Name: Isolierung humaner Nabelschnur arteriellen glatten Muskelzellen (HUASMC) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Lernen Sie die Isolierung humaner glatter Muskelzellen aus Nabelschnurarterien mit enzymatischer Behandlung. Diese Methode gewährleistet hohe Zellviabilität für zellbiologische Forschung.

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Krankenhaus Amato Lusitano, Castelo Branco Portugal. Krankenhaus Sousa Martins, Guarda Portugal.

<ol><li> Arterien sind von UC Stücke von 3-7 cm erreicht. </li><li> Wharton Sulze, dass die Arterien umgibt wurde sorgfältig durch Schneiden mit der Schere entfernt. </li><li> A blunt-end Nadel aus einem äußeren Durchmesser von 0,6-1mm war ca. 7mm von einem Ende des seziert Arterien eingesetzt. </li><li> So entfernen Sie das verbleibende Blut in den Gefäßen sind die Arterien senkrecht gehalten und perfundierten mit etwa 20 bis 40 mL, physiologischer Kochsalzlösung (PSS), mit einem 20-ml-Spritze verbunden mit einer Nadel. Wenn nötig, wurde dieser Waschschritt für mehrere Male wiederholt. </li><li> Das gleiche Verfahren wurde wiederholt mit RPMI 1640 mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) ergänzt. </li><li> Ein Ende des Blutgefäßes geschlossen wurde. Ein 10-ml-Spritze wurde mit der Nadel verbunden und perfundierten mit 3 ml Kollagenase Typ I (800 Einheiten / ml in gepufferten Salzlösung Hanks Solution (HBSS)). Dann werden die anderen extremityof das Schiff war ebenfalls geschlossen. </li><li> Das Schiff wurde inkubiert mit Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS) für 15 min bei 37 ° C unter Rühren. </li><li> Nach dem Ende des Schiffes wurden geschnitten, um den freien SMCs sammeln. Die Arterien wurden perfuse mit etwa 20 bis 40 ml DMEM-F12 mit 5% FBS und Antibiotika, um eine 50-ml-Röhrchen ergänzt. </li><li> Das Rohr wurde bei Raumtemperatur (250 g, 8 min) zentrifugiert und Zellpellet wurde in 5 ml DMEM-F12 mit 5% FBS resuspendiert. </li><li> Die Zellsuspension wurde zu einer Kollagen-beschichteten T-Kolben überführt und bei 37 ° C unter einer 5% CO 2 befeuchteten Atmosphäre. </li><li> Nach 5 16 h, die nicht haftenden Zellen und zelluläre drebis wurden entfernt, 5 ml Kulturmedium zugegeben und die Zellen wurden bei 37 ° C unter einer 5% CO 2 befeuchteten Atmosphäre. </li><li> Die Zellkulturmedien wurde alle 2 3 Tage, bis SMCs Konfluenz erreichten. </li><li> Nachdem die Zellen erreicht Zusammenfluss wurden sie in zwei oder drei 25 cm 2 T-Flaschen ausgesät. </li></ol> Cleanup <ol><li> Entsorgen von Nadeln in Sharps Container. </li><li> Entsorgen von Spritzen in großen Behälter für biologischen. </li><li> Legen Sie alle Gewebe in einen kleinen Beutel für biologisches Risikomaterial. Schließen Sie die Tasche und bei -20 ° Celsius bis Verbrennung. </li><li> Weichen Sie alle Instrumente in viruzid für mindestens 10 min. </li><li> Nicht verwendete Medien Kühlschrank. </li><li> Entsorgen von Handschuhen in biohazard Abfall. </li></ol>

<ol><li>Van Rijen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions+in+human+umbilical+cord+endothelial+cells+contain+multiple+connexins%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins.</a> The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).</li>
<li>Martín de Llano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedure+to+consistently+obtain+endothelial+and+smooth+muscle+cell+cultures+from+umbilical+cord+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels.</a> Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).</li>
<li>Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+human+endothelial+cells+derived+from+umbilical+veins.+Identification+by+morphologic+and+immunologic+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria.</a> J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).</li>
<li>Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+umbilical+artery+smooth+muscle+cells+expressing+functional+calcium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology-Animal%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).</li>
</ol>

Die SMC kann als Modell für zukünftige Tests mit constrictor Drogen verwendet werden, zu isolieren und strukturell charakterisieren L-Typ Calcium-Kanälen, um zelluläre und molekulare Aspekte der vaskulären Funktion zu untersuchen und sie in das Tissue Engineering verwenden. SMCs und ECs sind für die Entwicklung von neuen Biomaterialien, die in die Produktion von Halbzeugen synthetische Blutgefäße beim Menschen eingesetzt werden eingesetzt werden können fundamental.

<table><tbody><tr><td>DMEM-F12</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>095K8311</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Biochrom AG</td><td>0117T</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>3103806</td><td></td></tr><tr><td>Kollagen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>067K2302</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotikum</td><td></td><td></td><td>10 &amp;#x03BC;L/ 1 mL Medium</td></tr><tr><td>Schere</td><td></td><td></td><td>sterilisiert</td></tr><tr><td>Kanüle</td><td></td><td></td><td>Durchmesser von 0,6–1 mm</td></tr><tr><td>Spritze</td><td></td><td></td><td>10–20 mL</td></tr><tr><td>Physiologische Kochsalzlösung (PSS)</td><td></td><td></td><td>20–40 mL pro Arterie</td></tr><tr><td>Kollagenase Typ I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>047K1052</td><td>3 mL pro Arterie</td></tr><tr><td>Hank&amp;rsquo;s gepufferte Salzlösung (HBSS)</td><td></td><td></td><td>verdünnte Kollagenase</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td></td><td></td><td>auf 37&amp;#x00B0;C erwärmt</td></tr></tbody></table>

isolierung humaner nabelschnur arteriellen glatten muskelzellen (huasmc)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Die menschliche Nabelschnur (UC) ist eine biologische Probe, die einfach nur nach der Geburt erreicht werden kann. Diese biologische Probe, die meiste Zeit, verworfen, und ihre Erhebung bedeutet keine zusätzliche Gefahr für das Neugeborene oder die Mutter die Gesundheit. Außerdem keine ethischen Bedenken erhoben werden. Der UC wird von einer Vene und zwei Arterien, von denen beide Endothelzellen (ECs) zusammen<sup&gt; 1</sup&gt; Und glatten Muskelzellen (SMC)<sup&gt; 2</sup&gt; Lassen sich zwei der wichtigsten zellulären Komponenten der Blutgefäße, isoliert werden. In diesem Projekt werden die SMCs wurden nach enzymatischer Behandlung der UC Arterien entsprechend den experimentellen Verfahren zuvor von Jaffe beschrieben, erhalten<em&gt; Et al</em<sup&gt; 3</sup&gt;. Nach Zellisolation waren sie in t-Blitz mit DMEM-F12 mit 5% fötalem Rinderserum und wurden für mehrere Passagen kultiviert gehalten. Zellen behielten ihre morphologischen und andere phänotypische Merkmale in den verschiedenen Generationen. Das Ziel dieser Studie war es, Zellen der glatten Muskulatur zu isolieren, um sie als Modelle für zukünftige Tests mit constrictor Drogen, zu isolieren und strukturell charakterisieren L-Typ Calcium-Kanälen, um zelluläre und molekulare Aspekte der vaskulären Funktion zu untersuchen<sup&gt; 4</sup&gt; Und sie in das Tissue Engineering verwenden.

Die Nabelschnur werden verwendet, um Zellen der glatten Muskulatur durch verschiedene Arten zu isolieren. In dieser Arbeit verwendet die enzymatische Behandlung zu isolierten glatten Muskelzellen.

Isolierung humaner Nabelschnur arteriellen glatten Muskelzellen (HUASMC)

Die menschliche Nabelschnur (UC) ist eine biologische Probe, die kurz nach der Geburt leicht gewonnen werden kann. Diese biologische Probe wird in den meisten Fällen entsorgt ...

Zur Isolierung von glatten Muskelzellen aus menschlichen Nabelarterien verwendete ich die folgenden Lösungen: PSS (physiologische Salzlösung), FBS (fetales Rinderserum), inaktivierte B, Antibiotikum und antimykotisches Mittel, rrp, M-I-P-B-S (phosphatgepufferte Salzlösung), DMEM F12, Kollagenase und HBSS ANGs (gepufferte Salzlösung), um die Kollagenase Typ I aufzulösen.Was die Handhabung der Proben betrifft, erfolgt der gesamte Prozess in einer laminarer Luftstrom-Kabine. Der amikale Knorpel wird in kleine Stücke zwischen drei und sieben Zentimetern zugeschnitten. Anschließend werden die Stücke in einen größeren Behälter mit PSS-Antibiotikum, antimykotischem Mittel und Proteaseinhibitor gegeben, um eine Zersetzung oder einen Verlust der Zellviabilität zu vermeiden.Die Isolierung erfolgt bei einer Temperatur von vier Grad Celsius. Der Forscher zeigt nun die in der Nabelschnur vorhandene Vene und die Arterien an. Das Waterton-Gel, das die Arterien umgibt, wird vorsichtig durch Schneiden entfernt.Wir benutzen eine Schere, um die doppelte Menge des verbleibenden Inhalts innerhalb der Gefäße zu entfernen. Die Arterien werden vertikal gehalten und gegebenenfalls mit PSS über eine mit ein

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video-Protokoll zeigt die Isolierung und Kultivierung der menschlichen Nabelschnur-Endothelzellen (HUVEC) aus humanen Nabelschnur. Nach der Isolierung dieser Zellen in vitro Angiogenese-Assays, wie die optimierte Fibringel Bead Assay auch durch die Hughes-Labor nachgewiesen werden kann, verwendet werden.

Isolierung humaner Nabelschnur-Endothelzellen (HUVEC)

Wir haben eine neue und reproduzierbare Technik zur primären Kulturen der Lungenarterie glatten Muskelzellen (PASMC) von Mäusen, so jung wie P7 isolieren entwickelt, wodurch eine bessere Erforschung der Signalwege in neonatalen glatten Muskelzellen Kontraktion und Relaxation beteiligt.

Isolation der Lungenarterie glatten Muskelzellen aus neugeborenen Mäusen

Blutgefäße innerhalb der menschlichen Skelettmuskulatur Hafen mehrere Multi-Linie Vorläuferpopulationen, die sich ideal für die regenerative Anwendungen sind. Dieses Isolierungsverfahren ermöglicht die gleichzeitige Reinigung von drei multiVorläuferZellPopulationen jeweils drei Strukturschichten der Blutgefäße: myogenen Endothelzellen aus Intima, Perizyten von Medien und Adventitia-Zellen von Adventitia.

Isolierung von Blutgefäß abgeleiteten multi Vorläufer von menschlichen Skelettmuskel

Der Zweck dieses Protokolls ist es, die Isolierung und Kulturtechniken von murinen primären vaskulären glatten Muskelzellen (VSMCs) aus dem koronaren Kreislauf zu demonstrieren. Sobald VSMCs isoliert wurden, können sie für viele Standardkulturtechniken verwendet werden.

Die Isolierung von murinen Coronary glatten Gefäßmuskelzellen

Hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen (HSPC) leiten sich von spezialisierten (hemogenic) Endothelzellen während der Entwicklung, noch wenig über das Verfahren bekannt, von denen einige Endothelzellen angeben zu werden Blut bilden. Wir zeigen eine Durchflusszytometrie basierende Methode ermöglicht die gleichzeitige Isolierung von hemogenic Endothelzellen und HSPC aus murinen embryonalen Geweben.

Isolierung von murinen embryonalen Hemogenic Endothelial Cells

Dieser Beitrag beschreibt eine explantationskulturbasierte Methode zur Isolierung und Kultivierung primärer, patientenspezifischer humaner Aortenglattmuskelzellen und dermaler Fibroblasten. Weiterhin wird eine neuartige Methode zur Messung der Zellkontraktion und anschließenden Analyse vorgestellt, mit der patientenspezifische Unterschiede in diesen Zellen untersucht werden können.

Isolierung primärer patientenspezifischer glatter Aortenmuskelzellen und semiquantitative Echtzeit-Kontraktionsmessungen in vitro

Das Protokoll beschreibt die Isolierung, Kultur und Profilierung von Endothelzellen aus der menschlichen Mesenterialarterie. Zusätzlich wird eine Methode zur Vorbereitung der menschlichen Arterie für die räumliche Transkriptomik bereitgestellt. Proteomik, Transkriptomik und funktionelle Assays können an isolierten Zellen durchgeführt werden. Dieses Protokoll kann für jede mittelgroße oder große Arterie wiederverwendet werden.

Isolierung und Profilierung humaner primärer mesenterialer arterieller Endothelzellen auf Transkriptomebene

Diese Studie stellt ein einzigartiges stumpfes Dissektionsverfahren vor, um die Integrität von Wharton-Gelee (WJ) zu erhalten, was zu weniger beschädigtem WJ und einer größeren Menge und Lebensfähigkeit der entnommenen mesenchymalen Stammzellen (MSCs) führt. Die Methode zeigt eine überlegene Ausbeute und Proliferationsfähigkeit im Vergleich zu herkömmlichen scharfen Dissektionsmethoden.

Isolierung von mesenchymalen Stammzellen aus der Nabelschnur mit hoher Ausbeute und geringer Schädigung

Die Isolierung von BAMBI-hohenMFGE8-hohen MSCs, einer der drei Hauptuntergruppen der heterogenen humanen UC-MSCs, ist hilfreich, um die Eigenschaften und Funktionen dieses Subtyps für seine zukünftige Anwendung zur Verbesserung der klinischen Wirksamkeit bei bestimmten Erkrankungen vollständig zu verstehen. Hier stellen wir eine Methode zur Sortierung von BAMBIhochMFGE8hoch UC-MSCs vor.

Isolierung von humanen mesenchymalen Stromazellen mitBAMBI-Gehalt anhohemMFGE8-Nabelschnurgehalt

Focal Ca 2 + Transient-Erkennung in der glatten Muskulatur

Lernen Sie die Isolierung humaner glatter Muskelzellen aus Nabelschnurarterien mit enzymatischer Behandlung. Diese Methode gewährleistet hohe Zellviabilität für zellbiologische Forschung.

Isolierung humaner Nabelschnur arteriellen glatten Muskelzellen (HUASMC)

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