Colony Formation Assay: Bewertung der Wirksamkeit von Antikrebsmitteln auf koloniebildende Lungenkrebszellen

- Der Koloniebildungsassay ist eine In-vitro-Analyse eines Krebsmedikaments auf das Wachstum, die Proliferation und die Differenzierung der Krebszelle in halbfesten Medien. Zu Beginn säen Sie Krebszellen im RPMI-Medium mit Wachstumsergänzungsmitteln aus - fötalem Rinderserum oder FBS und Antibiotikum. Inkubieren Sie die Zellen für die erforderliche Dauer.

Sammeln Sie als Nächstes die gewünschte Konzentration von Zellen in einem Mikrofuge-Röhrchen und einer Zentrifuge. Suspendieren Sie das Pellet wieder in PBS. Bereiten Sie Medium auf Methylcellulosebasis vor und geben Sie es in verschiedene Röhrchen mit FBS, um ein optimales Wachstum zu fördern.

Geben Sie eine angemessene Menge Zellsuspension in Röhrchen und wirbeln Sie sie, um die Zellen mit dem Medium zu vermischen. Geben Sie als Nächstes krebshemmende Wirkstoffe in Röhrchen und bereiten Sie eine Kontrolle durch Zugabe von DMSO vor. Vortex-Rohre.

Geben Sie diese Zellmischung in die Kulturplatte und inkubieren Sie sie für die gewünschte Dauer. Nach der Inkubation Methylthiazoldiphenyltetrazoliumbromid oder MTT hinzufügen und einige Zeit inkubieren. MTT reduziert gelbes Tetrazoliumsalz in lebensfähigen Zellen zu violetten Formazank