Blutdruckmessung in Mäuse mit Volume Druck Recording, ein Tail-Manschette Methode

Das Wort „Coda“ ist italienisch und bedeutet Schwanz. Das nichtinvasive Blutdruckmesssystem Coda ermöglicht die Blutdruckmessung an Nagetieren mithilfe eines speziellen Volumen-Druck-Aufzeichnungssensors, der Änderungen des Blutvolumens im Schwanz misst, wenn er über den Schwanz eines Tieres platziert wird. In diesem Video wird gezeigt, wie das System eingerichtet wird, wie die Tiere vorbereitet werden und wie gleichzeitig Blutdruckmessungen an acht Tieren durchgeführt werden.

Hallo, ich bin Anju Bala Krishnan und arbeite im Labor von Alan Dougherty am Cardiovascular Research Center der University of Kentucky in Lexington. Heute zeigen wir Ihnen ein Verfahren zur Messung des Blutdrucks bei Mäusen mithilfe der Volumen-Druck-Registrierung nach der Schwanzklemmmethode. In unserem Labor verwenden wir dieses Verfahren, um das Herz-Kreislauf-System zu untersuchen.

Beginnen wir also. Um das CODA-System einzurichten, wählen Sie einen Bereich im Labor, in dem die Raumtemperatur stabil bei 20 Grad Celsius oder darüber liegt. Vermeiden Sie Standorte in der Nähe von Klimaanlagenöffnungen, da Lärm oder Gerüche die Tiere reizen oder stressen könnten.

Die tierischen Gerüche können jeden starken Parfümduft umfassen, den Sie tragen könnten. Schalten Sie den Coda-Controller und anschließend die Heizplatten ein, die auf Stufe drei eingestellt sind. Wenn die Raumtemperatur über 25 Grad Celsius liegt, beginnen Sie auf Stufe eins oder zwei.

Führen Sie zuerst den Controller-Diagnosetest durch, öffnen Sie die Coda-Software. Wählen Sie das Coda-Gerät durch Anklicken aus. Klicken Sie auf „Ausgewähltes Gerät testen“.

Wählen Sie die Manschetten und Kanäle aus, die getestet werden sollen, und klicken Sie auf Test. Schließen Sie nach Abschluss des Controller-Diagnosetests das Gerätetest-Fenster. Wählen Sie den Code des zu verwendenden Controllers aus und klicken Sie dann.

Verwenden Sie diese Geräte, um die Software einzurichten. Wählen Sie Werkzeuge zur Personalverwaltung aus. Klicken Sie anschließend auf Forscher eins.

Um den Namen zu ändern, klicken Sie auf nachfolgende Zeilen, um zusätzliche Forscher hinzuzufügen. Klicken Sie dann auf „Daten speichern“. Klicken Sie auf den Reiter „Techniker“, um Techniker zu ändern oder hinzuzufügen.

Klicken Sie danach auf den Reiter „Exemplare“, um die Tiere zur einfachen Identifizierung zu benennen und den TierTyp auszuwählen. Klicken Sie dann auf „Daten speichern“. Schließlich klicken Sie auf den Reiter „Tiere“.

Um die Tierart und Empfindlichkeit zu ändern, klicken Sie auf „Daten speichern“ und anschließend auf „Schließen“. Um ein neues Experiment zu beginnen, wählen Sie Datei Neues Experiment. Geben Sie den Namen des Experiments ein, wählen Sie den verantwortlichen Forscher aus und legen Sie ein Startdatum fest.

Klicken Sie auf „Weiter“. Im nächsten Schritt geben Sie die grundlegenden Sitzungsinformationen ein. Beginnen Sie damit, den Sitzungsnamen einzugeben, und legen Sie die Akklimatisierungszyklen auf fünf fest; wenn Sie keine Akklimatisierungszyklen einbeziehen möchten, stellen Sie den Wert auf null.

Stellen Sie die Anzahl der Sätze auf einmal ein, die Pause zwischen Sätzen auf 30 Sekunden bei mehreren Sätzen. Die Zyklen pro Satz auf 20 Zyklen und die Zeit zwischen den Zyklen auf fünf Sekunden. Klicken Sie dann auf Weiter.

Um mit der Probenauswahl zu beginnen, wählen Sie die Probe aus dem Probenpool aus und weisen Sie sie dem ersten verfügbaren Kanal zu. Klicken Sie dann auf „Weiter“, um die Sitzungsparameter festzulegen. Stellen Sie den maximalen Okklusionsdruck auf 250 Millimeter ein.

Quecksilber-Entlüftungszeit auf 20 Sekunden. Für Mäuse minimales Volumen auf 15 Mikroliter und Anzeigestil auf einen Kanal pro Diagramm. Sie können auch zusätzliche Forscher und Techniker hinzufügen.

Klicken Sie dann auf „Weiter“. Überprüfen Sie das Sitzungsskript und klicken Sie auf „Weiter“. Wählen Sie nicht „Fertig stellen“, bis Sie den Abschnitt zur Tiervorbereitung abgeschlossen haben, der im Folgenden beschrieben wird.

Und nun können Sie die Tiere holen und sie neben das Coda-Blutdruckmesssystem stellen. Notieren Sie vor dem Einsetzen der Tiere in die Halterung die Größe jedes Tieres im Verhältnis zur Größe des ausgewählten Halters. Das Tier sollte die Halterung problemlos betreten können.

Platzieren Sie jedes Tier in einem Halter, indem Sie es am Schwanz anfassen und vorsichtig in das hintere Ende des Halters legen, das zur offenen Seite des Nasenkegels zeigt. Sichern Sie die hintere Abdeckung vorsichtig am Halter, indem Sie die Schraube an der hinteren Abdeckung drehen. Achten Sie darauf, den Schwanz oder andere Körperteile nicht einzuklemmen, während Sie die hintere Abdeckung befestigen.

Nächste Folie. Die Nasenkappe zur hinteren Luke hin ausrichten. Die Bewegung des Tieres begrenzen.

Die Nasenkappe sollte so positioniert sein, dass sie das Tier am Umkehren hindert. Während sich das Tier im Halter befindet, stellen Sie den Halter auf die Wärmeplattform. Lassen Sie dem Tier an der vorgesehenen Position mindestens fünf Minuten Zeit, um sich an den Halter zu gewöhnen.

Berühren oder halten Sie das Tier nicht. Während sich das Tier im Halter befindet, könnte erhöhter Kontakt das Tier reizen, und lassen Sie das Tier niemals unbeaufsichtigt im Halter. Um die Okklusionsmanschette am Schwanz korrekt anzubringen, führen Sie den Schwanz durch die Okklusionsmanschette und platzieren Sie die Manschette so nah wie möglich an der Schwanzbasis, ohne Gewalt anzuwenden.

Danach führen Sie das Schwanzende durch die VPR-Sensorhülse und platzieren es innerhalb von zwei Millimetern von der Okklusionshülse. Befestigen Sie den Schlauch in der Nut an der oberen Rückseite des Halters. Die Okklusionshülse am Schwanz wird aufgeblasen, um die Durchblutung des Schwanzes zu verhindern.

Die Okklusionsmanschette wird langsam entleert, und die VPR-Schwanzmanschette, die einen speziell konzipierten Sensor enthält, misst die physiologischen Eigenschaften des zurückkehrenden Blutflusses, während das Blut in den Schwanz zurückkehrt. Die VPR-Sensor-Manschette misst die Schwellung des Schwanzes infolge der arteriellen Pulswellen des Blutflusses. Der systolische Blutdruck wird automatisch beim ersten Auftreten der Schwanzschwellung gemessen.

Der diastolische Blutdruck wird automatisch berechnet, wenn die Zunahme der Schwellung im Schwanz nachlässt. Nachdem alle Tiere in den Haltern platziert und die Manschetten an ihren Schwänzen angelegt wurden, sollten sie mindestens fünf Minuten lang zur thermischen Regulation freigelassen werden. Notieren Sie die Körpertemperatur der Tiere.

Bei Verwendung eines Infrarot-Thermometers sollte die Körpertemperatur des Tieres gewöhnlich zwischen 32 und 35 Grad Celsius liegen. Da die Tiere nun bereit sind, können wir mit dem Experiment beginnen. Klicken Sie auf „Fertig“, um das Experiment zu starten.

Die rote Linie stellt die Entleerung der Okklusionsmanschette und der VPR-Sensormanschette dar. Die blaue Linie stellt die Blutvolumenänderungen im Schwanz dar. Der erste Wendepunkt der blauen Linie, also die minimale Änderungsrate, kennzeichnet den systolischen Blutdruck.

Die zweite Wendestelle der blauen Linie, also die maximale Änderungsrate, kennzeichnet den diastolischen Blutdruck, sobald das Experiment beendet ist. Entfernen Sie die Tiere unmittelbar von den Manschetten und dem Halter. Es wird ein einfacher Sitzungs-Zusammenfassungsbericht angezeigt.

Die im Experiment gesammelten Daten werden als Excel-Datei gespeichert. Es gibt mehrere Möglichkeiten, die Daten innerhalb der Excel-Datei zu verarbeiten. Eine gängige Vorgehensweise ist es, den Mittelwert und die Standardabweichung zu berechnen und Messungen zu löschen.

Wenn die Standardabweichung größer als 30 ist. Außerdem können abgelehnte Zyklen eingesehen und die gesamte Datenbank problemlos nach Excel exportiert werden. Konsultieren Sie das schriftliche Protokoll und das Benutzerhandbuch.

Weitere Informationen: Ich habe Ihnen gerade gezeigt, wie man den Blutdruck bei Mäusen nichtinvasiv mithilfe der Volumen-Druck-Aufzeichnung misst. Um genaue und konsistente Messwerte zu erhalten, ist es äußerst wichtig, den Stress für die Tiere durch Einhaltung dieses Verfahrens zu minimieren. Das war's also.

Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei den Experimenten.