Question 1

Was ist adoptiver Zelltransfer und warum wird er in der Forschung eingesetzt?

Accepted Answer

Adoptiver Zelltransfer ist eine Methode zur Einführung von Zellen in einen Organismus, um biologische Mechanismen zu untersuchen oder Krankheiten zu behandeln. Sie ermöglicht es Forschern, spezifische Immunzellfunktionen zu untersuchen, Hämatopoese zu studieren und neuartige Therapien wie Krebsbehandlungen zu testen, bei denen T-Zellen des Patienten extrahiert, modifiziert werden, um Tumore zu erkennen, und zurückgegeben werden, um Krebs zu bekämpfen. Tiermodelle erlauben eine detaillierte Untersuchung des Verhaltens und der Wirksamkeit übertragener Zellen.

Question 2

Warum werden CD45.1 Rag gamma-c Knockout-Mäuse in adoptiven Transferstudien verwendet?

Accepted Answer

CD45.1 Rag gamma-c Knockout-Mäuse fehlen grundlegende Zytokinrezeptoren, die für die normale Lymphozytenentwicklung unerlässlich sind, was zu beeinträchtigten Immunsystemen ohne natürliche Killerzellen, T-Zellen oder B-Zellen führt. Diese immungeschwächten Mäuse dienen als ideale Empfänger für adoptiven Transfer, da sie es Forschern ermöglichen zu untersuchen, wie sich Spender-Immunzellen in einem lymphozytendefizienten Wirt etablieren und funktionieren.

Question 3

Wie werden Splenozyten aus dem Spendergewebe isoliert und gereinigt?

Accepted Answer

Die Milz wird mithilfe eines Zellsiebs und eines Kolbens dissoziiert, um die Zellen in eine Suspension zu entlassen. Unerwünschte Erythrozyten werden mit Ammoniumchlorid-Kalium-Lyse-Puffer lysiert, und Zentrifugation trennt weiße Blutkörperchen von Zelltrümmern. Die resultierenden gereinigten Splenozyten werden mit Trypanblau gezählt und auf die gewünschte Konzentration eingestellt, bevor sie in Empfängermäuse übertragen werden.

Question 4

Welche Rolle spielt die Durchflusszytometrie bei der Bestätigung einer erfolgreichen adoptiven Übertragung?

Accepted Answer

Durchflusszytometrie mittels Fluoreszenz-aktivierte Zellensortierung (FACS) bestätigt den Transfererfolg durch den Nachweis von Spenderzellen in der Milz des Wirts. Markierte Antikörper gegen Spendermarker wie CD45.2 unterscheiden übertragene Zellen von Wirtszellen. Die Technik ermöglicht es Forschern, spezifische Lymphozytenpopulationen wie CD4 T-Zellen zu identifizieren und deren Vorhandensein und Verteilung in Empfängermäusen zu verifizieren.

Question 5

Wie wird die Zellsuspension vor der intravenösen Injektion in Empfängermäuse hergestellt?

Accepted Answer

Die Zellsuspension wird zentrifugiert und durch zwei aufeinanderfolgende Waschschritte in phosphatgepufferter Kochsalzlösung resuspendiert. Der endgültige Pellet wird in 200 Mikrolitern phosphatgepufferter Kochsalzlösung resuspendiert. Unter Verwendung einer 0,5-Milliliter-Spritze mit einer 29-Gauge-Nadel werden 200 Mikroliter dieser gereinigten Zellsuspension intravenös in den retro-orbitalen Blutsinus der Empfängermaus injiziert.

Question 6

Was zeigt die FACS-Analyse über übertragene versus Wirtslymphozyten?

Accepted Answer

FACS-Analyse unterscheidet CD45.2-positive übertragene Zellen von CD45.1-positiven Wirtszellen mittels Punktdiagrammen. Übertragene Zellen erscheinen nur in der übertragenen Mausprobe, nicht in Kontrollmäusen, die allein Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung erhalten. Weitere Analysen identifizieren spezifische übertragene Lymphozyten-Untergruppen, wie CD4 T-Zellen, was sowohl eine erfolgreiche Einnistung als auch den Phänotyp der Spenderzellen innerhalb des Wirts zeigt.

Question 7

Welche Kompatibilitätsfaktoren müssen vor der Durchführung eines adoptiven Zelltransfers berücksichtigt werden?

Accepted Answer

Die Kompatibilität von Wirt und Spender ist entscheidend, um die Zellaufnahme ohne Abstoßung sicherzustellen. In diesem Protokoll werden CD45.2-Spender-Splenozyten auf CD45.1 Rag Gamma-c-Empfängermäuse übertragen, was eine Unterscheidung zwischen Spender- und Wirtszellen ermöglicht. Diese genetische Unterscheidung ermöglicht es Forschern, übertragene Zellen zu verfolgen und ihre Integration, ihr Überleben und ihre Funktion innerhalb der immungeschwächten Wirtsumgebung zu bewerten.

Adoptivzelltransfer: Spendermaus-Splenozyten einer Host-Maus einführen und Erfolg über FACS bewerten - Bewertungsquiz