What are the four stages of the rodent estrous cycle?

The rodent estrous cycle lasts 4-5 days and consists of four stages: metestrus, diestrus, proestrus, and estrus. Estrus is the ovulatory phase when females are ready to conceive. Proestrus immediately precedes estrus and also indicates fertility. These stages can be identified through visual examination of the vaginal opening or more accurately through vaginal cytology analysis.

How is vaginal cytology used to determine estrous cycle stage?

Vaginal cytology involves collecting cell samples via lavage or swabbing. Lavage uses a sterile pipette tip with water to gently flush the vaginal canal 4-5 times. Swabbing uses a moistened cotton applicator rolled against the vaginal wall. Cells are transferred to a glass slide, dried, stained with Wright-Giemsa stain, and examined microscopically to identify the cycle stage based on cell type and appearance.

What is a copulatory plug and why is it important in rodent breeding?

A copulatory plug is a whitish mass of vaginal fluid and semen that persists 12-24 hours after mating. It can be detected by visual inspection or by gently inserting a blunt probe into the vaginal opening, where it will impede advancement within 0.5 cm. The plug's presence confirms mating occurred, though it does not guarantee pregnancy. Finding a plug establishes embryonic day zero for pregnancy dating.

What are the differences between intensive and non-intensive breeding schemes?

In intensive breeding, males remain with females and pups, allowing immediate conception after birth. This maximizes breeding output but causes continuous lactation and gestation stress on females. Non-intensive breeding separates pregnant females from males until pups are weaned, reducing female stress. Weaning timing differs: non-intensive at 21-28 days, intensive at day 20 to prevent older pups from meeting the next litter.

How do inbreeding and genetic modifications affect rodent breeding performance?

Outbred animals are more hardy and vigorous, producing larger and stronger litters compared to inbred animals. Genetically modified animals tend to be less hardy and fertile, with some mutations causing pup lethality before or shortly after birth. Environmental factors like temperature, humidity, lighting, noise, and vibrations also significantly reduce breeding efficiency in laboratory rodent colonies.

What care is needed for newly weaned rodent pups?

Newly weaned pups should be checked daily to ensure they are thriving. Male and female pups must be separated at weaning since rodents can mate as young as 8 weeks. Pups should not be housed singly when possible; single pups should be grouped with same-gender pups from other litters. Food should be placed on the cage floor for 7-10 days to aid transition to solid chow, and water bottles should be provided to prevent dehydration.

How do researchers use in-house breeding to study genetic and developmental effects?

In-house breeding enables researchers to develop homozygous knockout mice by selectively breeding animals with altered genes. It also allows study of prenatal exposure effects; for example, researchers can administer test compounds during specific embryonic days and examine resulting fetal tissues. Additionally, controlled breeding facilitates investigation of postpartum disorders by manipulating maternal stress and observing effects on maternal aggression and care behaviors.

Grundlagen der Zucht und Entwöhnung

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1. Informationen erforderlich, wenn Tiere Paarung umfasst Stamm/Lager des Tieres, die Nutzung der richtigen Nomenklatur, Geburtsdaten der Züchter männliche und weibliche und dem Einstellungsdatum. Genaue Protokollierung ist zwingend mit Brutkolonien.

(2) Geschlechtsbestimmung von Mäusen und Ratten erfolgt durch den Vergleich der anogenitalen Entfernungen. Bei Frauen ist der Abstand zwischen den Anus und die äußeren Genitalien kürzer als bei Männern. Das Vorhandensein von einer scrotal Sac bei männlichen Tieren ist ein weiterer Sex-Indikator.

(3) auswählen und Einrichten der Verknüpfungsplan

Hinweis: Es gibt zwei Paarung Systeme, die verwendet werden können.

Proestrus/Brunst zeitlich Paarung: Diese Methode beruht auf Gemüsemesser Weibchen mit Männchen zum Zeitpunkt der maximalen Empfänglichkeit und Fruchtbarkeit.
1. Estrous Zyklus muss überwacht werden, bei den Weibchen, entweder durch Sichtprüfung der externen Genitalien für Änderungen, die bezeichnend für Proestrus und estrous sind, oder durch Zytologie von Vaginalsekret (siehe unten).
2. Wenn ein Weibchen in Proestrus oder Östrus fest entschlossen ist, sie mit einem Mann am Ende des Tages, paart sich wie Paaren sich die Tiere in der Regel in der Nacht.
3. Am nächsten Morgen wird das Weibchen auf ein copulator Stecker (siehe unten) untersucht. Wenn keine Steckdose vorhanden ist, kann das Weibchen mit den männlichen während des Tages und überprüft nach einem copulator Stecker am Ende des Tages bleiben. Alternativ, wenn feststeht, dass sie nicht mehr in Proestrus oder Brunst ist, wird sie aus dem Käfig Zucht entfernt.
Random zeitlich Paarung: Diese Methode basiert auf der Tatsache der Estrous Zyklus von Nagetieren ist sehr kurz, 4-5 Tage lang.
1. Für diese Methode Verpaarungen können jederzeit eingerichtet werden, und die Weibchen sind dann für copulator Stecker jeden Morgen und Abend bis ein Stecker beobachtet wird überprüft.
2. Ein Weibchen paart sich mit einem Mann am Abend.
3. Sie wird auf einem copulator Stecker am Anfang und Ende eines jeden Tages bis ein Stecker beobachtet wird geprüft. Häufig dauert es 3 oder mehr Tage für einen Stecker gesehen werden, wenn Sie diese Methode verwenden.

(4) Vorhersage Schwangerschaft

Da Abtasten der Welpen schwierig bis später während der Schwangerschaft, um Tag 10-12, wurden kommerzielle Ultraschallsysteme für Nager entwickelt; Allerdings haben nur wenige Tierversuche Einrichtungen dieser Technologie. Daher sind Visualisierung der copulator Stecker, Beobachtung von vaginalen Änderungen oder vaginale Zytologie häufig verwendet, um zu unterstützen mit der Vorhersage der wenn ein Weibchen einen Wurf (siehe unten) konzipiert wurde. Keines dieser Verfahren sind jedoch in der Lage, die Schwangerschaft zu bestätigen. Sobald ein copulator Stecker beobachtet wird, sollte das Weibchen auf Anzeichen einer Schwangerschaft, wie Gewichtszunahme überwacht werden.

5. Bestimmung der Phase des Estrous Zyklus

Visuelle Inspektion
Hinweis: Zur zeitgesteuerten Paarung von Mäusen und Ratten, visueller Beobachtung der Vagina für Änderungen, die bezeichnend für Proestrus und Brunst sind ist die schnellste Methode zur Bestimmung der Estrous Zyklus-Phase, und es erfordert keine spezielle Ausrüstung.
1. Bei der Bewertung des Estrous Zyklus mit der visuellen Methode ist es wichtig, die Sichtprüfung in der gleichen Gegend in Bezug auf Beleuchtung, durchzuführen, wie die Lichtquelle kann die wahrgenommene des vaginalen Gewebe Farbe und Auswertung erschweren. Zum Beispiel die violette Farbton gegossen von LED-Leuchten visuelle Erkennung wird dadurch erschwert.
2. Um die Phase des Estrous Zyklus durch visuelle Beobachtung zu bewerten, muss jede Maus manuell durch den Schweif mit den Vorderpfoten ruht auf einem Käfig Deckel zurückgehalten werden.
3. Die vaginale Öffnung jedes Weibchen wird anhand der Zustand des Gewebes rund um den vaginalen Bereich und die Größe der vaginalen Öffnung. ²
  1. Während Proestrus die vaginale Öffnung ist breit und zeichnet sich durch Schwellung des umgebenden Gewebes. Das Gewebe ist in der Farbe rosa und sehr feucht. Oft gibt es Falten oder Rillen an den dorsalen und ventralen Rändern der Öffnung.
  2. Während der Brunst die Schwellung des Gewebes rund um die vaginale Öffnung wird reduziert und das Gewebe sind nicht so feucht und rosa.
  3. Während Metestrus die vaginale Öffnung ist minimal und es ist vernachlässigbar Schwellung.
  4. Während Diestrus es gibt keine Schwellung der Gewebe um den vaginalen Bereich, und die vaginale Öffnung ist klein und geschlossen.
Vaginale Zytologie
Wie Mäuse und Ratten polyestrous sind, ist die Brunst-Zyklus-Länge sehr kurz, reicht von 4 bis 5 Tagen. Manchmal ist es notwendig, alle vier Phasen des estrous zu identifizieren: Proestrus, Brunst, Metestrus und Diestrus. Vaginale Zytologie ist eine sehr präzise Methode, um diese Phasen zu bestimmen. Es gibt auch zwei Methoden der Probenentnahme: die nicht-invasive Methode der vaginalen Lavage und die invasive Methode der vaginalen Kanal zu schrubben.
1. Vaginale lavage
  1. Benötigten Materialien sind sterile 200 µl Pipetten Spitzen, Latex Lampen, sterile doppelt destilliertes Wasser (DdH₂0) und Glas-Objektträger zu reinigen.
  2. Legen Sie eine Latex-Glühbirne am Ende eine sterile 200 µl Spitze. Ca. 100 µl steriler DdH₂O in der Pipette aufstellen.
  3. Heben Sie die Maus aus dem Käfig, und legen Sie sie auf Draht-Bar-Käfig-Spitze mit ihrem Endstück in Richtung zu Ihnen.
  4. Fest greifen Sie das Heck und erhöhen Sie die Hinterhand der Maus. Die Maus wird jetzt nur die Vorderpfoten greifen den Deckel haben.
  5. Wenn die Maus uriniert, warten Sie, bis Wasserlassen stoppt. Sollte Urin am Eingang zu den vaginalen Kanal gelassen, die Öffnung mit einem kleinen Spritzer von DdH₂O. Änderung der Spitze, die zum Spülen verwendet wurde gespült werden.
  6. Stecken Sie das Ende der DdH₂O-gefüllte Spitze bei der Eröffnung des vaginalen Kanals, ohne die Öffnung einzudringen.
  7. Drücken Sie vorsichtig die Birne, eine Viertel bis die Hälfte des Volumens des Wassers zu vertreiben (~ 25-50 µl) bei der Eröffnung des vaginalen Kanals. Die Flüssigkeit wird spontan in den Kanal ohne Tipp einfügen Aspirieren. Lassen Sie langsam den Druck auf die Glühbirne. Die Flüssigkeit wird wieder in der Spitze zurückziehen.
  8. Vermeiden Sie Freigabe Druck zu schnell um Aspiration von Flüssigkeit in der Lampe zu verhindern. Zu diesem Zweck kann ein gefilterte Tipp hilfreich sein.
  9. Wiederholen Sie den vorherigen Schritt 4-5 Mal mit dem gleichen Tipp, Birne und Flüssigkeit, um eine ausreichende Anzahl von Zellen in einer einzigen Probe zu erhalten.
  10. Legen Sie die Flüssigkeit auf Glasobjektträger und ermöglichen den Abstrich, trocken bei Raumtemperatur.
  11. Verwenden Sie eine neue Pipette für jede Maus.
  12. Nach dem Trocknen können diese estrous Abstriche eingefärbt sofort oder gespeichert und zu einem späteren Zeitpunkt gebeizt. Wright Giemsa Färbung wird am häufigsten verwendet, die Folien zu beflecken. Dieser Fleck gibt es im Handel als eine einstufige Fleck, der keine Fixierung der Folie zu verhindern, dass Zellen abwaschen während des Färbung Prozess erfordert. Die Folie wird in den Fleck für 45-60 Sekunden, gemäß den Anweisungen des Herstellers gelegt.
  13. Die Folien sind dann unter dem Mikroskop untersucht, und die Zellen gesehen entspricht die Phase des Zyklus: 1) wenn das Weibchen in Proestrus ist, die Zellen gelten als Cluster von runden, wohlgeformten kernhaltige epitheliale Zellen mit Zellkern, die als dunklere Flecken der Zytoplasma; (2) wenn das Weibchen in Brunst ist, sind die Mehrzahl der Zellen verhornten Plattenepithel Epithelzellen, die einen Zellkern fehlt, sind eckig aussehen und auftreten in dichten Büscheln; (3) wenn das Weibchen in Metestrus ist, sind die Zellen in der Regel weiße Blutkörperchen (insbesondere Neutrophile mit einigen verhornten Plattenepithel Epithelzellen vorhanden) mit dunkel gefärbten Kernen, die wie zwei Würste miteinander geprägt sind; (4) während Diestrus sind die Zellen normalerweise weiße Blutkörperchen mit dem Auftreten von ein paar kernhaltigen Epithelzellen...
2. Vaginal schrubben
  1. Benötigten Materialien sind sterile Baumwolle Spitze Applikatoren mit einer 2 mm Durchmesser Spitze, sauberes Glas-Objektträger und sterile physiologische Kochsalzlösung.
  2. Befeuchten Sie einen Baumwoll-gespitzten Applikator mit Kochsalzlösung.
  3. Legen Sie die Spitze des Applikators in die Scheide der zurückhaltende Maus.
  4. Vorsichtig drehen und Rollen der Spitze gegen die Scheidenwand. Entfernen Sie vorsichtig den Tupfer.
  5. Zellen werden in einen trockenen Objektträger übertragen, durch Walzen den Tupfer auf der Folie.
  6. Sobald die Folie trocken ist, kann auch gebeizt mit Wright Giemsa Fleck.
    Swabbing gilt eine stressige Prozedur und -wann können betonte Mäusen gestört Estrous Zyklen. Vaginale und zervikalem Stimulation verursacht durch schrubben kann Scheinträchtigkeit auslösen. Wiederholte Abstriche von der vaginalen Schleimhaut können Schäden verursachen, wenn Sie nicht mit richtigen Zurückhaltung und mit der richtig dimensionierten Wattestäbchen vorsichtig, durchgeführt. ^3,4

Abbildung 2. Vaginale Zytologie - Zyklus unterschiedliche Stadien der Nager Brunst

6. visualisieren einen copulator Stecker

Dieser Stecker besteht aus Vaginalsekret und Sperma, und bleibt in der Scheide für 12-24 h Postcopulation. Das Vorhandensein des Steckers bestätigt, Paarung, aber garantiert nicht, dass die Frau schwanger ist. Wenn die verstopfte Frau schwanger ist, am ersten Tag der Schwangerschaft gilt der Tag, nachdem der Stecker gefunden wird.

Heben Sie die Maus aus dem Käfig heraus und legen Sie sie auf Draht-Bar-Käfig-Spitze mit ihrem Endstück in Richtung zu Ihnen.
Position der Maus durch Druck direkt über das Heck zu wölben die Rückseite um bessere Präsentation der vaginalen Öffnung zu ermöglichen.
Beobachten Sie ihre vaginale Öffnung für eine weißliche Masse. Die copulator Stecker möglicherweise nicht visuell klar aber kann mit dem Einsatz einer stumpfen Sonde bestätigt werden.
Mit der Spitze der Sonde, legen Sie es sanft in die vaginale Öffnung. Das Vorhandensein eines copulator Steckers wird die Weiterentwicklung der Sonde innerhalb 0,5 cm von der Scheidenöffnung behindern.
Die Sonde werden mit Alkohol desinfiziert und vor jedem Gebrauch vollständig getrocknet.

Das Weibchen Würfe hat, das Datum der Geburt, die Wurfgröße, die Anzahl geboren, die Anzahl entwöhnt, das Verhältnis Männer zu Frauen Welpen sowie das Verhältnis der Genotypen sollte alle aufgezeichnet werden. Wenn die Genotypen innerhalb eines Wurfes die Genotypen der Eltern nicht entsprechen, muss die Wiederholung der Prüfungen getan werden, um zu überprüfen, die wahre Genotyp.

(7) absetzen

Schwangerschaft für Mäuse und Ratten beträgt ca. 21 Tage. Die jungen werden im Alter von 21-28 Tagen abgesetzt. Beide Mäuse und Ratten können so früh wie 8 Wochen alt zu züchten, so ist es zwingend notwendig, dass die Welpen schon früh nach Geschlecht getrennt sind. Intensive Zucht erfordert, dass die Welpen von jedem Wurf am Tag 20 zu verhindern, dass die älteren Welpen anwesend, als die nächste Wurf abgesetzt werden. Für intensiven Zucht können die Welpen mit der Mutter letzten 20 Tage alt, oft bis zu 28 Tage alt belassen werden. Dies kann sehr vorteilhaft für viele gentechnisch veränderter Stämme sein, da die Welpen möglicherweise nicht so kräftig wie nonengineered oder Wildtyp Tiere.

Männliche und weibliche Welpen sind bei der Entwöhnung getrennt. Wann immer möglich, sollten neu entwöhnte Jungtiere nicht einzeln untergebracht werden. Wenn ein Wurf nur ein Welpe eines bestimmten Geschlechts enthält, sollte versucht, dieser Welpe mit anderen des gleichen Geschlechts untergebracht. Möglich Wohnmöglichkeiten sind: 1) ein einziger weiblichen Welpen bleiben mit der Mutter, wenn nicht in eine intensive Zucht Käfig; (2) ein einziger weiblicher oder männlicher Welpen kann mit anderen gleichen Geschlechts Welpen aus einem anderen Wurf der gleichen Altersgruppe gestellt werden; (3) wenn die Eltern ein monogames paar sind, kann das Weibchen aus dem Käfig erlauben einen einzigen männlichen Welpen mit dem Vater untergebracht werden entfernt; und 4) ein einziger männlichen Welpen kann mit weiblichen Geschwistern bis zu 5 Wochen alt untergebracht werden. Das Geschlecht des Welpen sollte eine Woche, um zu verhindern, dass unerwünschte Würfe von unsachgemäß getrennten Welpen postweaning überprüft werden.

Absetzer Mäuse und Ratten sollte täglich kontrolliert werden, um sicherzustellen, dass sie gedeihen. Obwohl die Anleitung für die Pflege und Verwendung von Labortieren⁵ besagt, dass Essen die Tiere so zu verhindern, dass die Verschmutzung durch Kot und Urin vorgelegt werden muss, sollten neu entwöhnte Mäuse eine kleine Menge an Nahrung (eine Tablette pro zur Verfügung gestellt werden Maus) in einer Glasschale (Petrischale) auf den Boden gelegt. Das fördert die Tiere für den Übergang, Nagetier Chow als ihre alleinige Nahrungsquelle. Auch für Tiere, die auf Gestellen untergebracht sind, die Wasser in die Käfige durch eine automatische Bewässerungsanlage zu bieten, kann eine Flasche Wasser in den Käfig hinzugefügt werden, wenn die Mäuse offenbar dehydriert werden.

Name	Kolonie-Typ	Beschreibung
ICR	Fremd-	Albino
Swiss-Webster	Fremd-	Albino
BALB/c	Inzucht	Albino
FVB	Inzucht	Albino
C57BL/6	Inzucht	Schwarzer Mantelfarbe
C₃H	Inzucht	Braune Fellfarbe
DBA/2	Inzucht	Braun/grau Fellfarbe
Athymic Akte (Nu/Nu)	Inzucht	Haarlos
SCID	Inzucht	Schwere kombinierte immundefiziente Mäuse-verschiedene Farben

Tabelle 1. Häufig verwendet Maus Flecken und Aktien.

Name	Kolonie-Typ	Beschreibung
Sprague-Dawley	Fremd-	Albino
Wistar	Fremd-	Albino
Fisher-344	Inzucht	Albino
Lewis	Inzucht	Albino
Lange Evans	Inzucht	Mit Kapuze, schwarz und weiß