Zellzyklusanalyse: Ein Ansatz zur Untersuchung der Zellzyklusregulation von miRNA-transfizierten Lungenkrebszellen

- Eine microRNA oder miRNA ist eine kleine, nicht-kodierende RNA. Nach der mRNA-Transfektion oder der Einführung in eine Zelle bildet es einen miRNA-Proteinkomplex. Der Komplex zielt auf spezifische mRNA ab, bindet an sie und reguliert deren Expression negativ, wodurch das Fortschreiten des Zellzyklus gestoppt wird.

Um die Analyse zu beginnen, fügen Sie einer geernteten Kultur von miRNA-transfizierten Lungenkrebszellen ein geeignetes dehydratisierendes Fixiermittel hinzu. Das Fixiermittel konserviert die Zellen und permeablisiert auch die Zellmembran. Behandeln Sie die Zellen mit einer Mischung aus Propidiumiodid, einem fluoreszierenden Nukleinsäurefarbstoff, und Ribonuklease-Enzym.

Der Farbstoff dringt in die Zellen ein und färbt sowohl DNA als auch RNA. Die Enzyme bauen die RNA spezifisch ab und ermöglichen so eine optimale DNA-Quantifizierung. Verwenden Sie ein Durchflusszytometer, um den Anteil der Zellen zu bestimmen, die in verschiedenen Zellzyklusphasen angehalten wurden, basierend auf der Fluoreszenzintensität der einzelnen Zellen.

Die Zellen in der Ruhe- und Wachstumsphase haben einen geringeren DNA-Gehalt und damit eine geringere Fluoreszenzintensität. Die Zellen in der G