zPDX-Analyse der Invasivität: Untersuchung des invasiven Verhaltens von metastasierten Krebszellen in Zebrafischembryonen Xenotransplantaten

Xenotransplantate von Zebrafischembryonen sind nützlich bei der Untersuchung der Invasion von Krebszellen. Bereiten Sie Xenotransplantatmodelle vor, indem Sie fluoreszenzmarkierte metastasierende Krebszellen und nicht-krebsartige Zellen in den perivitellinischen Raum von zwei transgenen Embryonen injizieren. Der perivitellinale Raum ist ein Raum zwischen dem Periderm des Embryos und dem Dottersack. Lassen Sie die Embryonen für den gewünschten Zeitraum wachsen.

Während dieser Zeit teilen sich metastasierende Krebszellen aggressiv an der Injektionsstelle, während nicht-krebsartige Zellen stabil bleiben. Nach der Inkubation verwenden Sie eine Pasteurpipette, um die Embryonen in eine Suspensionsschale mit Glasboden zu übertragen. Entfernen Sie überschüssiges Eiwasser und positionieren Sie die Embryonen in der gewünschten Position für die Bildgebung. Bewahren Sie einen Deckglas auf der Schale auf und stellen Sie die Schale unter ein Hellfeldmikroskop.

Nehmen Sie Bilder auf und analysieren Sie das invasive Verhalten beider Zelltypen. Metastasierende Krebszellen neigen dazu, von der Injektionsstelle aus in die Blutgefäße einzudringen. Sie bewegen sich entlang des Kreislaufs und dringen dann in das umgebende Gewebe ein, um sich zu vermehren. Im Gegensatz dazu verbleiben die nicht krebsartigen Zellen an der Injektionsstelle. Im Beispielprotokoll werden wir Brustkrebszellen in den perivitellinen Raum und den Ductus von Cuvier in Zebrafisch-Xenotransplantatmodellen injizieren, um die Metastasierung zu untersuchen.

Um Metastasen sichtbar zu machen, übertragen Sie den injizierten Zebrafischembryo mit einer Pasteurpipette in eine Styroporschale mit Glasboden und entfernen Sie überschüssiges Eiwasser. Bilden Sie den gesamten Körper des Embryos mit einem konfokalen Mikroskop ab, das auf niedrige Vergrößerung eingestellt ist, um ein allgemeines Muster der Tumorzellverbreitung zu erhalten.

Verwenden Sie einen 488-Nanometer-Laser, um das Gefäßsystem des Zebrafischembryos sichtbar zu machen, und einen 543-Nanometer-Laser, um implantierte Tumorzellen zu visualisieren, die mit einem roten Fluoreszenzmarker markiert sind. Scannen Sie anschließend den Embryo in acht bis zehn Schritten, um ein qualitativ hochwertiges Bild zu erhalten.

• Zebrafish Embryo Xenografts - A research tool used to study cancer cell invasion.
• Perivitelline Space - A niche between the zebrafish embryo periderm and the yolk sac.
• Metastatic Cancer Cells - Malignant cells that can spread aggressively and invade lots areas .
• Non-cancerous Cells - Stable cells that do not invade or proliferate like cancer cells.
• Invasiveness - The capacity of cancer cells to infiltrate healthy tissues.

• Define the concept of Zebrafish Embryo Xenografts - These are used for studying cancer invasion (e.g., invasiveness).
• Outline the Perivitelline Space - It serves as the injection site for xenografts (e.g., perivitelline space zebrafish).
• Describe Metastatic Cancer Cells and their aggressive division and invasion traits.
• Connect to Experiment - The injected metastatic and non-cancerous cells in embryos facilitate the investigation of cellular behaviors.

• What is Zebrafish Embryo Xenografts and how it aids in studying cell invasiveness?
• What is the role of Perivitelline Space in these xenograft models?
• What difference in behavior can be expected between Metastatic Cancer Cells and Non-cancerous Cells?

• Practical Applications - Xenografts help in understanding cancer cell behaviors (e.g., invasiveness).
• Industry Impact - Such studies can guide developments in healthcare and cancer research.
• Societal Importance - Findings may result in better cancer treatments (e.g., combating malignancy).
• Scientific Advances -The methodology aids in real-time tracking of cell actions.