Sphere Formation Assay: Eine In-vitro-Methode zur Identifizierung von Stammzellen von Bauchspeicheldrüsenkrebs und Screening-Therapien

- Das duktale Adenokarzinom der Bauchspeicheldrüse (PDAC) enthält eine Untergruppe von ausschließlich tumorigenen Krebsstammzellen (CSC). CSCs sind selbsterneuerbar, pluripotent und in der Lage, Tumore zu bilden. Sie exprimieren anti-apoptotische Proteine und enthalten auch multiresistente Gene, die sie resistent gegen Chemotherapie machen. Um Krebsstammzellen zu identifizieren und die Wirkung von Medikamenten auf sie zu untersuchen, führen wir einen Kugelbildungsassay durch.

Suspendieren Sie zunächst die extrahierten Krebsstammzellen in dem gewünschten Zellkulturmedium. Als nächstes säen Sie die Zellsuspension in eine Multiwell-Platte und inkubieren Sie sie für die gewünschte Dauer. Geben Sie eine erforderliche Menge des interessierenden Medikaments in einige Vertiefungen und ein Placebo in andere Vertiefungen als Negativkontrolle. Inkubieren Sie die Zellen für die gewünschte Dauer. Krebsstammzellen bilden kugelförmige Kolonien in einer nicht adhärenten Kulturumgebung.

Nach der Inkubation pipettieren Sie eine kleine Menge Zellsuspension auf ein Hämozytometer und geben Sie sie in einen automatisierten Zellzähler. Zählen Sie nun die Anzahl der gebildeten Kugeln. Die medikamentös beh