Name: Dünnschnitt der Scheibe Vorbereitungen für die Immunhistochemie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Lernen Sie die Kryostatschnitttechnik für kleine Gewebeproben und Gehirnschnitte mit einer Aluminium-Gefrierstufe. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare 5-10 Mikrometer dünne Schnitte für die Immunhistochemie.

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<ol><li> Bereiten Form von Band für die OCT-Plattform. </li><li> Fill Form mit Oktober Einfrieren des Kryostaten oder mit zerkleinertem Trockeneis. </li><li> Entfernen Sie das Klebeband aus der ganzen gefrorenen OCT-Plattform. </li><li> Richten Sie Markierungen auf dem Gefrierpunkt Spannfutter und Kryostat Montage der Bühne und Schloss im Futter. </li><li> Schnitt durch OCT-Plattform bis die Oberfläche ist flach. </li><li> Entfernen Sie tauchte OCT-Plattform und am Kryostaten Einfrieren der Bühne. </li><li> Legen Sie Gewebeprobe (bisher mit 30% Glycerin oder Saccharose in PBS kryokonserviert) in Oktober </li><li> Bereiten Sie das Einfrieren Spalte mit Außenring projizieren ca. 5 mm über der Oberseite der Säule bildet auch für Oktober </li><li> Vorsichtig Position Gewebeprobe in die Mitte der Gefrierpunkt Spalte Oberfläche und langsam Okt bis gut gefüllt ist. </li><li> Surround Einfrieren Spalte mit zerkleinertem Trockeneis. Tissue-und OCT sollte vollständig innerhalb 20-60 Sekunden einfrieren. </li><li> Als Vorbereitung Temperaturerhöhungen, kann der Außenring entfernt, während die Probe bleibt eingefroren werden. </li><li> Slide Probe aus dem Gefrierpunkt Spalte seitlich und in Kryostaten. </li><li> Legen drop der OCT auf der Oberfläche des OCT-Plattform und die Position Probe (Gewebe down) Anwendung festem Druck. Specimen wird schnell auf OCT-Plattform einfrieren. </li><li> Sichere Spannfutter auf Kryostat Montage der Bühne mit den Noten ausgerichtet. </li><li> Schnitt durch Oktober oberflächlich auf die Gewebeprobe. </li><li> Thaw montieren dünne Schnitte auf Objektträger und speichern gefroren oder bei Raumtemperatur. </li><li> Immunreaktionen können für das Tissue auf Glasträger montiert durchgeführt werden. </li><li> Reagenz wird auf Folie gebündelt, können leicht geschüttelt werden und kann gedeckt, wenn lichtempfindlichen werden. </li><li> Spätere Phasen der Umsetzung sind einfach durch Umdrehen Abgleiten in die Abfallbehälter durchgeführt, Feuchtigkeitsregulierung der Folie, und dann die Anwendung des nächsten Reagenz. </li></ol>

<ol><li>Scoutern, C. W., O'Connor, R., Cunningham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+research+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Today%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of research animals.</a> Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).</li>
<li>Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diminished+serotonergic+innervation+of+adult+medial+prefrontal+cortex+after+6-OHDA+lesions+in+the+newborn+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).</li>
</ol>

Das Protokoll hier vorgestellten bietet den Forschern eine prägnante, leicht zu folgen skizzieren, wie dünn Kryostatschnitte von kleinen, schwer zu verwalten, Gewebeteile, wie Biopsien und Hirnschnitten für weitere Studien durchgeführt werden, wie erhalten verschiedenen Färbemethoden, in-situ-Hybridisierung oder Immunhistochemie.

<table><tbody><tr><td>O. C. T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Glycerinlösung</td><td></td><td></td><td>30%ige Glycerinlösung in PBS, w/v</td></tr><tr><td>Saccharoselösung</td><td></td><td></td><td>30%ige Saccharoselösung in PBS, w/v</td></tr></tbody></table>

dünnschnitt der scheibe vorbereitungen für die immunhistochemie

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Viele Untersuchungen in den Neurowissenschaften sowie anderen Disziplinen, auch mit der Analyse kleine, aber makroskopische Stücke oder Abschnitte von Gewebe, die erhalten wurden, frisch entfernt oder ausgeschnitten, aber lebensfähig gehalten, wie in Scheibe Vorbereitungen des Hirngewebes. Nachfolgende mikroskopische Untersuchungen dieses Materials kann eine Herausforderung sein, da die Gewebeproben kann schwierig zu handhaben. Hier gezeigt wird ein Verfahren zur Gewinnung dünne Kryostatschnitte des Gewebes mit einer Dicke von 0,2 bis 5,0 mm, die reichen können. Wir routinemäßig Schnitt 400 Mikron dick Vibratom Hirnschnitten seriell in 5-10 Mikrometer koronalen Kryostatschnitte. Die Scheiben sind in der Regel zunächst für Elektrophysiologie Experimente verwendet und dann verlangen, mikroskopische Analyse der Zytoarchitektur der Region, aus der die Aufnahmen wurden nicht beobachtet. Wir haben ein einfaches Gerät, das kontrollierte und reproduzierbare Herstellung und Positionierung der Gewebeschnitt erlaubt konstruiert. Dieses Gerät besteht aus einem Zylinder 5 cm in der Länge mit einem Durchmesser von 1,2 cm, die als Bühne für das Einfrieren der Scheibe dient. Ein Ring eng gleitet über den Zylinder bietet Mauern um die Scheibe so dass das Gewebe in dem Gefrierpunkt Verbindung eingetaucht werden (zB OCT). Dies ist dann schnell mit zerstoßenem Trockeneis eingefroren und die daraus resultierenden Wafer Position leicht für Kryostat Schnitte. Dünne Schnitte werden können Tau-montiert auf beschichtete Objektträger, damit weitere Untersuchungen durchgeführt, wie verschiedene Färbemethoden werden, in-situ-Hybridisierung oder Immunhistochemie, wie hier gezeigt.

Das vorliegende Verfahren ermöglicht reproduzierbare Kryostat Schnitte von kleinen, schwer zu verwalten, Gewebeteile, wie Biopsien und Hirnschnitten. Wir verwenden ein einfaches Aluminium Einfrieren der Bühne um die Behandlung von Gewebe-und ein Standard-Kryostat routinemäßig produzieren 5-10 Mikrometer Serienschnitte von 400 Mikrometer dicken Hirnschnitten zu erleichtern.

Dünnschnitt der Scheibe Vorbereitungen für die Immunhistochemie

Viele Untersuchungen in den Neurowissenschaften sowie in anderen Disziplinen beinhalten die Untersuchung kleiner, jedoch makroskopischer Gewebestücke oder -schnitte, die ...

Hallo, mein Name ist Jun Park, Forschungsstipendiat an der Harvard Medical School, und ich bin außerdem Medizinstudent am Y-Universitäts-College of Medicine, Severance Hospital, EO Korea. Dies sind die Materialien für das Dünnschneiden von Schnittpräparaten. Ich bereite eine Form aus Klebeband, vier OCT-Plattformen vor.Ich forme mit OCT und friere im Kryostaten oder unter Verwendung von zerkleinertem Trockeneis, wobei ich TAFE von der gefrorenen OCT-Plattform entferne. Ich markiere Ausrichtungshilfen auf der Einfrierkreide und der Montagestufe des Kryostaten und fixiere die Kreide. Ich schneide durch die OCT-Plattform.Die Oberfläche von Ontario ist flach. Ich entferne die nachbearbeitete OCT-Plattform und platziere sie auf der Gefriermühle des Kryostaten. Ich gebe diese Probe in OCT, und diese Probe wurde zuvor mit 30 % Glycerin oder Saccharose in PBS kryokonserviert.Dies ist der Schritt zur Vorbereitung der Gefriermatrix mit einem äußeren Ring, der etwa fünf Millimeter über die Oberseite der Matrix hinausragt und so einen Hohlraum bildet. Ich positioniere die Gewebeprobe sorgfältig in der Mitte der Oberfläche der Gefriermatrix und fülle den Hohlraum langsam mit OCT, bis er vollstä

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Forschung

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Biology

Biologie

Das folgende Video beschreibt, wie die Morphologie eines Gewebes durch Formalinfixierung und Paraffineinbettung erhalten werden kann.

Konservierung von formalinfixiertem Paraffin-eingebettetem (FFPE): Eine Methode zur Untersuchung der Gewebemorphologie

Dieses Einführungsprotokoll beschreibt die Reagenzien, Geräte und Techniken, die erforderlich sind, um die immunhistochemische Färbung von Nagetiergehirnen durchzuführen, am Beispiel von Markern für Mikroglia und neuronale Elemente.

Primer für die Immunhistochemie auf gefriergeschnitten Rat Brain Tissue: Beispiel Färbung für Mikroglia und Neuronen

Die in diesem Artikel beschriebene indirekte Immunofluoreszenz-Protokoll ermöglicht den Nachweis und die Lokalisierung von Proteinen in der Milchdrüse der Maus. Eine vollständige Verfahren wird gegeben, um Brustdrüsenproben herzustellen, um die Immunhistochemie die Gewebeschnitte durch Fluoreszenzmikroskopie durchführen, um Bild und um Bilder zu rekonstruieren.

Die indirekte Immunfluoreszenz auf Gefrierschnitte von Mäusemilchdrüse

Viele Arten von menschlichen Hirntumoren sind auf bestimmte Regionen innerhalb des Gehirns beschränkt und in Kultur schwer zu züchten. Dieses Protokoll befasst sich mit der Rolle der Tumormikroumgebung und untersucht neue medikamentöse Behandlungen durch die Analyse fluoreszierender primärer Hirntumorzellen, die in einem organotypischen Maushirnschnitt wachsen.

Ein Hirntumor / Organotypischen Co-Kultursystem für die Untersuchung Tumor-Microenvironment und gezielte Arzneimitteltherapie

Hier bieten wir eine einfache, kostengünstige und zeitsparendes Protokoll zu chemisch fixieren Primaten Hirngewebe mit Acrolein Fixiermittel, so dass für die Langzeitarchivierung, die kompatibel mit vorge Einbettung Immunhistochemie für die Transmissionselektronenmikroskopie.

Herstellung von nichtmenschlichen Primaten Hirngewebe für die Pre-Einbettung Immunhistochemie und Elektronenmikroskopie

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Verbesserung der Paraffin-Schnitt. Diese Methode verbindet schneiden und schweben mit einer einfachen thermostatischen Kammer, um den Transfer-Prozess erforderlich, nach der herkömmlichen Methode zu vermeiden. Infolgedessen wurden die Effizienz und die Anzahl der intakten Paraffin Abschnitte erheblich verbessert.

Das Schneiden und schwimmende Methode für Paraffin-eingebetteten Gewebe für Schneiden

Wir stellen eine Methode zur Energieerzeugung, Anbau und systematische Analyse der organotypischen Scheiben aus murinen Lungentumoren abgeleitet. Wir beschreiben auch für Scheibendicke optimieren und das Medikament Konzentrationen zur Behandlung von Tumor-Scheiben auswählen.

Einrichtung und Analyse der Tumor Slice Explants als Voraussetzung für diagnostische Tests

Ein Protokoll zur Vorbereitung frei schwebender Scheibenkulturen aus dem erwachsenen menschlichen Gehirn wird vorgestellt. Das Protokoll ist eine Variation der weit verbreiteten Slice-Kultur-Methode mit Membraneinsätzen. Es ist einfach, kostengünstig und wird für die Durchführung von kurzfristigen Assays empfohlen, die darauf abzielen, Mechanismen der Neurodegeneration hinter altersbedingten Hirnerkrankungen zu entwirren.

Kurzfristig frei schwebende Scheibenkulturen aus dem erwachsenen menschlichen Gehirn

Die Free-Floating-Technik ermöglicht es Forschern, histologisch basierte Färbungen einschließlich Immunhistochemie an festen Gewebeschnitten durchzuführen, um biologische Strukturen, Zelltypen sowie Proteinexpression und -lokalisation sichtbar zu machen. Dies ist eine effiziente und zuverlässige histochemische Technik, die für die Untersuchung einer Vielzahl von Geweben wie Gehirn, Herz und Leber nützlich sein kann.

Histologische Färbungen mit frei schwebenden Gewebeschnitten

Dieses Protokoll beschreibt eine zuverlässige Methode zur Gewinnung hochwertiger Kryoschnitte ganzer Kaninchenaugen. Es beschreibt Verfahren zur Dissektion, Fixierung, Einbettung und Sektion von Kaninchenaugen, die leicht für den Einsatz in jeder Studie angepasst werden können, bei der die Immunhistochemie bei größeren Augen eingesetzt wird.

Gewinnung hochwertiger Kryoschnitte von ganzem Kaninchenauge 

Lernen Sie die Kryostatschnitttechnik für kleine Gewebeproben und Gehirnschnitte mit einer Aluminium-Gefrierstufe. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare 5-10 Mikrometer dünne Schnitte für die Immunhistochemie.

Dünnschnitt der Scheibe Vorbereitungen für die Immunhistochemie

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