Name: Live-Cell-Imaging und Quantitative Analyse der embryonalen Epithelzellen in Xenopus laevis /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-23T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Lernen Sie Live-Cell-Imaging und quantitative Analyse embryonaler Epithelzellen in Xenopus laevis. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Zellmorphologie und -dynamik in Echtzeit mittels Konfokalmikroskopie.

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Diese Arbeit wurde von der National Institutes of Health (R01-HD044750), ein Career-Stipendium der National Science Foundation und unterstützt von der American Heart Association (Beginning Grant-in-Aid) unterstützt. Die Autoren danken Davidson Lab Mitglieder: HY Kim, M. von Dassow und J. Zhou (für Hilfe bei den täglichen Aufgaben lab) und Lin Zhang für ihre Unterstützung in der Molekularbiologie und der Synthese von mRNA. Wir erkennen an experimentellen Anstrengungen aller Frosch Labors (insbesondere Ray Keller und Doug DeSimone ist), die bis zu einem gewissen Teil dieses Protokolls beigetragen haben, durch die Entwicklung und Erprobung verschiedener Methoden im Laufe der Jahre. Wir danken Richard Harland und John Wallingford für die freundliche Gaben der MEM-gfp und Moesin-gfp Plasmide jeweils.

<ol><li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li>
<li>Kay, B. K., Peng, H. B. Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , Academic Press. New York. (1991).</li>
<li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , Elsevier North-Holland Biomedical Press. Amsterdam. (1967).</li>
<li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li>
<li>Joshi, S. D., Dassow, M. von, Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues%3A+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li>
</ol>

Wir haben experimentelle Protokolle regelmäßig in unserem Labor zu Bild dynamisch verändernden Zytoskeletts in der apikalen Zell-Kortex und oszillierenden Zellmembranen von Epithelzellen in Xenopus Embryonen verwendet präsentiert. Man sollte diese Protokolle als Ausgangspunkt für die Live-Darstellung von Epithelzellen Formen verwenden; Optimierung dieses Protokoll ist wichtig, und einige der Einstellungen ändern, abhängig von der Art des Mikroskop-System man hat und die Art der Proteine ​​ist man in der Bildgeb...

live-cell-imaging und quantitative analyse der embryonalen epithelzellen in xenopus laevis</em

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Embryonale Epithelzellen dienen als ideales Modell, um Morphogenese Studie, in der multi-Zellgewebe Veränderungen in ihrer Geometrie, wie Veränderungen in der Zelle Oberfläche und Zellenhöhe unterziehen, und wo Zellen durchlaufen Mitose und Migration. Darüber hinaus können Epithelzellen regulieren auch morphogenetischen Bewegungen in benachbarte Gewebe<sup&gt; 1</sup&gt;. Eine traditionelle Methode zur epithelialen Zellen und Geweben Studie beinhalten chemische Fixierung und histologische Methoden, um Zellmorphologie oder Lokalisierung bestimmter Proteine ​​von Interesse zu bestimmen. Diese Ansätze weiterhin nützlich zu sein und bieten &quot;Schnappschüsse&quot; von Zellformen und Gewebe-Architektur, aber es bleibt noch viel zu überlegen, wie Zellen erwerben spezifische Formen, wie verschiedene Proteine ​​oder verschieben zu lokalisieren, um bestimmte Positionen, und welche Wege Zellen zu ihrer endgültigen folgen verstanden werden differenzierte Schicksal. Hochauflösende Live-Bildgebung ergänzt herkömmliche Methoden und erlaubt auch mehr direkte Untersuchung der Dynamik zellulärer Prozesse bei der Bildung, Wartung und Morphogenese vielzelliger epithelialen Blatt beteiligt. Hier zeigen wir experimentelle Methoden aus der Isolation des Tieres Kappe Gewebe aus<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryonen konfokale Bildgebung von Epithelzellen und einfache Messung Ansätze, die zusammen molekularen und zellulären Studien der epithelialen Morphogenese erweitern können.

Xenopus embryonalen Epithelien sind ein ideales Modellsystem, um die Zelle Verhaltensweisen wie Polarität Entwicklung und Formänderung beim epithelialen Morphogenese zu studieren. Traditionelle Histologie des festen Proben wird zunehmend durch Live-Cell-konfokale Bildgebung ergänzt. Hier zeigen wir Methoden, um Frosch Gewebe zu isolieren und zu visualisieren leben Epithelzellen und deren Zytoskelett mit Live-cell konfokalen Mikroskopie.

Live-Cell-Imaging und Quantitative Analyse der embryonalen Epithelzellen in Xenopus laevis</em

Embryonale Epithelzellen dienen als ideales Modell zur Untersuchung der Morphogenese, bei der mehrzellige Gewebe Änderungen in ihrer Geometrie durchlaufen, wie zum Beispiel Veränderungen ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Live-Bildgebung und einfache Quantifizierungsmethoden zur Analyse der Morphologie embryonaler epithelialer Zellen zu demonstrieren. Dies wird erreicht, indem zunächst alle Werkzeuge und Geräte bereitgestellt werden. Der zweite Schritt des Verfahrens besteht darin, X explan aus Froschembryonen zu entnehmen und sie in Kammern für eine Langzeitkultur unterzubringen.Der dritte Schritt des Verfahrens besteht darin, hochauflösende Bilder von Epithelzellen in Echtzeit aufzunehmen. Der letzte Schritt des Verfahrens ist die Quantifizierung morphologischer Details von Epithelzellen mithilfe von ImageJ. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die verfolgte Zellareale und Membranintensitäten mittels hochauflösender konfokaler Mikroskopie zeigen. Hallo, ich bin Sagar Joshi vom Davidson Laboratory am Department für Bioingenieurwesen der University of Pittsburgh.Heute zeigen wir Ihnen ein Verfahren zur Live-Cell-Bildgebung und quantitativen Analyse embryonaler epithelialer Zellen von Xenos lavia. Wir verwenden dieses Verfahren, um Echtzeit-Veränderungen des Zellzytoskeletts zu untersuchen. Beginnen wir also.Um Kammern für die Kultivie

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Mit feiner Spitze Mikropipetten spritzen wir Plasmid-DNA in Subdomains Huhn Somiten oder neuronale Röhren. Die Konzentration der Plasmid wird angepasst, um einzelne transfizierten Zellen zu generieren. Dann erlauben wir die Zellen in klonalen Populationen zu entwickeln.

Single Cell Transfektion in Hühnerembryonen

Imaging embryonalem Gewebe in Echtzeit wird über längere Zeit eine Herausforderung. Hier präsentieren wir Ihnen einen Test zur Überwachung der zellulären und subzellulären Veränderungen im Rückenmark Küken für längere Zeit mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung. Diese Technik kann für andere Regionen des Nervensystems und sich entwickelnden Embryo angepasst werden.

Hochauflösende Live-Bildgebung von Zell-Verhalten in der Entwicklung von Neuroepithel

Xenopus laevis bietet ein ideales Modellsystem zur Untersuchung von Zell Schicksal Spezifikation und physiologische Funktion der einzelnen Zellen der Netzhaut in primären Zellkulturen. Hier stellen wir eine Technik zum Präparieren Netzhautgewebe und Erzeugen primären Zellkulturen, die für Calcium-Aktivität abgebildet und analysiert werden durch in situ-Hybridisierung.

Dissection, Kultur und Analyse der<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryonic Netzhautgewebe

Hier entwickeln wir die notwendigen Werkzeuge...

Ex vivo Live-Imaging von Single Cell Divisionen in Maus Neuroepithel

Das Manuskript hier bietet eine einfache Reihe von Methoden für die Sekretion und Verbreitung von fluoreszierend markierten Liganden in Xenopus-Analyse. Dies bietet einen Rahmen für die Prüfung der Fähigkeit von anderen Proteinen zu Ligand Verteilung ändern und erlaubt Experimente, die Einblick in die Mechanismen, die Morphogen Gradienten geben kann.

Mittels konfokaler Analyse<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Um Modulatoren der Wnt und Shh Morphogen Gradienten Untersuchen

Dieses Protokoll zeigt eine fluoreszenzbasierte Methode zur Visualisierung der Vaskulatur und zur Quantifizierung ihrer Komplexität in Xenopus tropicalis . Blutgefäße können nach der Injektion eines fluoreszierenden Farbstoffs in das schlagende Herz eines Embryos nach genetischen und / oder pharmakologischen Manipulationen abgebildet werden, um die kardiovaskuläre Entwicklung in vivo zu untersuchen.

Visualisierung und quantitative Analyse der embryonalen Angiogenese in<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Wir beschreiben Schritte, mit denen schnell in Situ Probenahme von einen kleinen Teil einer einzelnen Zelle mit hoher Präzision und minimalen Invasion mit Kapillar-basierten Mikro-Probenahme, chemische Charakterisierung einer Momentaufnahme der metabolischen Aktivität in zu erleichtern Embryonen mit einer speziell angefertigten Einzelzelle Kapillarelektrophorese und Massenspektrometrie-Plattform zu leben.

Mikrosonde Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry für einzellige Metabolomik in Live-Frosch (Xenopus Laevis) Embryonen

Wir präsentieren ein zweiteiliges Protokoll, das fluoreszierende Calcium-Bildgebung mit In-situ-Hybridisierung kombiniert, so dass der Experimentator Muster der Calciumaktivität mit Genexpressionsprofilen auf einzelzelligem Niveau korrelieren kann.

Fluoreszierende Calcium-Bildgebung und anschließende In-Situ-Hybridisierung zur neuronalen Vorläufercharakterisierung bei Xenopus laevis

Wir beschreiben ein einfaches Protokoll zur Entwicklung von mukociliären Epithelorganoiden aus tiefen Ektodermzellen, die aus Xenopus laevis Embryonen isoliert sind. Die multipotenten Vorläufer regenerieren epitheliale Kelchenzellvorläufer und ermöglichen eine Live-Tracking der Initiation und Progression der Zellübergänge auf der Oberfläche von Organoiden.

Mukociliäre Epithelorganoide aus Xenopus Embryonal cells: Generation, Culture und High-Resolution Live Imaging

Wir beschreiben ein Verfahren zur Herstellung und Live-Bildgebung von unverdünnten zytoplasmatischen Extrakten aus Xenopus laevis-Eiern .

Xenopus laevis Ei-Extrakt-Zubereitung und Live-Bildgebungsverfahren zur Visualisierung der dynamischen zytoplasmatischen Organisation

In dieser Arbeit beschreiben wir eine massenspektrometriebasierte proteomische Charakterisierung von Zelllinien mit bekannten Gewebeschicksalen im Embryo von Xenopus laevis im Wirbeltier.

Zellliniengesteuerte Massenspektrometrie-Proteomik im sich entwickelnden (Frosch-)Embryo

Lernen Sie Live-Cell-Imaging und quantitative Analyse embryonaler Epithelzellen in Xenopus laevis. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Zellmorphologie und -dynamik in Echtzeit mittels Konfokalmikroskopie.

Live-Cell-Imaging und Quantitative Analyse der embryonalen Epithelzellen in Xenopus laevis

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