Name: Gibberella zeae Ascosporen Produktion und Sammlung für Microarray-Experimente. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 24 s
Description: Lernen Sie die sterile Produktion und Sammlung von Gibberella zeae-Ascosporen für Microarray-Experimente. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Genomexpressionsanalysen in der Pilzgenetik.

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Die Autoren bedanken sich Karen Hilburn für einen ausgezeichneten technischen Support. Dieses Projekt wurde von der National Research Initiative des USDA Cooperative State Research, Education and Extension Service (Preis # 2004-35604-14327) unterstützt. Matias Pasquali wird von Branco Weiss Fellowship unterstützt. Die US-Weizen und Gerste Scab Initiative ist auch für die fortgesetzte Unterstützung der Forschung anerkannt.

<ol><li> Carrot-Agar (Klittich und Leslie, 1988) wurde in 9-cm Durchmesser Petrischalen vorbereitet. </li><li> A 2 mm Kantenlänge von Agar mit frischem Mycel auf Kartoffel-Dextrose-Agar gewachsen war, die Mitte jeder Petrischale aufgebracht. </li><li> Die Kulturen wurden bei 25 ° C gezüchtet und eine 12-h Photoperiode für 96 Stunden. </li><li> Ein ml wässrige 2,5% Tween 60 wurde auf die Oberfläche der Kultur (Trail und Common, 2000) aufgetragen und über die Kultur mit einem Kunststoff-Stab, durch leichtes Drücken. </li><li> Perithecien Dreharbeiten Ascosporen entwickelt 7-10 Tage nach dieser Induktionstherapie, wenn in einer Umgebung mit hoher Feuchtigkeit bei 25 ° C gehalten mit der gleichen Photoperiode. </li><li> Spore Kollektion zeichnet sich durch die Änderung der Petrischale Deckel durchgeführt, so dass Perithecien für eine begrenzte Zeit (zB 12 Stunden) in der Dunkelheit zu schießen. </li><li> Sterilem Wasser auf den Deckel gegeben, die Aussetzung Ascosporen durch vorsichtiges Bewegen Wasser auf der Oberfläche. </li><li> Ascosporen werden in sterile Falcon-Röhrchen gesammelt, gewaschen und zur weiteren Analyse. </li></ol>

<ol><li>Beyer, M., Verreet, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germination+of+Gibberella+zeae+ascospores+as+affected+by+age+of+spores+after+discharge+and+environmental+factors%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors.</a> , (2005).</li>
<li>Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Daily+inoculum+levels+of+Gibberella+zeae+on+wheat+spikes.+Plant+Disease+83%2C662-666%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Daily inoculum levels of Gibberella zeae on wheat spikes. Plant Disease 83,662-666.</a> , (1999).</li>
<li>Goswami, R. S., Kistler, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heading+for+disaster%2C+Fusarium+graminearum+on+cereal+crops.+Molecular+Plant+Pathology+5%2C515%26%23x2013%3B525%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Heading for disaster, Fusarium graminearum on cereal crops. Molecular Plant Pathology 5,515&#x2013;525.</a> , (2004).</li>
<li>Klittich, C. J. R., Leslie, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+reduction+mutants+in+Fusarium+moniliforme+%28Gibberella+fujikuroi%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Nitrate reduction mutants in Fusarium moniliforme (Gibberella fujikuroi.</a> Genetics. 118, 417-2013 (1998).</li>
<li>Trail, F., Common, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perithecium+development+in+Gibberella+zeae%2C+a+light+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Perithecium development in Gibberella zeae, a light microscopy study.</a> , (2000).</li>
<li>Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+substrate+for+uniform+production+of+perithecia+in+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologia%22%5BJournal%5D)">A substrate for uniform production of perithecia in Gibberella zeae.</a> Mycologia. , 67-1101 (1975).</li>
<li>Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+environment+on+sexual+reproduction+of+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The effect of environment on sexual reproduction of Gibberella zeae.</a> , (1976).</li>
</ol>

Das Protokoll hier vorgestellte auf früheren Verfahren für perithecial Produktion für Fusarium spp verwendet wird. (Klittich und Leslie, 1988; Trail und Common, 2000). Die Standardisierung der Verfahren, mit dem große Mengen von Ascosporen (ausreichend für Microarray-Analyse) generiert wurden war wesentlich für die Reproduzierbarkeit der Experimente. Es wurde berichtet, dass Umweltfaktoren, Alter und Substrat Unterschiede kann die biologische Charakter der Ascosporen (Beyer und Verreet, 2005) zu ändern. Daher ist die Verwendung von Video ka...

<table><tbody><tr><td>Petri-Schale, 9 cm Durchmesser</td><td>Werkzeug</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 60 (20 %)</td><td>Reagenz</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Möhren-Agar (20 % w/v Bio-Möhren und 1,5 % w/v Agar)</td><td>Reagenz</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gibberella zeae ascosporen produktion und sammlung für microarray-experimente.

Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.

Fusarium graminearum Schwabe (Teleomorph Gibberella zeae) ist eine Pflanzenart Erreger Schorf Krankheit an Weizen und Gerste, die Ernteerträge und Kornqualität reduziert. F. graminearum verursacht auch Stiel und Ohr verrottet von Mais und ist ein Hersteller von Mykotoxinen, wie die Trichothecene, dass das Getreide verunreinigen und sind schädlich für Mensch und Vieh (Goswami und Kistler, 2004). Der Pilz produziert zwei Arten von Sporen. Ascosporen werden die Ableger, die sich aus der sexuellen Fortpflanzung, die Hauptquelle der primären Infektion. Diese Sporen werden gewaltsam aus reifen Perithecien entladen und verteilt durch den Wind (Francl et al 1999). Sekundäre Infektionen werden vor allem durch Makrokonidien die durch ungeschlechtliche bedeutet auf der Pflanze produziert werden verursacht. Zur Untersuchung der Entwicklungsprozesse von Ascosporen in diesem Pilz wurde ein Verfahren für ihre Sammlung in großen Mengen unter sterilen Bedingungen erforderlich. Unser Protokoll wurde gefilmt, um ein Höchstmaß an Informationen für das Verständnis und die Reproduzierbarkeit zu erzeugen; entscheidende Aspekte, wenn sie voll Genom Genexpressionsprofile generiert und interpretiert werden. Insbesondere sind die Variabilität der Ascosporen Keimung und die biologische Aktivität abhängig von der vorherigen Manipulation des Materials. Die Verwendung von Video zu dokumentieren jeden Schritt in Ascosporen Produktion wird vorgeschlagen, um die Standardisierung zu erhöhen, die Einhaltung der immer strengeren Anforderungen für die Microarray-Analyse. Das Verfahren erfordert nur Standard-Laborgeräte. Schritte gezeigt, um Verunreinigung und für die Zeitsynchronisation von Ascosporen zu verhindern.

Zur Untersuchung der Entwicklungsprozesse von Ascosporen in Gibberella zeae, ein Verfahren für die Sammlung unter sterilen Bedingungen gefilmt wird, um ein Höchstmaß an Informationen für die Protokoll-Beschreibung zu generieren. Dies sollte die Reproduzierbarkeit der Experimente, ein entscheidender Aspekt, wenn sie voll Genom Expressionsprofil Tests durchgeführt werden.

Gibberella zeae Ascosporen Produktion und Sammlung für Microarray-Experimente.

*Fusarium graminearum* Schwabe (Teleomorph *Gibberella zeae*) ist ein Pflanzenpathogen, das Ährenfusarium an Weizen und Gerste verursacht, was den Ernteertrag und die Kornqualität reduziert ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In diesem Protokoll, Genexpression in Hefe...

Microarray-Analyse für Saccharomyces cerevisiae</em

Die Verwüstung von Getreide durch Samen-Pilzresistenz hat zahlreiche Forschungsarbeiten zum besseren Verständnis Pflanze-Pathogen-Interaktionen dazu aufgefordert werden. Um Saatgut-Pilz-Interaktionen in einem Labor untersuchen, entwickelten wir eine robuste Methode zur Quantifizierung von Pilz-Reproduktion, Biomasse und Mykotoxinkontamination mit Kernel Bioassays.

Die Quantifizierung der Pilzbesiedlung, Sporogenese und Produktion von Mykotoxinen Kernel-Bioassays

Sexuelle Kreuze und Isolierung von rekombinanten Nachkommen sind wichtige Werkzeuge für die Forschung...

Sexuelle Entwicklung und Ascosporenausschleuderung in Fusarium graminearum</em

Dieses Video zeigt eine Methode zur Quantifizierung von Pilzinfektionen bei Zebrafischlarven. Pilzsporen werden in den Ventrikel des Hinterhirns der Larve mikroinjiziert, und die Larven werden inkubiert, um die Entwicklung einer Infektion zu ermöglichen. Infizierte Larven werden in definierten Intervallen geerntet, und der Infektionsfortschritt wird durch die Aufzählung koloniebildender Einheiten bewertet.

Eine Technik zur Quantifizierung von Pilzinfektionen bei Zebrafischlarven

Das Video demonstriert eine Technik zum Verletzen und Einfangen von Zebrafischen zur Beobachtung von fluoreszenzmarkierten Pilzerregerinfektionen in Zebrafischlarven. Die Erstinfektion zieht Makrophagen an, und wenn die Infektion anhält, schreitet die Rekrutierung von Neutrophilen an der Injektionsstelle fort.

Eine zWEDGI-Technik zur Visualisierung von mit Pilzerregern infizierten Zebrafischlarven

Hier präsentieren wir ein Protokoll um Aspergillus Flavus Wachstum und Aflatoxin in Maiskörner mit dem Ausdruck einer antimykotischen Proteins zu analysieren.  Mit GFP exprimierenden A. Flavus Belastung überwacht wir die Infektion und die Ausbreitung des Pilzes in Reife Kerne in Echtzeit. Der Test ist schnell, zuverlässig und reproduzierbar.

Hemmung der Aspergillus Flavus Wachstum und Aflatoxin in transgenen Mais mit dem Ausdruck der α-Amylase-Inhibitor von Lablab Purpureus L.

Ein Engpass im "Design-Build-Test"-Zyklus der mikrobiellen Technik ist die Geschwindigkeit, mit der wir funktionale Bildschirme von Stämmen durchführen können. Wir beschreiben eine Methode mit hohem Durchsatz für das Dehnungsscreening, die auf Hunderte bis Tausende von Hefezellen pro Experiment angewendet wird, die tropfenbasierte RNA-Sequenzierung verwendet.

Hefestamm-Phänotypisierung mit Droplet-basierter RNA-Sequenzierung mit hohem Durchsatz

Dieses Protokoll beschreibt ein Aspergillus-Infektionsmodell bei Zebrafischlarven. Aspergillus Sporen werden mikroinjiziert in das Hinterhirn von Larven, und chemische Behandlung wird verwendet, um Immunsuppression zu induzieren. Das Fortschreiten der Infektion wird über eine tägliche Bildgebung überwacht, um das Pilzwachstum und die Immunantworten sowie die Aufzählung lebender Sporen durch Koloniebildbildung zu überwachen.

Infektion von Zebrafischlarven mit Aspergillus Sporen zur Analyse von Wirts-Pathogen-Wechselwirkungen

Wir präsentieren ein markierungsfreies Live-Imaging-Protokoll mit Durchlichtmikroskopie-Techniken, um Bilder zu erfassen, die Wachstumskinetik des filamentösen Pilzes A. nidulans sowohl in Unterwasserkulturen als auch in festen Medien zu analysieren und zu quantifizieren. Dieses Protokoll kann in Verbindung mit der Fluoreszenzmikroskopie verwendet werden.

Quantitative Analyse der Wachstumsrate von Aspergillus nidulans mittels Live-Mikroskopie und Open-Source-Software

Dieses Protokoll ist eine effektive, schnelle Methode, um Hefen und den Schimmelpilz Aspergillus fumigatus aus großen Sätzen von Bodenproben in nur 7 Tagen zu kultivieren. Die Methoden können leicht modifiziert werden, um eine Reihe von Inkubationsmedien und Temperaturen aufzunehmen, die für Experimente benötigt werden.

Isolierung von kultivierbaren Hefen und Schimmelpilzen aus Böden zur Untersuchung der Pilzpopulationsstruktur

Dieses Manuskript beschreibt ein optimiertes Inokulationsprotokoll, das abgelöste Maisblatthüllen für reproduzierbare zytologische, physiologische und molekulare Studien von Maisinteraktionen mit pilzlichen Pflanzenpathogenen verwendet. Die Blattscheiden erleichtern die Echtzeitbeobachtung zellulärer Interaktionen zwischen der lebenden Pflanze und dem Pilz in nicht fixiertem Gewebe.

Abgetrennte Maisscheiden für die Lebendzell-Bildgebung der Infektion durch pilzliche Blattmais-Erreger

Lernen Sie die sterile Produktion und Sammlung von Gibberella zeae-Ascosporen für Microarray-Experimente. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Genomexpressionsanalysen in der Pilzgenetik.

Gibberella zeae Ascosporen Produktion und Sammlung für Microarray-Experimente.

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