Name: Orthotopen Hind-Limb Transplantation in Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: Lernen Sie die orthotope Hinterlauftransplantation bei Ratten mit Manschettentechnik zur Revaskularisierung. Dieses Modell dient der Untersuchung von Ischämie-Reperfusionsverletzungen und immunologischen Reaktionen bei Allotransplantaten.

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Donor Betrieb und Hind-Limb Ernte <ol><li> Für das operative Vorgehen eine sterile Reihe von mikrochirurgischen Instrumenten eingesetzt wird. Der Chirurg müssen geeignete Kleidung einschließlich sterile Handschuhe, die vor Beginn des chirurgischen Eingriffs geändert werden müssen. </li><li> Die Ratte ist betäubt mit einer intraperitonealen Injektion von Pentobarbital (50mg/kg IP) und legte in Rückenlage auf einem beheizten Operationsfeld, die eine stabile Tier Körpertemperatur erleichtert über den gesamten chirurgischen Eingriffs. </li><li> Vor Hautschnitt den Betrieb gestellt wird dreimal mit je sowohl saniert, ein Desinfektionsmittel und Alkohol. Um zu verhindern, die Tiere Hornhaut vor dem Austrocknen, die Augen sind mit einer Augensalbe (Vidisic) vor der Operation geschmiert. </li><li> Der Hautschnitt wird über der rechten Leiste etwa auf dem Niveau des Leistenbandes gemacht. Die Femoralgefäße sind frei präpariert mit bipolarer Kauter und stumpf; tiefe Äste werden mit 8-0 Seide ligiert. </li><li> 300μl (50 IU) von Heparin erfolgt über den Penis Vene für Antikoagulation injiziert. </li><li> Femoralgefäße werden auf der Ebene des Leistenbandes ligiert und schneiden distal der Ligatur. </li><li> Das Hinterbein ist mit gerötetem eiskalter (4 ° C) HTK-Lösung (5 ml) über die Oberschenkelarterie über 5 Minuten. </li><li> Alle Muskelgruppen werden stark mit der Schere geteilt und Osteotomie wird mit einer rotierenden elektrischen Säge auf der Ebene des distalen Drittel des Femurs durchgeführt. </li><li> Die geernteten Glied ist dann in 20 mL eiskaltem HTK-Lösung für die Erhaltung und Kühllager bis zur Transplantation untergetaucht. </li></ol> Empfänger Betrieb und Transplantation <ol><li> Die Ratte ist betäubt mit einer intraperitonealen Injektion von Pentobarbital und legte sich rücklings auf den OP-Feld. </li><li> Der Hautschnitt wird über der rechten Leiste etwa auf dem Niveau des Leistenbandes gemacht. Die Femoralgefäße sind frei präpariert mit bipolarer Kauter und stumpf. </li><li> Femoralgefäße als distal wie möglich unterbunden, aber proximal der epigastrische Gefäß Start. Vascular Klemmen sind auf der Ebene des Leistenbandes auf Arterie und Vene gelegt. </li><li> 0,010 mm, Stulpe Länge:;: und Vene (innen Manschettendurchmesser Manschette-Wandstärke 1,151 mm A Polyethylen Manschette über der Arterie (: 0,912 mm, Stulpe-Wandstärke: 0,010 mm, Stulpe Länge 2,0 mm innen Manschettendurchmesser) gezogen : 2,0 mm). Der Rand der Gefäßlumen wird dann mit einem Gefäßdilatator gezogen und der Arteria und Vena femoralis sind über den ganzen Körper der Manschette (ca. 2mm) umgestülpt und mit einer umlaufenden 8-0 Seidenfaden. </li><li> Um Platz zu schaffen für den Spender des Körpers der Empfänger des Körpers ist mit scharfer Präparation von Muskelgruppen entfernt und Osteotomie wird in der Mitte Oberschenkel durchgeführt. </li><li> Der Spender des Körpers wird von der HTK-Lösung entfernt und Transplantation beginnt mit Osteosynthese des Femurs mit einer 18-Gauge-Nadel (Länge: 1,5-2,0 cm) als intramedulläre Stange. </li><li> Ventral Muskelgruppen sind eng mit 4-0 Vicryl oder Prolene Einzelknopfnähten approximiert. </li><li> Gefäßanastomosen werden, indem der Spender Vene und Arterie über die Empfänger Vene und Manschette komplexen durchgeführt. Eine umlaufende 8-0 Seidenfaden wird wieder aufgestellt, um die Anastomose zu sichern. </li><li> Die venöse Klemme gelöst, gefolgt von der arteriellen Klemme, und Reperfusion wird visualisiert durch Rücksendung der Farbe auf die distalen Gliedmaßen und Fuß sowie pulsatilen Fluss durch die Arterie. </li><li> Die restlichen dorsalen Muskelgruppen werden mit 4-0 Vicryl oder Prolene Einzelknopfnähten wieder angenähert. </li><li> Die Haut ist mit 4-0 Vicryl oder Prolene Einzelknopfnähten verschlossen. </li><li> Der Empfänger Ratte befindet sich auf einem Heizkissen gelegt und eng bis zur Genesung überwacht. </li><li> Empfänger Tiere prophylaktisch Antibiotika (Cefazolin, 20 mg / Tag, IM) und Buprenex (0,1 mg / kg, SC) für drei Transplantation Tage. </li></ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

Jahrzehntelange experimentelle Forschung vorausgegangen und ermöglichte erfolgreiche menschliche Hand-Transplantation in der jüngsten Vergangenheit. Im Jahr 1978, Shapiro et al. entwickelte eine orthotope Hinterbein Transplantation Modell in Ratten, gut geeignet, um verschiedene pathologische, physiologische und immunologische Aspekte sowie funktionelle Ergebnis von Composite Gewebetransplantate studieren. Wir haben den schwierigsten Teil des Verfahrens, nämlich die Gefäßanastomose geändert durch die Einführung eines ni...

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparin Immuno</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK-Lösung</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adventitiascheren</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>Dehnungspinzette</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>Polyamid-Röhrchen</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotopen hind-limb transplantation in ratten

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Composite-Gewebe Allotransplantation (CTA) stellt nun eine gültige therapeutische Option nach dem Verlust einer Hand, Unterarm oder Ziffern und hat sich zu einem neuen therapeutischen Einheit in der rekonstruktiven Chirurgie. Allerdings ist langfristig hochdosierten Multi-Drug-immunsuppressive Therapie erforderlich, um Transplantat Überleben zu sichern, wobei das Risiko von schweren Nebenwirkungen, die eine breitere Anwendung Halfter. Weitere Progression in diesem Bereich kann auf ein besseres Verständnis der Grundlagen der Immunologie und Ischämie Reperfusionsschaden in Composite Gewebetransplantate ab. Bis heute orthotopen Hinterbein Transplantation in Ratten wurde die bevorzugte Nagermodell für die rekonstruktive Transplantation (RT) wurde, ist es jedoch ein sehr anspruchsvolles Verfahren, das außergewöhnliche mikrochirurgische Fähigkeiten erfordert für Wiederbefestigung der Gefäße, Knochen, Muskeln und Nerven. Wir haben die vaskuläre Manschette Anastomosentechnik diesem Modell eingeführt, die eine schnelle und zuverlässige Methode, um Hinterbein Transplantation Ratte. Diese Technik vereinfacht und verkürzt den chirurgischen Eingriff und können Chirurgen mit grundlegenden mikrochirurgische Erfahrung, um erfolgreich die Operation mit hoher Überlebens-und niedrigen Komplikationsraten. Die Technik scheint auch für immunologische sowie Ischämie Reperfusionsschaden (IRI) Studien geeignet sein.

Hier beschreiben wir die orthotopen Ratten-Hinterteil des Körpers Transplantation Verfahren, das an den Goldstandard zu sein scheint<em&gt; In vivo</em&gt; Modell für Composite Tissue Allotransplantation Forschung.

Orthotopen Hind-Limb Transplantation in Ratten

Die Composite Tissue Allotransplantation (CTA) stellt mittlerweile eine valide therapeutische Option nach dem Verlust einer Hand, eines Unterarms oder von Fingern dar und hat sich zu einer neuartigen ...

Ich bin Robert Suha vom Forschungslabor Daniels Roski der Abteilung Viszerale Transplantations- und Thoraxchirurgie der Medizinischen Universität Innsbruck. Heute werden wir Ihnen den Eingriff der unteren Extremitäten-Transplantation am Tiermodell vorstellen und dabei eine Manschetten-Technik zur Revascularisation einführen. Dieser chirurgische Eingriff der unteren Extremitäten-Transplantation wird von unseren chirurgischen Assistenzärzten, einschließlich mir selbst, durchgeführt.Wir verwenden dieses Tiermodell, um ischämische und reperfusionassoziierte Verletzungen in einem allogenen Verbundgewebetransplantat zu untersuchen. Darüber hinaus nutzen wir dieses Verfahren, um immunologische Vorgänge der Abstoßung eines allogenen Verbundgewebetransplantats sowie Strategien zur Verhinderung einer solchen Abstoßung zu erforschen. Zu diesen Strategien gehört die Minimierung oder sogar der Verzicht auf eine Erhaltungsimmunsuppression durch den Einsatz gezielter immunmodulatorischer Regime.Das Verfahren zur Transplantation der roten Hintergliedmaßen beginnt mit der Entnahme des kompositen Gewebetransplantats vom Spender, bei dem die rechte Hintergliedmaße von der Spender-Ratte entfernt und auf Eis gelagert wird. Anschließend wird die rechte Hintergliedmaße der Empfänger-Ratte entfernt, um Platz für die Spender-Gliedmaße zu schaffen. Danach wird die Spender-Gliedmaße vom Eis genommen und in die Empfänger-Ratte transplantiert.In diesem Modell werden vaskuläre Anastomosen mithilfe einer Manschetten-Technik durchgeführt. Für unsere Experimente wurden männliche Louis-Ratten mit einem Gewicht von 250 Gramm verwendet. Die Anästhesie wurde durch eine intraperitoneale Injektion von 50 Milligramm pro Kilogramm Pentobarbital induziert.Der anästhetisierte Ratte wird im Leisten- und Hodenbereich für den Eingriff rasiert und desinfiziert. Es wird ein kompletter Satz mikrochirurgischer Instrumente benötigt, einschließlich gerader mikrochirurgischer Scheren, Gefäßdilatatoren und zwei gekrümmter Pinzetten. Darüber hinaus sind die hier gezeigten mikrochirurgischen Gefäßklemmen die wichtigsten Instrumente.Um die Narkosetiefe zu überprüfen, wird der Zehenquetschreflex verwendet. Die Ratte wird auf eine sterile Unterlage platziert und mit allen vier Extremitäten in vollständiger Streckung fixiert, bevor der Schnitt erfolgt. Die Extremität wird hierbei von jeglichem Trägermaterial befreit, um Kontaminationen zu vermeiden.Ein Schnitt wird quer über die rechte Leiste in etwa auf Höhe des Leistenbandes angelegt. Die Oberschenkelgefäße liegen unmittelbar unter der Haut und werden mit bipolarem Tery und stumpfer Dissektion freigelegt. Anschließend werden die Epigastricalegefäße freigelegt und kauterisiert.Ein einzelner Haltefaden wird als Schlingenfaden um Vene und Arterie gelegt, um eine Zugkraft auszuüben, ohne die Gefäße nach der Freilegung direkt mit Instrumenten zu manipulieren. Die tiefen Seitenäste der Arterie und Vene werden proximal mit einer 8-0-Seidennaht ligiert und distal elektrisch koaguliert, bevor die Spenderextremität entnommen wird. 50 Einheiten Heparin werden über die penile Vene verabreicht.Nach einer Minute wird die Aufmerksamkeit wieder auf die femoralen Gefäße gelenkt. Die Arteria femoralis wird mithilfe einer 8-0-Seide so genau wie möglich ligiert, und das gleiche Vorgehen wird für die V. femoralis wiederholt. Beide Gefäße werden anschließend distal zur Ligatur durchtrennt, und die Hintergliedmaße wird über fünf Minuten hinweg über die Arterie mit einer heparinisierten, eiskalten HDK-Lösung durchspült.Anschließend werden alle Muskelgruppen sorgfältig mit der Schere präpariert. Die Osteotomie erfolgt mithilfe einer rotierenden elektrischen Säge auf Höhe des distalen Drittels des Femurs. Der entnommene Transplantatstrang wird danach zur Konservierung und kalten Lagerung bis zur Transplantation in 20 Milliliter eiskalter HDK-Lösung getaucht.Der Empfänger-Eingriff beginnt ähnlich wie der Spender-Eingriff mit der Isolierung und Dissektion der A. und V. femoralis. Nach sorgfältiger Präparation werden die Gefäße so distal wie möglich, jedoch proximal zum Abgang der Aa. epigastricae, mit einer 8-0er Seidennaht ligiert. Anschließend wird die Montage der Empfängervene am Cuff durchgeführt, indem der polylässtige Cuff über das Gefäß gezogen wird.Ein einzelner Venenclips wird proximal zur Manschette über der Vene und dem Manschettengriff angebracht, um eine vollständige Blutstillung sicherzustellen. Die Ligatur am distalen Ende der Vene wird durchtrennt und die Vene anschließend über die Manschette evaginiert. Eine achtfache Ligatur wird zirkulär um das Gefäß und die Manschette gelegt, wodurch die Empfängervene fixiert wird.Derselbe Vorgang wird für die Arterie mit der kleineren Manschette durchgeführt. Der Empfänger-Schwanz wird ähnlich wie der Spender-Schwanz präpariert, wobei die Muskelgruppen scharf präpariert und eine Osteotomie in der Mitte des Femurs durchgeführt wird. Nun sind wir bereit, den Hinterbein-Schwanz zu transplantieren.Der Spenderknochen wird aus der HDK-Lösung entnommen. Die Transplantation beginnt mit der Osteosynthese des Femurs unter Verwendung einer 18-Gauge-Nadel als Marknagel. Die Spitze wird abgeschnitten und die verbleibende Nadel auf eine Länge von eineinhalb bis zwei Zentimetern gekürzt.Die Bauchmuskulatur wird mit vier einzelnen Vicryl- oder Prolin-Nähten annähernd geschlossen, um das Gliedmaßenstück zu stabilisieren und die Gefäßanastomose vorzubereiten. Bei der Manschettenanastomose wird die Spendervene erweitert, über die Empfängervene und die Manschette gezogen und mit einer weiteren kreisförmigen achtfachen Ligatur befestigt. Das gleiche Verfahren wird für die Spenderarterie durchgeführt.Schließlich, sobald beide Gefäße stabil sind, wird der venöse Klemmverschluss gelöst, gefolgt vom arteriellen Klemmverschluss. Die Reperfusion erfolgt unmittelbar und ist leicht an der Wiederkehr der Farbe des distalen Gliedes und des Fußes sowie an einem pulsierenden Fluss durch die Arterie zu erkennen. Die verbleibenden dorsalen Muskelgruppen werden erneut annähernd reponiert.Die Haut wird mit vier einzelnen Vicryl- oder Prolin-Nähten verschlossen, und die Transplantation ist abgeschlossen. Postoperativ wird das Tier auf einer Heizplatte gewärmt, und Analgetika sowie Antibiotika werden verabreicht. Das Tier wird über 48 bis 72 Stunden hinweg engmaschig auf Anzeichen von Belastung oder chirurgischen Komplikationen überwacht.Die Manschetten-Technik der Reanastomose wurde in den letzten Jahrzehnten in verschiedenen chirurgischen Forschungsbereichen umfassend angewandt, von marinen Nierentransplantationsmodellen bis hin zu heterotopen Herztransplantationsmodellen. Sie ermöglicht die Untersuchung verschiedener Aspekte der Ischämie-Reperfusionsschäden sowie immunologischer Phänomene. Nach unserer Transplantation.Hier zeigen wir die erste Anwendung dieser einzigartigen Manschetten-Technik bei der Transplantation von komplexen Geweben der Extremität. In einem Kleintiermodell verkürzt die Manschetten-Technik die Operationsdauer erheblich, verringert den erforderlichen mikrochirurgischen Fachkenntnisgrad des Operateurs und reduziert den intraoperativen Blutverlust im Vergleich zu herkömmlichen Nahttechniken für die Anastomosierung.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Wir präsentieren einen einfach zu etablieren Revision der klassischen Zwei-Manschette Technik zur orthotopen Lebertransplantation in der Ratte.

Lebertransplantation bei der Ratte

Wir beschreiben eine neuartige Technik für die heterotope abdominale Herz-Lungen-Transplantation (HAHLT) bei Ratten. Die Transplantatkonfiguration führt zu einer teilweise beladenen Transplantatzirkulation, die eine direkte funktionelle Beurteilung ermöglicht. Dieses Modell kann für akute oder chronische Studien der Funktion und des immunologischen Status des transplantierten Transplantats verwendet werden.

Rat Heterotope Abdominal Herz / Einzel-Lungen-Transplantation in einer Volume-Konfiguration geladen

Dieses neuartige Modell für orthotoper hinteren Gliedmaßen Transplantation in der Maus, eine nicht-Naht Manschette Technik für supermikrovaskulären Anastomose Anwendung bietet ein leistungsstarkes Werkzeug für die in-vivo-mechanistisch zu vaskularisiert Verbund Allotransplantationen bezogene immunologische Forschung (VCA).

Orthotopische Hind Gliedmaßen Transplantation in der Maus

Der Zweck dieses Manuskripts und Protokolls ist es, den chirurgischen Eingriff der orthotopischen Nierentransplantation bei Ratten im Detail zu erklären und zu demonstrieren. Diese Methode wird vereinfacht, um die korrekte Durchblutung der Spenderniere zu erreichen und die Reperfusionszeit durch die venöse und urterische Manschette Anastomose-Technik zu verkürzen.

Orthotopic Rat Nierentransplantation: Ein neuartierter und vereinfachter chirurgischer Ansatz

Dieses Protokoll stellt ein robustes, reproduzierbares Modell des vaskularisierten Kompositallotransplantats (VCA) dar, das auf die gleichzeitige Untersuchung der Immunologie und funktionellen Erholung ausgerichtet ist. Die In akribische Technik investierte Zeit in eine orthotopische Transplantation mit handgenähten Gefäßanastomosen und neuronaler Koaptation in eine orthotopische Transplantation mit dem rechten Mittelschenkel der Hinterbeine.

Der nächste Schritt: eine neuronale Koaptation Orthotopic Hind Limb Transplantation Modell, um die funktionelle Erholung in Derratzulande zu maximieren

Wir beschreiben ein Modell der heterotopischen Bauchherztransplantation bei Ratten, was Veränderungen der aktuellen Strategien impliziert, die zu einem vereinfachten chirurgischen Ansatz führen. Zusätzlich beschreiben wir ein neuartiges Abstoßungsmodell durch In-Ear-Injektion lebenswichtiger Herzmuskelzellen, das weitere transplantierte immunologische Analysen bei Ratten ermöglicht.

Ein immunologisches Modell für heterotopische Herz- und Herzmuskelzelltransplantation bei Ratten

Dieser Artikel stellt ein partielles heterotopes osteomyokutanes Lappentransplantationsprotokoll bei Ratten und seine möglichen Ergebnisse in der mittelfristigen Nachbeobachtung vor.

Partielles heterotopes Hinterbeinein Transplantationsmodell bei Ratten

Das orthotope Nierentransplantationsmodell der Ratte trägt dazu bei, den Mechanismus der renalen Allotransplantatabstoßung zu untersuchen. Das aktuelle Modell erhöht das Überleben der Empfänger ohne Beeinträchtigung der Blutversorgung und venösen Reflux des Unterkörpers unter Verwendung einer End-to-End-Anastomose der Nierenimplantation und einer End-to-Side-"Tunnel" -Methode der Harnleiter-Blasen-Anastomose.

Ein orthotopes Nierentransplantationsmodell für die renale Allotransplantatabstoßung

Die vorliegende Arbeit beschreibt eine modifizierte Technik für die heterotope vaskularisierte Herztransplantation mit aktualisierter aseptischer Technik, Analgesie und Anästhesie.

Ein modifiziertes heterotopes Herztransplantationsprotokoll der Maus, das den heutigen Standards der aseptischen Technik, Anästhesie und Analgesie entspricht

Dieses Protokoll beschreibt eine verbesserte Technik für die orthotope linke Lungentransplantation bei Ratten, wobei der Schwerpunkt auf der Reduzierung von Operationsschwierigkeiten und der Verbesserung der Überlebensraten liegt.

Orthotope Transplantation der linken Lunge bei Ratten

Lernen Sie die orthotope Hinterlauftransplantation bei Ratten mit Manschettentechnik zur Revaskularisierung. Dieses Modell dient der Untersuchung von Ischämie-Reperfusionsverletzungen und immunologischen Reaktionen bei Allotransplantaten.

Orthotopen Hind-Limb Transplantation in Ratten

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