Schwanzveneninjektion: Eine Methode zur Verabreichung von Krebszellen für Metastasierungsstudien in einem Mausmodell

Beginnen Sie damit, Trypsin in eine Petrischale zu geben, die markierte Brustkrebszellen enthält, um sie von der Oberfläche zu lösen. Fügen Sie Medium hinzu, das Serum enthält, um die Wirkung von Trypsin zu stoppen. Übertragen Sie die Zellsuspension in ein konisches Rohr und zentrifugieren Sie sie in die Pelletzelle.

Entsorgen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in phosphatgepufferter Kochsalzlösung. Legen Sie das Röhrchen auf Eis, um den Zellstoffwechsel zu verlangsamen. Laden Sie diese Zellsuspension mit der erforderlichen Menge an Zellen in eine Luer-Lock-Spritze und befestigen Sie eine Nadel darauf.

Lege eine Maus mit dem Schwanz nach außen in einen Nagetier-Fixierer. Tauche den Schwanz in warmes Wasser, um die Venen zu erweitern. Es gibt zwei Venen an den Seitenseiten und eine Arterie an der ventralen Seite des Schwanzes. Wischen Sie den Schwanz mit Alkohol ab, führen Sie die Nadel ein und injizieren Sie die Zellsuspension.

Einmal im Blutkreislauf, dringen die injizierten Krebszellen in Organe wie die Lunge ein und vermehren sich. Entfernen Sie langsam die Nadel und verwenden Sie eine sterile Gaze auf der Injektionsstelle, um Druck auszuüben und die Blutung zu stoppen. Setzen Sie die Maus wieder in ihren Käfig ein und stellen Sie sicher, dass sie vollständig wiederhergestellt wird. Im folgenden Protokoll demonstrieren wir die Injektion von markierten metastasierten Krebszellen in ein Mausmodell, um die Metastasierung und Besiedlung von Brustkrebs zu quantifizieren.

Saugen Sie das Medium an und spülen Sie die Zellplatten mit 1X PBS. Trypsinisieren Sie die Zellen mit 5 Millilitern Trypsin pro 15-Zentimeter-Platte für zwei bis fünf Minuten und geben Sie alle Zellen in ein konisches Röhrchen. Waschen Sie die restlichen Zellen aus der Gewebekulturschale mit genügend vollständigem Wachstumsmedium, um das Trypsin zu löschen. Geben Sie die Wäsche in dieselbe konische Tube. Zählen Sie die Zellen mit einem automatischen Zellzähler, um die Gesamtzellzahl zu bestimmen.

Als nächstes zentrifugieren Sie die Zellen drei Minuten lang bei 122 mal G und aspirieren den Überstand. Resuspendieren Sie die Zellen in 1X PBS in der gewünschten Konzentration. Hier werden jeder Maus 25.000 Zellen in 100 Mikroliter PBS injiziert, so dass die resuspendierten Zellen bei 250.000 Zellen pro Milliliter liegen. Bewahren Sie die Zellsuspensionen bis zur Injektion auf Eis auf.

Mischen Sie die Zellen in einer Haube in der Tierhaltung vorsichtig, aber gründlich, indem Sie das Röhrchen umdrehen oder eine 1-Milliliter-Spritze verwenden, um sicherzustellen, dass sie gleichmäßig resuspendiert werden. Laden Sie nun eine 1-Milliliter-Luer-Lock-Spritze mit Zellsuspension und stoßen Sie überschüssige Luftblasen aus. Setzen Sie eine 1/2-Zoll-Nadel mit 30 Gauge nach oben auf die Spritze und stoßen Sie Luftblasen aus.

Legen Sie die Maus vorsichtig in einen Nagetierfixierer. Die seitliche Schwanzvene sollte sichtbar und erweitert sein. Wenn nicht, kneifen Sie vorsichtig den Ansatz des Schwanzes zusammen und tauchen Sie den Schwanz in warmes Leitungswasser, um die Venen zu erweitern. Verwende ein Alkoholtuch, um den Schwanz zu reinigen. Führen Sie dann die Nadel mit der abgeschrägten Seite nach oben in die Schwanzvene ein und injizieren Sie 100 Mikroliter Zellsuspension. Wenn die Nadel richtig in die Vene eingeführt wird, sollte sie leicht nach vorne und hinten gleiten, und es sollte kein Widerstand entstehen, wenn der Kolben gedrückt wird.

Erfolgreiche Injektionen sollten auch zu einer Rötung führen, bei der die blaue Farbe der Vene nach der Injektion für einige Sekunden weiß wird. Entfernen Sie langsam die Nadel und üben Sie mit einer sterilen Gaze Druck auf die Injektionsstelle aus, um Blutungen zu stoppen. Setzen Sie die Maus wieder in den Käfig ein und überwachen Sie sie 15 Minuten lang, um eine vollständige Wiederherstellung zu gewährleisten.