Name: Gene-gun Transfektion von Neuronen im Hippocampus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Lernen Sie die Gene-Gun-Transfektion von Neuronen im Hippocampus. Diese Methode ermöglicht präzise Transfektion isolierter Hippocampus-Gewebe für neurowissenschaftliche Studien.

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gene-gun transfektion von neuronen im hippocampus

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Gene-gun Transfektion von Neuronen im Hippocampus

Hallo, ich bin Kma. Ich arbeite im Case-Labor an der Brown University. Säubern Sie die Slicer-Plattform mit 70 % Ethanol. Stellen Sie den Platten-Einsatz in sechs.Platte mit Medium und Inkubation bei 37 Grad, gesamtes Gehirn mit Pinzette zwischen Mittelhirn und Vierergang halten. Hippocampus auf einer Seite isolieren, Hippocampus von der zweiten Seite isolieren. Hippocampi in einen PBS-Tropfen legen.Aspirieren Sie das PBS ab und stellen Sie sagittale Schnitte mit dem Gewebeschneider her. Übertragen Sie die Schneidgeräte erneut auf eine Unterlage, indem Sie mit PBS in die Hocke gehen, waschen Sie die Schnitte durch Zugabe und Aspiration von PBS und Medium vorsichtig. Trennen Sie die Schnitte mit einer Pinzette. Spülen Sie die Schnitte mit PBS und Medium. Überführen Sie die Schnitte erneut auf die Platte und fügen Sie sie ein. Aspirieren Sie das Medium in den Schnitten mit einer Pinzette. Schließen Sie den Genkanonen-Schlauch an die Heliumflasche an. Befestigen Sie den Lauf an der Genkanone. Füllen Sie das Magazin mit Projektilen.Setzen Sie das Magazin in die Jing-Pistole ein. Stellen Sie den Druck am Heliumtank ein, um zu schießen. Beschichten Sie die Perlen mit EGFP und geben Sie s

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wir beschreiben ein Verfahren zur Herstellung von DNA beschichteten Gold-Kugeln und zeigen die Verwendung solcher Geschosse zu biolistically transfizieren Neuronen in kultivierten Hippocampus-Schnitten.

Vorbereitung der Gene Gun und Aufzählungszeichen Biolistic Transfektion von Neuronen in Scheiben Kultur

Live Cell Imaging ist von besonderem Nutzen bei der Untersuchung der Dynamik von Organellen Menschenhandel. Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Live-Darstellung von Dense-Core-Vesikel in kultivierten Neuronen mit Weitwinkel-Fluoreszenzmikroskopie. Dieses Protokoll ist flexibel und kann an image anderen Organellen wie Mitochondrien angepasst werden, Endosomen und Peroxisomen.

Live-Imaging von Dense-Core-Vesikel in Primary hippokampalen Neuronen

Dieses Protokoll beschreibt die erforderlichen Schritte zu zerlegen, zu transfizieren via Elektroporation und Kultur Maus Hippocampus und kortikalen Neuronen. Kurzfristige Kulturen können für die Untersuchung der Axon Auswuchs und Beratung verwendet werden, während die langfristigen Kulturen für ein Studium der Synaptogenese und dendritischen Dorn Analyse verwendet werden können.

Nucleofection und Primärkultur von embryonalen Maus-Hippocampus und kortikalen Neuronen

Quelle: Keener, D. G., et al. Einzelzell-Elektroporation über verschiedene organotypische Schnittkulturen von erregenden und klassenspezifischen inhibitorischen Neuronen des Hippocampus der Maus. J. Vis. Exp. (2020).Dieses Video zeigt den Prozess der Einzelzell-Elektroporation, um Plasmid-DNA in Neuronen in hippokampalen Schnittkulturen von Mäusen einzuführen. Das Verfahren umfasst eine präzise Pipettenpositionierung, Druckanpassungen und Elektroporationsimpulse, um die neuronale Membran...

Genexpression durch Einzelzell-Elektroporation in hippokampalen Schnittkulturen der Maus

Quelle: Denaxa, M., el al., Transplantation of Chemogenetically Engineered Cortical Interneuron Progenitors into Early Postnatal Mouse Brains. J. Vis. Exp. (2019)Dieses Video zeigt das Verfahren zur Injektion eines Plasmidvektors, der das interessierende Gen trägt, in Interneuron-Vorläuferzellen in einem embryonalen Hirnschnitt, gefolgt von einer Elektroporation für den Plasmideintritt und die Genexpression. Diese modifizierten Vorläuferzellen können später zur Behandlung von Hirnerkrankungen...

Agarose-eingebetteter Elektroporations-unterstützter Gentransfer in kortikalen Interneuronen-Vorläuferzellen der Maus

Calciumphosphat-Präzipitation ist eine bequeme und kostengünstige Methode zur Transfektion von kultivierten Zellen. Mit Optimierung ist es möglich, dieses Verfahren auf Fest transfizierbaren Zellen wie primäre Neuronen verwendet werden. Hier beschreiben wir unsere detaillierten Protokoll für die Calciumphosphat-Transfektion von Neuronen im Hippocampus mit Astroglia-Zellen kokultiviert.

Calciumphosphat-Transfektion von primären Hippocampus-Neuronen

Jüngste Verbesserungen bei organotypischen Hirnschnittpräparaten haben ihre Nutzung für biotechnologische Anwendungen ermöglicht. Organotypische Schnitte behalten lokale strukturelle Eigenschaften der in vivo-Biologie bei, einschließlich funktioneller synaptischer Verbindungen. Hier stellen wir eine regioselektive biolistische Verabreichungsmethode vor, um diese Scheiben zu markieren und genetisch zu manipulieren.

Regioselektive Biolistic Targeting in Organotypische Hirnschnitten mit modifizierter Gene Gun

Hier ist eine modifizierte Roller Schlauch Methode zur Kultivierung und intermittierende hochauflösende Bildgebung des Gehirns Nagetier Scheiben über viele Wochen mit präzisen Neupositionierung auf komplexeste Deckgläsern. Neuronalen Lebensfähigkeit und Slice Morphologie sind gut gepflegt. Anwendungen dieses komplett geschlossenes System mit Viren für Zelltyp spezifische Ausdruck stehen zur Verfügung.

Modifizierte Roller Schlauch Methode genau lokalisierte und sich wiederholende intermittierende Bildgebung während langfristige Kultur Gehirnscheiben im geschlossenen System

Hier wird ein Protokoll für die Einzelzellelektroporation vorgestellt, das Gene sowohl in exzitatorischen als auch in inhibitorischen Neuronen über eine Reihe von In-vitro-Hippocampus-Schichtkulturaltern hinweg liefern kann. Unser Ansatz bietet eine präzise und effiziente Expression von Genen in einzelnen Zellen, mit denen zellautonome und interzelluläre Funktionen untersucht werden können.

Einzelzell-Elektroporation über verschiedene organotypische Slice-Kulturen von Hippocampus-Exzitatorischen und klassenspezifischen inhibitorischen Neuronen der Maus

Diese Technik zeigt eine effiziente Möglichkeit, replikationsdefekte retroviralen Aktien Kodierung eines menschlichen Onkogen vorzubereiten, und anschließend zur Induktion der myeloproliferativen Erkrankung im Mausmodell verwendet.

Produktion von replikationsdefekte Retrovirus durch transiente Transfektion von 293T-Zellen

Lernen Sie die Gene-Gun-Transfektion von Neuronen im Hippocampus. Diese Methode ermöglicht präzise Transfektion isolierter Hippocampus-Gewebe für neurowissenschaftliche Studien.

Gene-gun Transfektion von Neuronen im Hippocampus

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