Name: Wolbachia Bakterielle Infektion in Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Erfahren Sie ein effizientes Protokoll zur Isolierung von Wolbachia aus infizierten Drosophila-Fliegen und deren Injektion in nicht infizierte Fliegen. Diese Methode erleichtert die Erforschung von Infektionsdynamiken.

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

wolbachia bakterielle infektion in drosophila

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia Bakterielle Infektion in Drosophila

Mein Name ist Voia Friedman. Ich bin assoziierte Forscherin an der Princeton University. Heute werde ich Ihnen einige Protokolle vorstellen, die ich entwickelt habe, um eine Transinfektion durchzuführen, ursprünglich zur Isolierung und Rückgewinnung von Helicobacter aus infizierten Fliegen, und später auch zur Injektion des Helicobacter-Präparats in nicht infizierte Fliegen.Im Grunde handelt es sich hierbei um ein sehr einfaches Protokoll, um ihn für Grundlagenzwecke zu isolieren. Sie verwenden dabei ein Gerät von mepo, das einen Filter enthält, der auf ein E. passt. Man beginnt im Grunde genommen mit etwa hundert Fliegen. Sie betäuben die Fliegen, geben sie in die Filtervorrichtung, können einfach ein Trichter verwenden, der sich sehr leicht auf dieses Gerät aufsetzen lässt, und spülen sie mit 70 % Ethanol ab.Sie nehmen einfach die zukünftige weg, können Sie das Ethanol wegwerfen, und danach, nach dreimaligem Waschen, waschen Sie zum Schluss mit Molekularwasser, da Sie keine Bakterien mit Ethanolrückständen haben möchten. Nun gehen Sie einfach zu einer neuen Probendose und zentrifugieren zwei Minuten lang in einem echten Mikro. Später können Sie dann injizieren. Er füttert nur unbeeinflusste Fliegen.Im Grunde nehmen Sie ein doppelseitiges Klebeband, das normalerweise zwei Seiten hat, von denen eine Seite klebend ist und die andere weniger. Lassen Sie daher die klebende Seite nach oben zeigen, da dies die Seite ist, auf die Sie die Fliegen kleben werden. Wenn Sie die Gasapparatur mit einer Lampe darüber verwenden, tritt kein Gasfluss auf, und die Fliegen wachen auf, wenn sie sich auf der Oberseite des Objektträgers befinden.Sie können also den Luftstrom lenken und mit Klebeband eine kleine Haube oder eine kleine Kammer bilden. Dann leiten Sie das Gas über die Fliegen. Anschließend befestigen Sie diese Lampe hier mit dem Klebeband, und schon haben Sie Ihre Fliegen.Fixieren Sie die Fliegen mit der gleichen Orientierung auf der Oberseite des Klebebands, sodass ihre Köpfe in die Richtung weisen, aus der Sie die Nadel einführen werden. Auf diese Weise können Sie direkt über den Flügel arbeiten und sicherstellen, dass die Fliegen nicht wegfliegen, falls sie während des Eingriffs aufwachen.Stellen Sie also sicher, dass Sie leicht mit der Pipettenspitze gegen die Flügel der Fliege am Schwanz drücken. Es ist in Ordnung, wenn die Flügel beschädigt werden. Wenn Sie die Fliegen zur Injektion aufnehmen, verlieren sie höchstwahrscheinlich ohnehin ihre Flügel, überleben aber trotzdem.Das kann nützlich sein, da man so die Fliegen nicht verliert. Er trägt also ein Mineralöl auf den Mikrometer für die Rückseite der Nadel auf, dann die polare Injektionsnadel, und anschließend kann man einfach den Druck regulieren, um das Material bis zur Nadelspitze zu befördern. Ich injizierte zwischen 10 und 15 Nanolitern, aber solange ich konsistent bleibe, ist das in Ordnung. Ein wichtiger Aspekt bei diesem Experiment ist, dass die Fliege, sobald die Applikation injiziert wird, so platziert sein muss, dass die Nadel so weit wie möglich durch den oberen Teil des Abdomens vorgedrungen ist.Da hier, im Grunde, wenn die Nadel eindringt, ein größerer Raum zum Hoch- und Runterfahren vorhanden ist. Und grundsätzlich ist es, wenn die Nadel näher an der Nagelhaut liegt, unwahrscheinlicher, dass lebenswichtige Organe während des Flugs verletzt werden. Es ist beispielsweise sehr unwahrscheinlich, dass Sie eine Öffnung in Ihrem Darm verursachen, was den Flug, bei dem Sie die Operation durchführen, töten würde.Mein Name ist Voia Friedman. Ich bin assoziierte Forscherin an der Princeton University im Labor von Eric Hels. Und heute möchte ich Ihnen etwas über dieses Protokoll erzählen, das Sie gerade gesehen haben, die Demonstration.Daher wurde dieses Protokoll durchgeführt, um zu beweisen, dass UBA in der Lage ist, Gewebe zu durchdringen. UBA ist einer der erfolgreichsten intrazellulären Parasiten auf der Erde und infiziert 20 bis 70 % der Insekten sowie viele andere Arthropoden.Und ist außerdem sehr wichtig im Hinblick auf menschliche Krankheiten, da sie auch Fadenwürmer infiziert, die Krankheiten wie Flussblindheit oder Filariose übertragen. Und so ist CCA ein obligater Endosymbiont in diesen Würmern. Und es besteht großes, sehr großes Interesse daran, CCA auch als Mittel zur Bekämpfung von parasitären Krankheiten einzusetzen, die von Moskitos und Danny übertragen werden, und von Moskitos wie Malaria und Dengue.Dieses Protokoll wurde im Wesentlichen entwickelt, um zu zeigen, dass CCA, sobald sie sich in der Bauchhöhle einer Fliege befinden, Gewebe durchdringen und die Keimzellen erreichen können. Im Wesentlichen können Sie hier das Oph des Drosophila-Ovars beobachten, und sobald es im He-Blatt vorhanden ist, kann es eine rosa markierte Perionialhülle durchqueren, die das Ovar umgibt.Dann durchqueren sie eine Muskelschicht. Tatsächlich ist eine der ersten Stellen, an denen sie in den Eierstock eindringen, das Bild der somatischen Stammzellen. Anschließend können sie die Keimbahn erreichen.Und diese Bakterien werden auf dieselbe Weise übertragen wie die Mitochondrien, nämlich über die Mutter, über die im Ei vorhandenen mütterlichen Cytoplasmapartikel. Daher müssen sie natürlich in der Keimbahn vorhanden sein. Deshalb wurde dieses Protokoll entwickelt.Und dieses Protokoll kann sehr nützlich sein, da die traditionelle Methode, mit der Menschen versucht haben, WbAa zu übertragen, darin bestand, WbAa zu nehmen und eine neue Insektenart einzuführen. Dies geschah durch Mikroinjektionen in das Embryo. Diese Methode ist jedoch weitaus komplizierter.Und hier nutzen wir im Grunde die Biologie der O aus, da sie in der Lage sind, Gewebe zu durchdringen und in das Stammzellgewebe einzudringen; sie können somit in die Keimbahn gelangen. Dadurch wird es einfacher, UBA von bestimmten Insektenarten, die infiziert sind, zu gewinnen, und diese können dann auf nicht infizierte Arten übertragen werden. Wahrscheinlich ist es meiner Ansicht nach die Injektion selbst.Grundsätzlich müssen Sie darauf achten, die Fliege so gut wie möglich zu fixieren. Dazu verwenden wir doppelseitiges Klebeband, und Sie müssen die Nadel so nahe wie möglich parallel zur Fliege und so flach wie möglich einführen, um nicht zu tief einzudringen. Auf diese Weise ist es weniger wahrscheinlich, dass die Fliege während des chirurgischen Eingriffs stirbt.

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Systemische bakterielle Infektion und Immunabwehr Phänotypen in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

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Aufzucht der Fruit Fly<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Unter Axenic und gnotobiotische Bedingungen

Aedes Aegypti Moskitos mit Wolbachia infiziert werden in natürlichen Populationen zu unterdrücken, die Übertragung von Arboviren freigesetzt. Wir beschreiben Methoden nach hinten Ae. Aegypti mit Wolbachia Infektionen im Labor für Experimente und Feld Freigabe, Vorsichtsmaßnahmen zum Labor Anpassung und Auswahl zu minimieren.

Pflege, Aedes Aegypti Moskitos mit Wolbachia infizierte

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Mündliche bakterielle Infektion und Shedding in Drosophila melanogaster

Dieses Protokoll beschreibt die Virusinfektion in Vivo in Drosophila Melanogaster mit dem Nano-Injektionsverfahren und Grundtechniken zu Virus-Wirt Interaktionen analysieren zu etablieren.

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Drosophila melanogaster erwachsene Fliegen wurden ausgiebig als Modellorganismen verwendet, um die molekularen Mechanismen zu untersuchen, die antimikrobiellen angeborenen Immunantworten des Wirts und mikrobiellen Infektionsstrategien zugrunde liegen. Um das Larvenstadium von D. melanogaster als zusätzliches oder alternatives Modellsystem zu fördern, wird eine Larveninjektionstechnik beschrieben.

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Vier Methoden wurden verwendet, um intrazelluläre Wolbachia nachzuweisen, die sich gegenseitig ergänzten und die Nachweisgenauigkeit der Wolbachia-Infektion von Aedes albopictus-abgeleiteten Aa23 und Aa23-T, die von nativer Wolbachia-Infektion mit Antibiotika geheilt wurden, verbesserten.

Nachweis des Wolbachia-Stammes wAlbB in Aedes albopictus-Zelllinien

Zelllinien sind nützlich für Studien an intrazellulären Organismen, die nicht außerhalb ihrer Wirtszellen kultiviert werden können. Obwohl Wolbachia-infizierte Linien viele Entdeckungen ermöglicht haben, kann die Heterogenität innerhalb dieser Linien zu unterschiedlichen experimentellen Ergebnissen führen. Wir stellen ein Protokoll zur Generierung von Einzelzellklonen und kontinuierlichen Kulturen aus Wolbachia-infizierten JW18-Zellen vor.

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Erfahren Sie ein effizientes Protokoll zur Isolierung von Wolbachia aus infizierten Drosophila-Fliegen und deren Injektion in nicht infizierte Fliegen. Diese Methode erleichtert die Erforschung von Infektionsdynamiken.

Wolbachia Bakterielle Infektion in Drosophila

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