Erzeugung primärer Mammosphären: Eine Technik zur Bestimmung der Zellpotenz

Aus einer einzigen Brustkrebsstammzelle entsteht eine Ansammlung von Zellen, die als primäre Mammosphäre bezeichnet wird. Um sie zu erhalten, kultivieren Sie zunächst eine Brustkrebszelllinie, bis sie zu 70 bis 80 % konfluent ist, um sicherzustellen, dass sich die Zellen in ihrer Wachstumsphase befinden. Fügen Sie Tripsin-EDTA hinzu, um Zellen aus dem Kolben zu lösen, und fügen Sie ein Medium mit Serum hinzu, um die Wirkung von Tripsin zu stoppen.

Nehmen Sie nun die Zellen in ein Röhrchen und zentrifugieren Sie, um das Zellpellet zu erhalten. Resuspendieren Sie das Pellet im Mammosphärenmedium ohne Serum und leiten Sie die Suspension durch einen Filter mit Zellsiebkappe, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten. Diese Suspension besteht aus Stammzellen, Vorläuferzellen und differenzierten Zellen, die unterschiedliche Proteinexpressionen aufweisen.

CD44 und CD24 sind Zelloberflächenproteine, die für Brustkrebsstammzellen charakteristisch sind. Sie sind positiv für die CD44-Expression und negativ für CD24. Isolieren Sie Zellen aus der Zellsuspension mittels Fluoreszenz oder magnetisch aktivierter Zellsortierung. Nehmen Sie als Nächstes eine Aliquot- und Ad-Trypanblau-Färbung auf die