Erstellung von Murine Experimental Bauchaortenaneurysmen mit Elastase

Dieser chirurgische Eingriff zur Erzeugung eines abdominalen Aortenaneurysmas beginnt mit einem medianen Bauchschnitt. Die Bauchinhalte werden zur Seite verlagert, und alle Seitenäste der Aorta werden ligiert. Der proximale und der distale Abschnitt der Aorta werden abgebunden.

Das Herz wird mit einer Nadel punktiert und eine Perfusion mit Elastase über einen durch Hitze verjüngten Polyethylen-Schlauch durchgeführt. Sobald die Perfusion abgeschlossen ist, wird die Aortenautotomie verschlossen. Die Ligaturen werden entfernt, die Aorta füllt sich mit Blut und die Bauchhöhle wird geschlossen.

Der Maus wird anschließend erlaubt, sich zu erholen, und das Aneurysma wird sich innerhalb von 14 Tagen vollständig dilatieren. Hallo, ich bin Julian Asma aus dem Labor von Fetal Cell in der Abteilung für Kardiovaskuläre Medizin an der Stanford University. Heute zeige ich Ihnen das Verfahren zur Injektion eines neuartigen experimentellen abdominalen Aortenaneurysmas mit Elastase.

Wir verwenden dieses Verfahren in Ihrem Labor, um die PEs der Baucharterie S. so zu untersuchen. Beginnen wir. Um Ihre Experimente zu starten, wählen Sie eine Maus Ihrer Wahl aus, beispielsweise eine C57BL/6-Maus, und betäuben Sie sie mit inhaliertem Isofluran, bis die Maus bewusstlos ist. Bitte beachten Sie, dass verschiedene Mausstämme in der Rate des Aneurysmawachstums variieren können.

Entfernen Sie die anästhesierte Maus aus der Kammer an einer ausreichend beleuchteten Präparationsstation. Rasieren Sie das Fell vom Abdomen vom Ende des Schambeins bis zur Wurzel der Beine ab. Verwenden Sie eine Enthaarungscreme, um überschüssiges Haar zu entfernen.

Reinigen Sie die enthaarte Haut mit 70 % Alkohol, bis alle Haare aus dem rasierten Bereich entfernt sind. Anschließend wird die Haut mindestens dreimal mit Betadine abgewischt, wobei zwischen den einzelnen Reinigungsvorgängen jeweils mit Alkohol nachgewischt wird. Danach wird die Maus in Rückenlage auf das Operationsfeld gelegt, um sie bewusstlos zu halten.

Während der Operation einen Schlauch auf die Nase legen, der Isofluran mit derselben Flussrate zuführt, die zur Einleitung der Bewusstlosigkeit verwendet wurde. Die Elastase wird auf Eis gehalten und in eine Spritze aufgezogen. Die Spritze wird anschließend fixiert und neben das Operationsfeld gestellt, und der Katheter wird angebracht.

Es ist wichtig, dass die Katheterspitze steril bleibt, was erreicht wird, indem die Spitze in ein steriles Gefäß gegeben wird. Stellen Sie vor dem Öffnen der Maus sicher, dass sterile Technik angewendet wird. Beginnen Sie damit, sterile Handschuhe anzuziehen.

Die chirurgischen Instrumente, Scheren, Nadelhalter und Pinzetten müssen vor der Operation desinfiziert werden. Nehmen Sie sich einen Moment Zeit, um sich bewusst zu machen, wie gründlich Ihre Vorbereitungen sind, und versuchen Sie, weitere mögliche Kontaminationsquellen während der Operation zu beseitigen. Falls die sterile Technik während des Eingriffs verletzt wird, desinfizieren Sie Ihr Instrument erneut in einem Heißperlen-Sterilisator.

Nachdem alles vorbereitet ist, beginnen Sie die Operation mit einem langen medianen Bauchschnitt innerhalb der Bauchhöhle. Verlagern Sie die Bauchorgane in den freien Bauchraum oder ziehen Sie sie mit steriler Gaze außerhalb des Bauches zurück, um die Aorta abdominalis freizulegen. Isolieren Sie nun vorsichtig mithilfe einer Pinzette die Aorta abdominalis vom Niveau der linken Nierenvene bis zur Bifurkation.

Im dargestellten Fall gibt es ein einzelnes Seitenast, das oberhalb der Stelle liegt, an der die Aorta ligiert wird, und das daher nicht abgebunden werden muss. Befinden sich aortale Seitenäste zwischen den Ligaturstellen der distalen und proximalen Aortenligatur, so müssen die Äste innerhalb eines Zentimeters der Gabelung mit 10-0-Nähten an den proximalen und distalen Aortenabschnitten ligiert werden. Vorübergehende 6-0-seidene Ligaturen anlegen, um den Blutfluss zu stoppen.

Führen Sie nun eine Autotomie an der Gabelung durch. Beginnen Sie damit, die Gabelung mit einer 30-Gauge-Nadel zu durchstechen. Tapered Polyethylenrohr kann durch die AOR-Autotomie eingeführt und mit einem Knoten befestigt werden.

Verwenden Sie die Pinzette, um das Rohr vorsichtig in die Aorta einzuführen. Achten Sie darauf, die endotheliale Schicht nicht durch einen Druck von 100 Milliliter zu beschädigen. Die Aorta wurde mit Elastase aus einem Kochsalzbeutel, der in einer Höhe von 136 Zentimetern aufgehängt war, mit Quecksilber perfundiert.

Stellen Sie sicher, dass sich keine Luft im Schlauch befindet, da sonst der Druck nicht exakt ist. Die Kochsalzlösung enthält 4,5 Einheiten pro Milliliter. Typ-1-schweinisches Pankreaselastase, das die Aorta innerhalb von fünf bis 15 Minuten füllen sollte.

Während der Perfusion dehnt sich die Aorta typischerweise auf etwa 140 % ihres ursprünglichen Durchmessers aus. Nach Abschluss der Perfusion ist diese zu entfernen und die Aortotomie mit einer 10-0-Naht zu verschließen, um eine Verengung zu vermeiden. Nachdem die Aortotomie verschlossen ist, muss auch die distale Ligatur entfernt werden.

Wenn am reparierten Aortenquerschnitt wenig oder kein Bluten auftritt, wird die proximale Ligatur entfernt. Bei Blutung werden zusätzliche vorübergehende 6.0-Soak-Ligaturen am proximalen und distalen Teil der Aorta angelegt und eine weitere Naht hinzugefügt, um die Aortenautotomie vollständig zu verschließen. Die erweiterte Aorta füllt sich unmittelbar nach Entfernung der proximalen Ligatur mit Blut.

Nachdem der Eingriff an der Aorta abgeschlossen ist, werden die Därme in die Bauchhöhle zurückverlagert. Falls sie reponiert wurden, gleiten die Därme als große Einheit zurück, und es besteht keine Notwendigkeit, sich um ihre Anordnung zu sorgen. Wenn alle Organe an ihrem Platz sind, kann die äußere Wunde nun in zwei Schichten mit sechsfachem aut-Nylon und Polypropylensäumen verschlossen werden.

Verabreichen Sie nun der Maus ein Lokalanästhetikum, beispielsweise einen Tropfen 0,25 %iges Bupivacain pro Zentimeter Inzision. Verabreichen Sie zudem eine Dosis des entzündungshemmenden Wirkstoffs Carprofen in einer Menge von fünf Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht subkutan. Der chirurgische Eingriff ist damit abgeschlossen, und die Maus sollte auf eine warme Fläche gelegt werden, auf der sie langsam aus der Narkose erwachen kann.

Die Erholung erfolgt in der Regel innerhalb von 15 Minuten. Wenn die Maus das Bewusstsein wiedererlangt, wird sie in einen Einzelkäfig zurückgebracht und während der Genesungsphase regelmäßig überwacht. Nach dem Eingriff weitet sich die Aorta typischerweise auf etwa 140 bis 160 % ihres ursprünglichen Durchmessers.

Diese anfängliche Dilatation wird mit einer Stabilisierung bis zum siebten Tag beobachtet. Eine schnelle sekundäre Dilatation tritt zwischen dem siebten und dem 14. Tag auf. Am 14. Tag kann das Aneurysma in der infrarenalen Aorta beobachtet werden.

Ich habe Ihnen gerade gezeigt, wie man ein abdominales Aortenaneurysma mit Elastase bei Mäusen induziert. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, die Bildung von Blutgerinnseln innerhalb der Aorta zu vermeiden. Damit ist alles gesagt.

Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihrem Experiment.