelzellsuspensionen für Immunologie und Zellbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Einführung in die Geräte <ol><li> Das Gewebe wird sanft dissoziiert, mit violetten C Tubes zu tragfähigen Einzel-Zell-Suspensionen. </li><li> Die PBS / BSA EDTA-Puffer wird verwendet, um die Zellen zu distanzieren. Der Puffer wird durch Zugabe von 1 Teil BSA Stammlösung auf 20 Teile autoMACS Spüllösung EDTA vorbereitet. </li><li> Das MACS Pre-Separation Filter sind so, dass die dissoziierten Gewebeproben frei von allen Zellklumpen verwendet werden, die Förderung der erfolgreichen MACS Trennung und anschließender Analyse. </li></ol> Dissoziation der Milzzellen <ol><li> Whole Milz werden in Einzel-Zellsuspensionen von Splenozyten mit dem gentleMACS Dissociator disscociated. </li><li> Zu Beginn des Verfahrens, laden Sie die C Tube mit einem Volumen von Puffer nach der Masse der Milz. Eine gesunde Milz eines jungen erwachsenen weiblichen BALB / c Maus wiegt etwa 80-120 mg. Jeder von 1 bis 2 Milzen dieser Masse benötigen 3 ml Puffer. Milz von älteren Tieren oder Tieren mit Infektionen sind oft größer und muss in Puffer abgewogen werden. Der Puffer Volumina müssen entsprechend skaliert werden. Nicht mehr als insgesamt Puffer Volumen von 10 mL. </li><li> Fügen Sie die Milz seziert, um die C Tube enthält 3 ml Puffer. </li><li> Stellen Sie sicher, dass die C Tubenkappe dicht ist und bringen Sie die C Rohr zur dissociator der Sockel nach unten. </li><li> Schalten Sie den dissociator. Für 1-2 Milz, wählen Sie Programm m_spleen_01. Das Programm dauert 56 Sekunden dauern. Wenn die Anzahl der Milz ist größer, benutzerfreundliches Programm m_spleen_04; dieses Programm kann verwendet werden für bis zu 720 mg Milzgewebe. </li><li> Nach Abschluss des Programms der einheimischen Milzgewebe wird in eine Splenozyten Federung dissoziiert. </li><li> Spin, den ganzen Zellsuspension bei 300xg bei Raumtemperatur für etwa 30 Sekunden. Dadurch wird sichergestellt, dass der Rotor und Stator aller Zellen, die an der Unterseite der C Rohr gesammelt werden, werden freigegeben. </li><li> Entfernen Sie die Probe durch das Septum verschlossenen Öffnung in der C Tubenkappe mit einem 1000 Mikroliter Pipette. </li></ol> Filtrationsschritt <ol><li> Zu Beginn der Filtration, gelten die dissoziierten Gewebe um die Pre-Separation Filter oder eine Zelle Sieb mit 30 um Porengröße. Das Sieb sollte ein 15-ml-Tube für 1-2 Milz oder ein 50-ml-Tube fit für mehr als 2 Milz. </li><li> Lassen Sie die Zellsuspension durch. Dann waschen Sie den Filter, indem 5 ml Puffer. </li><li> Nun Zentrifuge das Rohr mit der Zellsuspension bei 300xg, bei Raumtemperatur für 10 Minuten, um alle Splenozyten in der Milz Zellpellet zu sammeln. </li><li> Nun, dass wir ein Pellet aus dissoziierten Milzzellen haben, müssen wir saugen den Überstand und Zellpellet in einer entsprechenden Menge an Puffer. </li></ol> Spleen Dissoziation mit dem gentleMACS Dissociator wird ein hoher Anteil von lebensfähigen Splenozyten, die mittels Durchflusszytometrie mit dem MACSQuant Analyzer demonstriert wird. Tote Zellen werden durch Propidiumiodid gefärbt. In dem Beispiel vorgesehen, zeigt die Vorderseite streuen Dot-Plot die vorbereitete Splenozyten.

Alle Protokolle und Datenblätter finden Sie unter<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

Zur Vermeidung von langwierigen und oft schmerzhaft manuelle Dissoziationen, ermöglicht die gentleMACS Dissociator man Gewebe sehr effizient distanzieren unter kontrollierten und reproduzierbaren Bedingungen. Die Gewebedissoziation Verfahren ist schonend zu den Zellen und liefert Zellsuspensionen mit einer hohen Überlebensrate. Die gentleMACS Dissociator in Kombination mit C Tubes ist für die Herstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus verschiedenen Geweben entwickelt. Das Gerät ist mit einer Reihe von voreingestellten Programmen zur Maus-Milz, Leber, Lunge oder Nervengewebe distanzieren ausgestattet. Die Palette der Programme und Protokolle wird laufend erweitert werden, um zusätzliche Gewebe umfassen.

<table><tbody><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Start-Kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>C-Röhrchen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>13-mL-Röhrchen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-596</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; Spüllösung</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; BSA-Stocklösung</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Vor-Trennfilter</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSQuant-Analysator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-197</td><td></td></tr><tr><td>Propidiumiodid-Lösung</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

erstellung von einzel-zellsuspensionen aus maus-milz mit dem gentlemacs dissociator

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Einzel-Zell-Suspensionen sind eine Voraussetzung für Experimente in Zellseparation, Zellanalyse und Zellkultur. Zur Vermeidung von langwierigen und oft schmerzhaft manuelle Dissoziationen der gentleMACS Dissociator ermöglicht es, Gewebe sehr effizient distanzieren unter kontrollierten und reproduzierbaren Bedingungen. Die gentleMACS Dissociator optimal distanzieren Mäusemilz, kombiniert zeitsparende und Normung Benutzer-Sicherheit. Dieses Video beschreibt, wie Sie mit der Maus Milz mit dem gentleMACS Dissociator, eine automatisierte Bank-Top-Gerät, das mechanisch stören können Gewebe mit speziellen Röhren, um lebensfähige Zellsuspensionen produzieren zu distanzieren. Nach Dissoziation, sind Milz gefiltert, zentrifugiert und resuspendiert für weitere Anwendungen.

Dieses Video beschreibt eine einfache, zeitsparende Technik für die automatisierte Gewebedissoziation mit dem gentleMACS Dissociator zu Single-Zellsuspensionen von Maus-Splenozyten vorzubereiten.

Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus-Milz mit dem gentleMACS Dissociator

Einzelzellsuspensionen sind eine Voraussetzung für Experimente zur Zellseparation, Zellanalyse und Zellkultur. Um mühsame und oft schmerzhafte manuelle...

In diesem Video-Protokoll sehen Sie, wie man Mauszellen mit Gentle Max aufspaltet, einem automatisierten Tischgerät, das Gewebe mechanisch mithilfe spezieller Röhrchen zerkleinern kann, um lebensfähige Zellsuspensionen zu erzeugen. Nach der Aufspaltung werden die Milzen mit Max Pres-Trennfiltern filtriert, zentrifugiert und für weitere Anwendungen suspendiert. Hallo, mein Name ist Melanie mlu.Ich bin Wissenschaftler bei Milton Biotech hier im BE Lab Park in Deutschland. Heute zeige ich Ihnen die Herstellung einer Einzelzell-Suspension aus der Mausmilz mithilfe der GenX-Dissociation. Die GenX-Dissociation ermöglicht die sehr einfache und schnelle Herstellung einer Einzelzell-Suspension.Beginnen wir also. Um langwierige und oft schmerzhafte manuelle Dissoziationen zu vermeiden, ermöglicht der gentle max di associator eine sehr effiziente Dissoziation von Gewebe unter kontrollierten und reproduzierbaren Bedingungen. Das Gewebe wird schonend mit violetten C Tubes in lebensfähige Einzelzell-Suspensionen dissoziiert.Das C-Röhrchen verfügt über eine mit einem Septum verschlossene Öffnung in der Mitte des Verschlusses, wodurch man Pipettieren kann, während die Sterilität stets gewahrt bleibt. Um die dissoziierten Zellen zu suspendieren, müssen Sie den geeigneten P-B-S-B-S-A-E-D-T-A-Puffer verwenden. Der Puffer wird hergestellt, indem man ein Teil Rinder-Serumalbumin-Stammlösung (BSA) zu 20 Teilen AutoMax-Sperrlösung mit EDTA hinzugibt.Mithilfe der Max-Pres-Trennfilter werden dissoziierte Gewebeproben von allen Zellklumpen befreit, was eine erfolgreiche maximale Trennung und anschließende Analyse ermöglicht. Um das Verfahren zu beginnen, füllen wir die C-Schlauch mit einem Puffer-Volumen. Entsprechend der Masse der Milzen wiegt eine gesunde Milz einer sechs bis sieben Wochen alten weiblichen Biopsie-Maus etwa 80 bis 120 Milligramm.Jede ein bis zwei Milzen dieser Masse benötigen drei Milliliter Puffer. Überschreiten Sie kein Gesamtvolumen von 10 Millilitern. Wir können nun unsere dissezierte Milz in die C-Röhre geben, die drei Milliliter Puffer enthält. Milzen von älteren Tieren oder Tieren mit Infektionen sind oft größer und müssen im Puffer gewogen werden.Die Puffervolumina müssen dann entsprechend skaliert werden, dürfen jedoch erneut ein Gesamtvolumen von 10 Millilitern nicht überschreiten. Stellen Sie nun sicher, dass die Kappe des C-Röhrchens fest verschlossen ist, und befestigen Sie das C-Röhrchen am Dissoziator. Bei geschlossener Kappe schalten Sie den Dissoziator für ein bis zwei Milzen ein und wählen Programm M spleen oh one. Das Programm dauert 56 Sekunden bis zur Fertigstellung; bei einer größeren Anzahl von Milzen verwenden Sie Programm M spleen oh four.Dieses Programm kann für bis zu 720 Milligramm Milzgewebe verwendet werden. Nach Abschluss des Programms wird das native Milzgewebe in eine PLE-Zytosuspension dissoziiert, die wie folgt aussieht: Zentrifugieren Sie kurz, um die Probe am Boden des Röhrchens zu sammeln. Dadurch wird sichergestellt, dass Rotor und Stator von allen Zellen befreit werden, die sich am Boden des C-Röhrchens angesammelt haben.Wir entnehmen die Probe über die mit einem Septum verschlossene Öffnung in der C-Rohrkappe mithilfe einer 1000-Mikroliter-Pipette. Um den Filtrationsschritt zu beginnen, geben wir das dissoziierte Gewebe auf einen Vortrennfilter oder ein Sieb mit einer Porengröße von 30 Mikron. Das Sieb sollte in ein 15-Milliliter-Röhrchen für ein bis zwei Milzen oder in ein 50-Milliliter-Röhrchen für mehr als zwei Milzen passen.Lassen Sie die Zellsuspension durchlaufen und waschen Sie anschließend den Filter, indem Sie fünf Milliliter Puffer hinzufügen. Zentrifugieren Sie nun das Gefäß mit der Zellsuspension bei 300 G bei Raumtemperatur für 10 Minuten, um alle Zellen in einem Milzzell-Pellet zu sammeln. Nachdem wir nun ein Pellet dissoziiierter Zellen erhalten haben, müssen wir den Überstand abpipettieren und das Zellpellet in einer geeigneten Menge Puffer für die Milzdissoziation resuspendieren.Die Verwendung des gentle max führt zu einem hohen Prozentsatz an lebensfähigen PLE-Zellen, was mittels Durchflusszytometrie unter Verwendung des max quant nachgewiesen wird. Tote Zellen werden mit Propidiumiodid gefärbt und im beigefügten Beispiel dargestellt. Das vorwärts-seitwärts gestreute Punktediagramm zeigt vorbereitete SP-Zellen. Okay.Ich habe Ihnen gezeigt, wie man das Milzgewebe mithilfe dieser sanften X-Dissociation dissociiert. Bei Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, die Menge des Puffers an die Probengröße anzupassen und das geeignete Gentle-X-Programm auszuwählen. Gut, das war's.Viel Erfolg bei Ihrem Experiment.

preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-spleen-with-gentlemacs

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wir beschreiben die Herstellung von T-Zell-Wachstumsfaktor für die in vitro Expansion von Antigen-spezifischen T-Lymphozyten-Ratte-Linien verwendet.

Vorbereiten T Cell Growth Factor von Rat Splenozyten

Distanziert Zellen aus bestimmten Gewebearten erfordert spezifische Parameter für die Gewebe-Agitation um ein hohes Volumen an lebensfähigen, kultivierbaren Zellen zu erhalten. Die Miltenyi gentleMACS dissociator optimiert diese Aufgabe mit einem einfachen, praktischen Protokoll. In dieser Veröffentlichung wird die Verwendung dieser Vorrichtung auf das Lungengewebe erklärt.

Standardisierte Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Lungengewebe mit dem gentleMACS Dissociator

Distanziert Zellen aus bestimmten Gewebearten erfordert spezifische Parameter für Gewebe aggitation zu einem hohen Volumen von lebensfähigen, kultivierbaren Zellen zu erhalten. Die Miltenyi gentleMACS Dissociator optimiert diese Aufgabe mit einem einfachen, praktischen Protokoll. In dieser Veröffentlichung wird die Verwendung dieser Vorrichtung auf nerual Gewebe erklärt.

Generierung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Nervengewebe

Dieses Video zeigt ein Verfahren für den adoptiven Transfer von mit hohem Salzgehalt behandelten Antigen-präsentierenden dendritischen Zellen (DCs) in Mäuse. Murine CD11c+ dendritische Zellen (DCs) werden einem Medium ausgesetzt, das hohe Mengen an Natrium enthält, und bilden in den Zellen Isolevuglandin (IsoLG)-Protein-Addukte. Diese Addukte dienen als Neoantigene und werden auf der Oberfläche von DCs präsentiert. Die mit hohem Salzgehalt behandelten Zellen werden durch adoptiven Zelltransfer...

Ein Verfahren zur Behandlung dendritischer Zellen mit hohem Salzgehalt und deren adoptiver Transfer in Mäuse

Das Video zeigt die Herstellung einer Einzelzellsuspension von Immunzellen aus einem murinen Gehirngewebe. Es beinhaltet eine enzymatische Verdauung, um Zellen aus dem Gehirngewebe freizusetzen, gefolgt von einer Dichtegradientenzentrifugation, um die Immunzellen basierend auf ihrer Dichte zu isolieren und die Einzelzellsuspension zu erhalten.

Herstellung einer einzelligen Suspension von Immunzellen aus murinem Hirngewebe

Durchflusszytometrie kann genutzt werden, um den Zustand des Chromatins innerhalb der T-Zellen zu beurteilen. Dieses Protokoll ermöglicht es Wissenschaftlern, Nachweis Chromatindekondensation während der T-Zellaktivierung durch einen Anstieg in der mittleren Fluoreszenz-Intensität (MFI) von fluoreszierenden Histone H3 Antikörper nachgewiesen interpretieren...

Die Verwendung von Durchflusszytometrie, um den Zustand von Chromatin in T-Zellen bewerten

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur dendritische Zellen aus murinen Milz von magnetischen Zellsortierung und späteren Adoptiveltern Übertragung ins naive Mäuse zu isolieren. Das Modell von hohem Salzgehalt aktivierten dendritischen Zellen wurde gewählt, um die schrittweisen Verfahren Adoptiv-Transfer und Durchflusszytometrie zu erklären.

Isolation und Adoptiveltern Übertragung von hohen Salz behandelt Antigen-präsentierende dendritische Zellen

Wir beschreiben hierin eine einfache Analyse der Heterogenität des murinen Immun-B-Zell-Kompartiments im Peritoneum-, Milz- und Knochenmarkgewebe mittels Durchflusszytometrie. Das Protokoll kann angepasst und auf andere Mausgewebe ausgedehnt werden.

Durchflusszytometrische Charakterisierung der Entwicklung von Murinen B-Zellen

Hier präsentieren wir eine einfache und effiziente Methode, um lebende meiotische und postmeiotische Keimzellen von erwachsenen Maushoden zu isolieren. Mit einem zytotoxischen, violett-erregten DNA-Bindungsfarbstoff und fluoreszenzaktivierter Zellsortierung kann man hoch angereicherte spermatogene Zellpopulationen für viele nachgelagerte Anwendungen isolieren.

Isolierung von murinen Spermatogenic Cells mit einem violett-erregten Zellpermeable DNA Binding Dye

Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll zur Aggregation und Verkapselung von Milzzellen in einer halbfesten Basalmembranmatrix. Basalmembranmatrix-Konstrukte können in dreidimensionalen Kulturen zur Untersuchung der Organoidentwicklung oder für In-vivo-Transplantations - und Geweberegenerationsstudien verwendet werden.

Basalmembranmatrix Verkapselte Zellaggregation zur Untersuchung der Milzgewebebildung von Mäusen

Hier stellen wir ein Protokoll zur Isolierung von Milz-Exosomen von Mäusen vor, wobei eine Kombination aus Verdau mit Kollagenase Typ I und Ultrazentrifugation verwendet wird.

Isolierung und Charakterisierung von Exosomen aus Milzgewebe der Maus

Lernen Sie die automatisierte Gewebedissektion von Mäusemilzen mit dem gentleMACS Dissociator. Diese Methode erzeugt lebensfähige Einzelzellsuspensionen für Immunologie und Zellbiologie.

Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus-Milz mit dem gentleMACS Dissociator

Weitere Videos entdecken