Retrieval von Maus-Oozyten

Mein Name ist Amanda dli. Ich komme aus dem Labor von Dr. Paul Verana an der University of California Irvine. Heute werde ich Ihnen das Verfahren zur Eizellentnahme zeigen.

Dies beinhaltet die Isolierung des Videx vom Weibchen. Sobald die Ovex isoliert sind, injizieren wir FHM-Medien durch den Videx, woraufhin die Cytes aus dem Uterus austreten sollten. Sobald dies erfolgt ist, isolieren wir die Cytes in den Medien und verwenden sie für zukünftige Experimente.

Was Sie möglicherweise zusätzlich zur Isolierung von Zellen mit diesem Verfahren erreichen können, ist die Isolierung von Embryonen zu bestimmten Zeitpunkten. Ein Grund, warum Sie sich dieses Verfahren in Videoform ansehen möchten, liegt darin, dass die verschiedenen Abschnitte des Eileiters sehr schwer zu erkennen sein können. In diesem Video werde ich auf das Fimbrienende hinweisen, wo Sie das FHM-Medium injizieren werden.

Die chirurgischen Instrumente, die Sie verwenden werden, sind zwei Paar scharfer Pinzetten und ein Paar scharfer Scheren. Die aus dem Weibchen entnommenen Eileiter werden in FHM-Medium platziert, das sich in einer 35-Millimeter-Zellkulturschale befindet. Die Eier werden mit einer stumpfen 30-Millimeter-Nadel, die an eine Ein-Milliliter-Spritze angeschlossen ist, entnommen, und das uc wird mit einer scharfen Pinzette stabilisiert.

FHM ist ein Aufbewahrungsmedium, das zum Sammeln der Zellen verwendet wird. KSOM ist das Medium, in dem die Zellen im Inkubator wachsen, falls sie befruchtet werden. Sobald die Eizellen und Embryonen aus dem Eileiter gewonnen wurden, verwenden wir eine aus einem Kapillarrohr gezogene Glas-Transferpipette, die mit etwas Schlauch verbunden ist, um sie mittels Mundpipettierung in ein Aufbewahrungsmedium zu überführen.

Eine Glasmulde wird verwendet, um die Embryonen und Eier aufzunehmen. Diese können in jede konkave Mulde gelegt werden, sodass sie sich an einer übersichtlichen Stelle befinden und leichter zu finden sind. Diese wird in diesen Behälter gestellt, sodass sie ohne Verwendung von Öl in einen CO2-Inkubator gegeben werden kann.

Auf das FHM-Medium oder KSOM, je nach Medium, wird Wasser in die Basis gegeben, der Hahn wird geschlossen und die Flüssigkeit verbleibt an Ort und Stelle. 70 %igen Ethanol wird verwendet, um sicherzustellen, dass die Haare nicht im Weg sind. Wir führen einen kleinen Einschnitt im Bauchbereich und einen Einschnitt in der Bauchhöhle durch.

Wir vergrößern einen Schnitt, um die Bauchgegend freizulegen. Sobald dies geschehen ist, um die Gebärmutter freizulegen, verschieben wir beiläufig die Eingeweide, und dann befindet sich die Gebärmutter ziemlich weit unten. Die Gebärmutter ist Y-förmig, und sie drehen sich stark, wobei ein Teil der Gebärmutter beteiligt ist.

Wenn es so weit ist, sieht der durchtrennte Eileiter aus wie Spaghetti. Ich werde versuchen, einen Teil des Eileiters zu entnehmen. Ich entnehme den UCT und einen Teil der Eierstöcke, der von Fettgewebe umhüllt ist.

Die andere Seite wird nun entnommen. An diesem Punkt greifen wir erneut den Eierstock oder die Gebärmutter an. Greifen Sie hier die Gebärmutter an und schneiden Sie unterhalb unserer Befestigungsstelle. An dieser Stelle befinden sich die Eileiter.

Ich werde einen Teil des Eierstocks OV mitnehmen. Dieser wird anschließend in Medium gegeben. Der Uterus zieht sich weiterhin zusammen.

Der Uterus besteht aus glatter Muskulatur, sodass die Neuronen weiterhin feuern, auch wenn er vom Körper abgetrennt ist. Der Uterus ist hier dargestellt. Während der Eileiter wie Spaghetti aussieht und der Ovar darüber liegt, ist der Eileiter tatsächlich nicht mit dem Ovar verbunden.

Obwohl wir an dieser Stelle nur einen Teil des Eierstocks gezeigt haben, ist meine dominante Hand die rechte Hand, mit der ich die stumpfe Nadel mit 30 Gauge halte. Ich verwende sie wie eine Pinzette, um die In Fibula zu isolieren. Sobald diese isoliert ist, werde ich die stumpfe Nadel in die In Fibula einführen und eine Flüssigkeit injizieren, die aus der Gebärmutter austritt.

Meine linke Hand hält eine scharfe Pinzette. Diese dient dazu, die in der Fibula zu isolieren und alles an seinem Platz zu halten. Die am dula ist hier trumpetförmig isoliert.

Die Spitze meiner Nadel befindet sich in der Fibula, die durch die Gewebeschicht hindurchragt. Um sicherzustellen, dass ich alle Embryonen und Eier isoliert habe, quetsche ich den Uterus wie eine Zahnpastatube aus. Wenn Sie sich auf die Fettgewebe konzentrieren, suchen Sie nach fettartigen Tröpfchen, die vollständig symmetrisch erscheinen.

Da ist gerade eines, direkt links von dem langen Fettrand. Das ist ein einzelnes Ei. Ich werde jetzt also mit der Mundpipette das Ei aufnehmen und in etwas frisches Haltungsmedium überführen, um so die Eier selbst zu isolieren.

Heute habe ich Ihnen gezeigt, wie man Zellen aus dem weiblichen Fortpflanzungstrakt isoliert. Außerdem habe ich Ihnen die verschiedenen Strukturen des Eileiters gezeigt. Insbesondere das Infundibulum, die einzige Struktur, in die man das FHM-Medium injizieren kann.

Mit einer 30-Gauge-Nadel. Mit dieser Technik habe ich Zellen sowie eventuell vorhandene Embryonen aus dem weiblichen Fortpflanzungstrakt isoliert. Ich kann diese für Genexpressionsstudien oder transgene Arbeiten verwenden.