Erstellung von Murine Experimental Bauchaortenaneurysmen mit Elastase

Dieser chirurgische Eingriff zur Schaffung eines Bauchaortenaneurysmas beginnt mit einem Mittellinien-Bauchschnitt. Der Bauchinhalt wird zur Seite geschoben und alle Aortenäste werden ligiert. Der proximale und distale Teil der Aorta werden abgebunden.

Das Herz wird mit einer Nadel punktiert und eine große Menge Elastase wird durch einen sich verjüngenden Polyethylenschlauch abgegeben. Wenn die Profusion abgeschlossen ist, wird die AOR-Autotomie geschlossen. Die Ligaturen werden entfernt, die Aorta füllt sich mit Blut und die Bauchhöhle wird verschlossen.

Die Maus kann sich dann erholen und das Aneurysma wird in 14 Tagen vollständig erweitert. Hallo, ich bin Julian Asma vom Labor für fetale Zellen in der Abteilung für Herz-Kreislauf-Medizin der Stanford University. Heute zeige ich Ihnen das Verfahren zur Injektion eines neuen experimentellen Bauchaortenaneurysmas mit Elastase.

Wir verwenden dieses Verfahren in Ihrem Labor, um die PEs der Bauchkunst zu untersuchen S.So fangen wir an. Um Ihre Experimente zu beginnen, wählen Sie eine Maus von Interesse aus, z. B. eine C 57 black six-Maus, und betäuben Sie sie mit inhaliertem Iso-Fluor, bis die Maus bewusstlos ist. Bitte beachten Sie, dass verschiedene Mausstämme in der Rate des Aneurysmawachstums variieren.

Entnehmen Sie die betäubte Maus an einer ausreichend beleuchteten Präparationsstation aus der Kammer. Das Fell vom Bauch vom Ende des Kosalknochens bis zur Wurzel der Beine wurde rasiert. Verwenden Sie Haarentfernercreme, um die überschüssigen Haare zu entfernen.

Schrubben Sie die nackte Haut mit 70%igem Alkohol, bis sich alle Felle von der rasierten Region entfernt haben. Schrubben Sie dann die Haut mindestens dreimal mit Betadine und tupfen Sie zwischen den Peelings mit Alkohol ab. Lege nun die Maus in Rückenlage auf das Operationsfeld, um die Maus bewusstlos zu halten.

Legen Sie während der Operation einen Schlauch auf die Nase, der Iso-Fluor mit der gleichen Durchflussrate abgibt, die zur Induktion von Bewusstlosigkeit verwendet wird. Die Elastase wird auf Eis aufbewahrt und in eine Spritze extrahiert. Anschließend wird die Spritze eingespannt und neben das Operationsfeld gelegt und der Katheter befestigt.

Es ist wichtig, dass die Spitze des Katheters steril bleibt, was geschieht, indem die Spitze in ein steriles Fläschchen gelegt wird. Stellen Sie vor dem Aufschneiden der Maus sicher, dass eine sterile Technik verwendet wird. Beginnen Sie damit, sterile Handschuhe anzuziehen.

Die chirurgischen Instrumente, Scheren, Nadelhalter und Pinzetten müssen vor der Operation desinfiziert werden. Nehmen Sie sich einen Moment Zeit, um sich Ihrer Vorbereitungen bewusst zu sein und versuchen Sie, alle anderen potenziellen Kontaminationsquellen während der Operation zu beheben. Wenn die sterile Technik während des Eingriffs unterbrochen wird, sterilisieren Sie Ihr Instrument erneut in einem Heißperlensterilisator.

Sobald alles vorbereitet ist, beginnen Sie die Operation mit einem langen Bauchschnitt in der Bauchhöhle. Schieben Sie den Bauchinhalt zur Seite in den freien Bauchraum oder ziehen Sie ihn mit steriler Gaze außerhalb des Bauches zurück, um die Bauchschlagader freizulegen. Isolieren Sie nun mit einer Pinzette vorsichtig die Bauchschlagader von Höhe der linken Nierenvene bis zur Bifurkation.

Im gezeigten Fall gibt es einen einzelnen Ast, der sich über der Stelle befindet, an der wir die Aorta ligieren, und sie muss daher nicht gebunden werden. Wenn sich zwischen den Stellen der distalen und proximalen Aortenligatur Aortenäste befinden, werden die Äste innerhalb eines Zentimeters von der Bifurkation mit 10 auten Nähten an den proximalen und distalen Anteilen der Aorta ligiert. Temporäre 6.0 Seidenligaturen, um den Blutfluss zu stoppen.

Führen Sie nun eine Atomy an der Bifurkation durch. Beginnen Sie damit, die Bifurkation mit einer 30-Gauge-Nadel zu punktieren. Hitzeverjüngte Polyethylenschläuche können durch die AOR-Autotomie eingeführt und mit einem Knoten gesichert werden.

Führen Sie den Schlauch mit der Pinzette vorsichtig und sanft in die Aorta ein. Achten Sie darauf, die Endothelschicht nicht mit einem Druck von 100 Millilitern zu entblößen. Quecksilber durchblutete die Aorta mit Elastase aus einem Kochsalzbeutel, der in einer Höhe von 136 Zentimetern hing.

Stellen Sie sicher, dass sich keine Luft im Rohr befindet, da sonst der Druck nicht genau ist. Die Kochsalzlösung enthält 4,5 Einheiten pro Milliliter. Typ eins Pankreas-Elastase vom Schwein und sollte die Aorta in fünf bis 15 Minuten füllen.

Während der Perfusion erweitert sich die Aorta typischerweise auf etwa 140 % ihres ursprünglichen Durchmessers. Wenn Sie fertig sind, entfernen Sie die Perfusion und schließen Sie die Aor-Autotomie mit einer 10-Loch-Naht, um eine Verengung zu vermeiden. Nachdem die Atomy geschlossen ist, muss auch die distale Ligatur entfernt werden.

Wenn es nur geringe oder keine Blutungen aus dem reparierten Atom gibt, wird die proximale Ligatur entfernt. Wenn es eine Blutungsstelle gibt, tränken Sie zusätzliche temporäre 6.0-Ligaturen an den proximalen und distalen Anteilen der Aorta und fügen Sie eine weitere Naht hinzu, um die AOR-Autotomie vollständig zu schließen. Die erweiterte Aorta füllt sich unmittelbar nach der Entfernung der proximalen Ligatur mit Blut.

Sobald der Eingriff an der Aorta abgeschlossen ist, führen Sie den Darm wieder in den Bauch zurück. Wenn er zurückgezogen wurde, schlüpft der Darm als große Einheit hinein und man musste sich keine Gedanken über seine Geometrie machen. Wenn alle Organe an Ort und Stelle sind, kann die äußere Wunde nun in zwei Schichten mit sechs Nähten aus autem Nylon und Polypropylen verschlossen werden.

Geben Sie der Maus nun ein Lokalanästhetikum, z. B. einen Tropfen 0,25 % ICAN pro Zentimeter Schnitt. Geben Sie auch eine Dosis des entzündungshemmenden Carin in einer Menge von fünf Milligramm pro Kilogramm durch subkutane Injektion. Die Operation ist nun abgeschlossen und die Maus sollte auf eine warme Stelle gelegt werden, wo sie wieder zu Bewusstsein kommen kann.

Die Genesung erfolgt in der Regel innerhalb von 15 Minuten. Wenn die Maus wieder zu Bewusstsein kommt, wird sie in einen Einzelkäfig zurückgebracht und während ihrer Genesung regelmäßig überwacht. Nach dem Eingriff erweitert sich die Aorta in der Regel auf etwa 140 bis 160 % ihres ursprünglichen Durchmessers.

Diese anfängliche Dilatation wird mit Stabilisierung bis zum siebten Tag beobachtet. Die schnelle sekundäre Dilatation tritt zwischen dem siebten und dem 14. Tag auf. Am Tag 14 kann das Aneurysma in der infrarenalen Aorta beobachtet werden.

Ich habe Ihnen gerade gezeigt, wie man ein abdominales Aneurysma mit Elastase bei Mäusen indeftiert. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, dass keine Blutgerinnsel im Ata entstehen. Das war's also.

Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihrem Experiment.