Orthotopen Hind-Limb Transplantation in Ratten

Ich bin Robert Suha vom Daniels Roski Research Laboratory der Klinik für Viszeraltransplantation und Thoraxchirurgie der Medizinischen Universität Innsbrook. Heute zeigen wir Ihnen das Verfahren der Transplantation der Gliedmaßen im roten Bereich und stellen eine Manschettentechnik für die Revaskularisation vor. Diese Operation zur Transplantation von Gliedmaßen wird von unseren chirurgischen Assistenzärzten, einschließlich mir, durchgeführt.

Wir verwenden dieses Tiermodell, um Ischämie und Reperfusions-assoziierte Verletzungen in einem Kompositgewebe-Allotransplantat zu untersuchen. Darüber hinaus verwenden wir dieses Verfahren, um immunologische Ereignisse der Abstoßung von Kompositgewebe-Allotransplantaten sowie Strategien zur Verhinderung einer Abstoßung zu untersuchen. Zu diesen Strategien gehört die Minimierung oder sogar Vermeidung der Erhaltungsimmunsuppression durch den Einsatz gezielter immunmodulatorischer Therapien.

Das Verfahren der Transplantation der roten Hintergliedmaße beginnt mit der Entnahme des Spenderkompositgewebetransplantats, bei dem die rechte Hintergliedmaße der Spenderratte entnommen und auf Eis gelagert wird. Als nächstes wird der Empfängerratte das rechte Hinterschlaffen entfernt, um Platz für das Hinken des Spenders zu schaffen. Der Spender wird dann aus dem Eis genommen und der Empfängerratte transplantiert.

Bei diesem Modell wird die vaskuläre Anastomose mit einer Manschettentechnik durchgeführt. Für unsere Versuche wurden männliche Louis Reds mit einem Gewicht von 250 Gramm verwendet. Die Anästhesie wurde mit einer intraperitonealen Injektion von 50 Milligramm pro Kilogramm Pentobarbital eingeleitet.

Das anästhesierte Rot wird über der Leiste rasiert und desinfiziert und humpelt für den Eingriff. Es wird ein komplettes Set an mikrochirurgischen Instrumenten benötigt, einschließlich gerader Mikroskopie, Scheren, Gefäßdilatatoren und zwei gebogenen Pinzetten. Des Weiteren sind die wichtigsten Instrumente die hier gezeigten mikrochirurgischen Gefäßklemmen.

Um die Narkosetiefe zu testen, wird der Zehenkneifreflex verwendet. Die Ratte wird auf eine sterile Plattform gelegt und vor dem Schnitt mit allen vier Gliedmaßen in voller Streckung gesichert. Das Hinken wird hier von jeder Achse freigepeitscht, um eine Kontamination zu verhindern.

Ein Schnitt wird über die rechte Leiste etwa auf Höhe des Leistenbandes gesetzt. Die Femurgefäße erscheinen unmittelbar unter der Haut und werden mit Bipolarisation und stumpfer Dissektion frei präpariert. Anschließend werden die epigastrischen Gefäße präpariert und kauterisiert.

Eine einzelne Schlaufe als Haltenaht wird um die Vene und die Arterie gelegt, um eine Traktion zu ermöglichen, ohne die Gefäße nach der Trennung direkt mit Instrumenten berühren zu müssen. Die tiefen Äste der Arterie und der Vene werden proximal mit acht oh Seidennaht ligiert und distal kauterisiert Vor der Entnahme des Spenders schlaff. 50 Einheiten Heparin werden über die Strafvene verabreicht.

Nach einer Minute wird die Aufmerksamkeit wieder auf die Oberschenkelgefäße gelenkt. Die Oberschenkelarterie wird so annähernd wie möglich mit acht o Seide ligiert, und die gleiche Prozedur wird für die Fal wiederholt. Beide Gefäße werden dann distal von der Ligatur geschnitten und die hintere Extremität wird über fünf Minuten mit heparinisierter, eiskalter HDK-Lösung durch die Arterie geblitzt.

Anschließend werden alle Muskelgruppen mit einer Schere vorsichtig unterteilt. Die Osteotomie wird mit einer rotierenden elektrischen Säge auf Höhe des distalen Drittels des Femurs durchgeführt. Der geerntete Limp wird dann zur Konservierung und Kühllagerung bis zur Transplantation in 20 Milliliter eiskalte HDK-Lösung getaucht.

Die Empfängeroperation beginnt ähnlich wie die Spenderoperation mit der Isolierung und Dissektion der Oberschenkelgefäße. Nach sorgfältiger Dissektion werden die Gefäße mit acht o Seide so distal wie möglich, aber proximal zu den epigastrischen Gefäßen ligiert. Anschließend fahren wir mit der Manschettenbefestigung der Empfängervene fort, indem wir die polylineare Manschette über das Gefäß ziehen.

Eine einzelne Venenklemme wird proximal an der Manschette über der Vene und dem Manschettengriff angebracht, um eine vollständige Blutstillung zu gewährleisten. Die Ligatur am distalen Ende der Vene wird durchtrennt und die Vene dann über die Manschette abgewandt. Eine Ligatur mit acht O wird umlaufend um das Gefäß gebunden und die Manschette fixiert die Empfängervene.

Genau das gleiche Verfahren wird für die Arterie mit der Manschette mit kleinerem Durchmesser durchgeführt. Das Hinken des Empfängers wird ähnlich wie das Hinken des Spenders präpariert, wobei die Muskelgruppen scharf dissektioniert und eine Osteotomie im mittleren Oberschenkelknochen durchgeführt wird. Wir sind jetzt bereit, das Hinken der Hinterhand zu verpflanzen.

Das Limp des Spenders wird aus der HDK-Lösung entfernt. Die Transplantation beginnt mit der Osteosynese des Femurs mit einer 18-Gauge-Nadel als Markstab. Die Spitze wird abgeschnitten und die restliche Nadel auf eineinhalb bis zwei Zentimeter geschnitten.

Ventrale Muskelgruppen werden mit vier oh Vicryl oder Prolin unterbrochenen Nähten eng angenähert, um die Extremität zu stabilisieren und auf die vaskuläre Anastomose vorzubereiten. Bei der Manschetten-R-Anastomose wird die Spendervene erweitert, über die Vene und die Manschette des Empfängers gezogen und mit einer weiteren umlaufenden Acht-O-Ligatur gesichert. Das gleiche Verfahren wird für die Spenderarterie durchgeführt.

Sobald beide Gefäße östamos sind, wird die venöse Klemme gelöst, gefolgt von der arteriellen Klemme. Die Reperfusion ist sofort und leicht sichtbar durch die Rückkehr der Farbe der distalen Gliedmaßen und des Fußes sowie durch den pulsitilen Fluss durch die Arterie. Die restlichen dorsalen Muskelgruppen werden wieder angenähert.

Die Haut wird mit vier oh Vicryl oder Prolin unterbrochenen Nähten verschlossen und die Transplantation ist postoperativ abgeschlossen. Das Rot wird auf einem Heizkissen erwärmt und es werden Schmerzmittel und Antibiotika verabreicht. Die rote Farbe wird 48 bis 72 Stunden lang engmaschig auf Anzeichen von Stress oder chirurgischen Komplikationen überwacht.

Die Manschettentechnik der Reanastomose wurde in den letzten Jahrzehnten in verschiedenen chirurgischen Forschungsbereichen durchgeführt, von marinen Nierentransplantationsmodellen bis hin zu heterotopen Herztransplantationsmodellen. Es ermöglicht die Untersuchung verschiedener Aspekte seiner Chemotherapie, der mit der Reperfusion verbundenen Verletzungen sowie immunologischer Phänomene. Nach unserer Transplantation.

Hier zeigen wir die erste Anwendung dieser einzigartigen Manschettentechnik bei der Transplantation von Gliedmaßen-Kompositgewebe. Im Kleintiermodell reduziert die Manschettentechnik im Vergleich zu herkömmlichen Nahttechniken bei der Anastomose die Operationszeit, das mikrochirurgische Know-how des Bedieners und den intraoperativen Blutverlust erheblich.