Name: Isolierung und Kultivierung von Avian Embryonale Valvular Progenitorzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-27T17:35:00.000+00:00
Duration: 14 min 2 s
Description: Lernen Sie die Isolierung und Kultivierung von aviären Herzklappenprogenitorzellen in HH14- und HH25-Stadien. Diese Methode ermöglicht 3D-in-vitro-Modelle zur Untersuchung der Herzentwicklung.

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Mitral 07CVD04: Diese Forschung wird von der Hartwell-Stiftung, der American Heart Association (Scientist Development Grant # 0830384N) und der Stiftung Leducq unterstützt.

1. Vorbereitung <ol><li> Inkubieren fruchtbaren Wachtel oder Hühnereier zu Stufe 14 - (ca. 2 Tage) oder 25 (ca. 4,5 Tage) bei 60% Luftfeuchtigkeit und 37 ° C. </li><li> Bereiten Sie sterile Earls Balanced Salt Solution (EBSS) <ol><li> Add 100 ml 10x EBSS zu 600 ml 18 MOhm Wasser </li><li> Add 2,2 g Natriumbicarbonat </li><li> Den pH-Wert der Lösung auf 7,2 </li><li> Bringen Sie die Lösung bis zu 1000 ml </li><li> Sterilisieren Sie die Lösung, indem sie durch einen 0,2 um Filter </li></ol></li><li> Bereiten Sie sterile M199 Kulturmedium. <ol><li> Add 1 Packung M199 Pulver zu 700 ml 18 MOhm Wasser. </li><li> Add 2,2 g Natriumbicarbonat </li><li> Den pH-Wert der Lösung auf 7,2. </li><li> Fügen Sie 10 ml (1%) Penicillin-Streptomycin </li><li> Bringen Sie die Lösung bis zu 1000 ml </li><li> Sterilisieren Sie die Lösung, indem sie durch einen 0,2 um Filter </li><li> 1 ml sterile 100X Insulin-Transferrin-Selen-G zu ergänzen </li><li> Fügen Sie 10 ml (1%) sterile Hühnerserum </li></ol></li><li> Bereiten dreidimensionalen Kollagen-Gelen bei einer Kollagen-Konzentration von 1,5 mg / mL. Frühere Arbeiten in unserem Labor haben gezeigt, dass eine Kollagen-Konzentration von mehr als 1,5 mg / mL eine Matrix, die auch biomechanisch steif ist für die Zellen durch Umzug nach zur Verfügung stellt. Collagen-Gel-Konzentrationen unter 1,5 mg / mL haben so wenige Kollagenfasern, die die Zelle verklumpen die Fasern lokal shred, produziert eine Insel der Zellen. <ol><li> Fügen Sie die folgenden eiskalten Reagenzien in ein steriles 15 ml Zentrifugenröhrchen in dieser Reihenfolge: <ul><li> 3X M199: Volume = Gesamtvolumen notwendig / 3 </li><li> Sterile 18 MOhm Wasser: Volume = Gesamtvolumen notwendig (M199 Volumen + Hühnerserum Volumen + 0,1 M NaOH Volumen + Kollagen Volumen) </li><li> Sterile Hühnerserum: Volume = Gesamtvolumen notwendig * 0,01 </li><li> Rattenschwanz Kollagen I: Volume = (Kollagen-Gel-Konzentration * Volumen erforderlich) / Kollagen Lager Konzentration </li><li> Sterile 0,1 M NaOH: Volume = Kollagen Volumen * 0,2 Hinweis: Die Menge an Wasser, 0,1 M NaOH, und Kollagen aufgenommen wird je nach der Konzentration der Kollagen-Stammlösung. </li></ul></li><li> Mischen Sie die Kollagen-Lösung auch mit einer sterilen Pipette. </li><li> Sofortüberweisung 0,3 ml der Kollagen-Lösung in 1,9 cm 2 Wachstum Bereich Brunnen. Das ist genug Kollagenlösung vollständig decken die gut und zu einem Gel, das ca. 3 mm dick ist bereitzustellen. Ein Gel Dicke von mindestens 250 um, die für Zell-Invasion Studien. </li><li> Lassen Sie die Kollagen-Lösung zum Gel für mindestens 1 Stunde bei 37 ° C, 5% CO 2, und 100% Luftfeuchtigkeit. </li></ol></li></ol> 2. Pre-EMT Endocardial Zellisolation und Kultur <ol><li> Embryo isoliert <ol><li> Legen Sie ein Zoll langes Stück Labor Klebeband über das größere Ende des Eies. Hier wird die Luft-Zelle befindet. Das Band stabilisiert das fragile Wachtelei Shell. </li><li> Gently Punktion der abgeklebt Bereich der Eizelle in der Luft-Zelle mit der Spitze des sterilisiert gebogene Schere. </li><li> Schneiden Sie ein Loch in den abgeklebten Teil der Eier, die groß genug, damit das Eigelb passieren wird. Starten Sie das Loch an der Einstichstelle und schneiden nach außen in Form einer Spirale. Achten Sie darauf, durch die äußere Membran geschnitten, aber vermeiden piercing das Eigelb. </li><li> Wenn das Loch in der Schale abgeschlossen ist, visualisieren die Wachtel Embryo. Der Embryo wird in der Regel auf der Oberseite des Dotters liegt. </li><li> Beginnen Sie das Eigelb durch das Loch geschnitten in das Ei gießen mit einer Hand. Halten Sie ein # 55 Pinzette in der anderen Hand. Da der Embryo verlässt das Ei auf der Oberseite des Dotters, schieben Sie die Nr. 55 Pinzetten unter dem Embryo und entfernen Sie es aus dem Eigelb. Hinweis: Bei Hühnereiern, geht der Embryo isoliert Knacken des Hühnereis auf eine scharfe, saubere Oberfläche und bricht das Ei in eine 100 mm Petrischale. Der Embryo ist auf der Oberseite des Eigelbs befinden. Schieben Nr. 55 Pinzetten unter dem Embryo und entfernen Sie es aus dem Eigelb. </li><li> Setzen Sie den Embryo in eine 100 mm Petrischale mit eiskaltem, sterilen EBSS. </li></ol></li><li> Stufe die Embryonen nach den Kriterien der Hamburger und Hamilton 1. Embryonen im Stadium 14 - sind vorbei Stufe 13, aber noch nicht im Stadium 15, mit 20-21 Somiten und einem Schwanz Knospe. Ein wesentliches Merkmal der Stufe 14 - Embryonen ist der Kopf Winkel, der etwas größer ist als 90 °, um den Körper ist. </li><li> Entfernen Sie die Herzen von Wachteln Embryonen im Stadium 14 - mit Nr. 55 Pinzetten, indem quer, wo der AV-Kanal und OFT Kontakt mit der Brustwand. Legen Sie die Herzen zusammen auf einer Seite der Petrischale. </li><li> Sammeln Sie die isolierten Herzen mit einer sterilen Transferpipette und legen Sie sie in eine neue 100 mm-Petrischale mit sterilem, eiskaltem EBSS gefüllt. </li><li> Schneiden Sie die OFTs und AV Kanälen quer aus dem Ventrikel mit Nr. 55 Pinzetten. </li><li> Section der übrigen AV Kanäle und / oder Abfluss Traktate (OFTs) in Längsrichtung. </li><li> Set einer Pipette auf ein Volumen von 20 uL. Mit dieser Pipette absaugen zu sechs längs geschnitten AV Kanäle und OFTs. </li><li> Vertreibt die AV Kanäle und OFTs auf die Kollagen-Gel. Absaugen überschüssigen EBSS von der Oberfläche des Gels. </li><li> Verwenden Sie # 55 Pinzetten zur Ausrichtung der Explantate, so dass sie flach sind und so das Lumen Seitenflächen der Kollagen-Gel. Versuchen Sie nicht, Punktion der Kollagen-Gel mit der Pinzette. </li><li> Nach 2 Stunden bei 37 ° C und 5% CO 2, entfernen Sie das Myokard von der Explantate mit Nr. 55 Pinzetten. Die endokardiale Zellen sollten hinter der Oberfläche des Kollagen-Gel gelassen werden. Alternativ kann der Herzmuskel auf dem Explantat gelassen werden. Mit dem Myokard entfernt, durchlaufen die endokardiale Zellen mit nicht EMT ohne Intervention. Mit dem Myokard stellen eine Teilmenge der Endokard-Zellen werden in Mesenchym zu verwandeln, aber der Grad der Transformation moduliert werden kann mit externen Faktoren. Hinweis: Auch wenn das Myokard auf gelassen werden, das Explantat muss eine Frist von mindestens 2 Stunden, um das Gel zu befestigen, bevor Medium zugegeben. </li><li> Fügen Sie 0,4 ml M199 Medium in jede Vertiefung mit Explantaten. </li><li> Kultur der Zellen bei 37 ° C, 5% CO 2, und 100% Luftfeuchtigkeit. </li></ol> 3. Post-EMT AV Cushion mesenchymalen Zellen Isolation und Kultur <ol><li> Crack the Hühnerei auf eine scharfe, saubere Oberfläche und brechen das Ei in eine 100 mm Petrischale. Der Embryo ist auf der Oberseite des Eigelbs befinden. Nehmen Sie den Embryo mit Nr. 5 Pinzette durch Greifen der Membranen um den Embryo und dann den Embryo in eine 100 mm Petrischale mit eiskaltem, sterilen EBSS gefüllt. </li><li> Stufe die Embryonen nach den Kriterien der Hamburger und Hamilton 1. Merkmale einer Stufe 25 Embryos sind ausgeprägte Ellenbogen-und Kniegelenke und leichte Auge Pigmentierung. </li><li> Isolieren Sie die Herzen von allen HH25 Embryonen und legen Sie die Herzen zusammen auf einer Seite der Petrischale. </li><li> Sammeln Sie die isolierten Herzen mit einer sterilen Transferpipette und legen Sie sie in eine neue 100 mm-Petrischale mit sterilem, eiskaltem EBSS gefüllt. </li><li> Isolieren Sie die AV Region aus allen Herzen auf einmal. Legen Sie die AVs zusammen auf einer Seite der Petrischale. Vorsichtig geschwenkt, die AV-Region für alle Blut, das die Lebensfähigkeit der Zellen beeinflussen können, zu entfernen. </li><li> Sammeln Sie die isoliert AVs mit einer sterilen Transferpipette und legen Sie sie in eine neue 100 mm-Petrischale mit sterilem, eiskaltem EBSS gefüllt. </li><li> Sequenziell isolieren die Kissen aus dem AV. Stellen Sie sicher, es gibt keine Myokard auf dem AV Kissen. </li><li> Sammeln Sie die isoliert Kissen mit einer sterilen Transferpipette und legen Sie sie in ein steriles 15 ml Zentrifugenröhrchen. </li><li> Drehen Sie das Kissen auf den Boden der Zentrifugenröhrchen bei 15 xg für 3 Minuten. </li><li> Verwenden Sie eine sterile 1000 mL Spitze, so viel von der EBSS Überstand wie möglich, ohne die Kissen zu entfernen. </li><li> 1 ml 0,25% Trypsin-EDTA, die auf 37 vorgewärmten ° C. Lassen Sie das Kissen in Trypsin inkubiert, bis sie vollständig gelöst sind, ist in der Regel ca. 3-5 Minuten. </li><li> Add 100 L Hühnerserum die Zentrifugenröhrchen, um das Trypsin zu stillen. </li><li> Pellet die Zellen bei 160 xg für 5 Minuten. Entfernen Sie den Überstand mit einer sterilen, 1000 ul Spitze. </li><li> Resuspendieren der Zellen in 2 ml M199 Medium und durch Pipettieren gründlich mischen. Nehmen Sie sich 10 ul der Zellsuspension auf Zählkammer zählen und bestimmen die Gesamtzahl der Zellen, die isoliert wurden </li><li> Ermitteln Sie, wie viele Kollagengelen basierend auf der Anzahl der Zellen isoliert gemacht werden. Zellen müssen bei einer Dichte von 2 x 10 5 Zellen / ml mit einer 250 ul Gelvolumen beschichtet werden. </li><li> Pellet die Zellen bei 160 xg für 5 Minuten. Entfernen Sie den Überstand mit einer sterilen, 1000 ul Spitze. </li><li> Mit dem Protokoll aufgeführten, fügen 3X M199, Wasser-, Hühner-Serum, Kollagen und 0,1 M NaOH, in dieser Reihenfolge, um das Zellpellet. Mix von sanften Pipettieren. </li><li> Add 250 ul jeder 1,9 cm 2 Wachstum Gegend sehr gut. </li><li> Lassen Sie die Kollagen-Lösung zum Gel für mindestens 1 Stunde bei 37 ° C, 5% CO 2, und 100% Luftfeuchtigkeit. </li><li> Fügen Sie 0,4 ml Kulturmedium und Inkubation über Nacht. </li><li> Um weiterhin die Kultivierung der Gele in stressfreien Bedingungen, befreien die Gele von den Seiten der Kultur und mit einer sterilen 200 ul Pipettenspitze. Mechanisch eingeschränkt Kulturen sind Gele, die auf die Seiten der Kultur verbunden bleiben gut. </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse <img src="/files/ftp_upload/2159/2159fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1:. Beispiele von Embryonen (A) HH14-Wachtel Embryo, und (B) HH25 Hühnerembryo werden hier gezeigt. fig2.jpg "alt =" Bild 2 "/&gt; Abbildung 2: HH14-Ventil endokardiale Explantate nach 2 Stunden der Kultur (A) mit dem Myokard vorhanden ist, oder (B) mit dem Myokard entfernt.. <img src="/files/ftp_upload/2159/2159fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3:. HH14-Ventil endokardiale Explantate (A) Mit dem Myokard präsentieren, haben viele der Zellen endokardiale mesenchymale Transformation und haben einen spindelförmigen, mesenchymalen Phänotyp nach 48 Stunden Kultur. (B) Wenn der Herzmuskel ist alles von den Zellen entfernt halten einen Pflasterstein-förmig, endokardiale Phänotyp nach 48 Stunden in Kultur. <img src="/files/ftp_upload/2159/2159fig4.jpg" alt="Abbildung 4 " data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4:. HH25 Ventil mesenchymalen Zellen in einem Kollagen-Gel Zellen werden sofort nach der Aussaat abgerundet. <img src="/files/ftp_upload/2159/2159fig5.jpg" alt="Abbildung 5 " data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 5"> Abbildung 5:. HH25 mesenchymalen Zellen in Kultur (A) Nach 48 Stunden Kultur in einem eingeschränkten Kollagengel der HH25 mesenchymalen Zellen beginnen sich zu verbreiten. (B) HH25 Zellen in einer stressfreien Kollagengel 7 Tage nach der Aussaat und 6 Tage nach der Befreiung habe das Gel auf ca. 50% der ursprünglichen Fläche verdichtet.

<ol><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Morphol%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J Morphol. 88, 49-92 (1951).</li>
<li>Runyan, R. B., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+mesenchyme+into+three-dimensional+collagen+gels%3A+A+regional+and+temporal+analysis+of+interaction+in+embryonic+heart+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Invasion of mesenchyme into three-dimensional collagen gels: A regional and temporal analysis of interaction in embryonic heart tissue.</a> Developmental Biology. 95, 108-108 (1983).</li>
<li>Butcher, J. T., Norris, R. A., Hoffman, S., Mjaatvedt, C. H., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periostin+promotes+atrioventricular+mesenchyme+matrix+invasion+and+remodeling+mediated+by+integrin+signaling+through+Rho%2FPI+3-kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Periostin promotes atrioventricular mesenchyme matrix invasion and remodeling mediated by integrin signaling through Rho/PI 3-kinase.</a> Developmental Biology. 302, 256-256 (2007).</li>
</ol>

Das Verfahren zur Isolierung von Zellen aus endokardiale Bühne HH14 - hearts ursprünglich von Runyan und Markwald entwickelt eine kontrollierte, in vitro Umgebung, um die Faktoren, und initiieren modulieren embryonalen EMT-2-Studie. HH14 - endokardiale Explantate ohne Myokard kultiviert wird nicht unterziehen EMT ohne biomechanische oder biochemische Intervention. Wenn der Herzmuskel auf dem Explantat linken Seite ist es Signal eine Teilmenge von endokardiale Zellen mesenchymale...

<table><tbody><tr><td>Extrafeine Bonn-Scheren, gebogen</td><td>Fine Science Tools</td><td>14085-08</td><td></td></tr><tr><td>Dumont-Pinzette Nr. 55</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14099</td><td></td></tr><tr><td>Dumont-Pinzette Nr. 5</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14098</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Transferpipetten</td><td>Samco Scientific, Thermo Fisher Scientific</td><td>2041S</td><td></td></tr><tr><td>4-Well-Kulturplatten</td><td>Nalge Nunc international</td><td>176740</td><td></td></tr><tr><td>Sterile, Einweg-Filtereinheiten, PES, Membran mit 0,2 &amp;mu;m Porengröße</td><td>Nalge Nunc international</td><td>566-0020</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Zentrifugenröhrchen, 15 mL</td><td>Corning</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Petrischalen, 100 mm × 15 mm</td><td>VWR international</td><td>25384-342</td><td></td></tr><tr><td>Laborband</td><td>VWR international</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>Rattenschwanz-Kollagen I</td><td>BD Biosciences</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>10× Earl&amp;rsquo;s Balanced Salt Solution</td><td>Quality Biological, Inc.</td><td>119-064-131</td><td></td></tr><tr><td>M199-Pulver</td><td>Invitrogen</td><td>31100-035</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Insulin-Transferrin-Selen-G-Zusatz (100×)</td><td>Invitrogen</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>Hühnerserum</td><td>Invitrogen</td><td>16110-082</td><td></td></tr><tr><td>0,25 % Trypsin-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydroxidlösung, 1,0 N</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2770</td><td></td></tr><tr><td>Brutfähige Wachteln-Eier (&lt;em&gt;Coturnix coturnix&lt;/em&gt;)</td><td>Lake Cumberland Game Bird Farm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Brutfähige Hühnereier (&lt;em&gt;Gallus gallus&lt;/em&gt;)</td><td>Cornell University Poultry Farm</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung und kultivierung von avian embryonale valvular progenitorzellen

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

Korrekte Ausbildung und Funktion der embryonalen Herzklappen ist entscheidend für Entwicklungsfortschritt. Die frühe embryonale Herz ist ein U-förmiges Rohr von Endokard von Myokard umgeben. Der Herzmuskel sondert kardiale Gelee, ein Hyaluronan reichen gallertartige Matrix, in die atrioventrikulären (AV)-Übergang und Ausflusstrakt (OFT) Lumen. Im Stadium HH14 valvulogenesis beginnt, wenn eine Teilmenge von endokardiale Zellen Signale aus dem Myokard zu erhalten, unterziehen endokardiale mesenchymale Transformation (EMT) und dringen in das Herz-Gelee. Im Stadium HH25 die Klappen Kissen sind vollständig mesenchymalized, und es ist dieses Mesenchym, die schließlich bildet die Herzklappen und septalen Apparat des Herzens. Das Verständnis der Mechanismen, und initiieren modulieren den Prozess der EMT und Zelldifferenzierung sind wegen ihrer Verbindung zu schweren angeborenen Herzfehlern wichtig. In dieser Studie präsentieren wir Methoden vor, EMT endokardiale und post-EMT mesenchymalen Zellen, die die beiden verschiedenen Zell-Phänotypen der prevalvular Kissen sind zu isolieren. Pre-EMT endokardiale Zellen können mit oder ohne den Herzmuskel gezüchtet werden. Post-EMT AV Kissen mesenchymalen Zellen können in mechanisch eingeschränkt oder Stress-free Kollagengelen kultiviert werden. Diese 3D-in vitro-Modelle zu imitieren Schlüssel valvular morphogenic Veranstaltungen und sind für die Dekonstruktion der Mechanismen der Früh-und Spätstadium valvulogenesis nützlich.

Dieser Artikel wird eine Methode zur Isolierung und Kultivierung von Wachteln oder Huhn HH14<sup&gt; -</sup&gt; Ventil endokardiale Zellen und HH25 Ventil Kissen mesenchymalen Zellen.

Isolierung und Kultivierung von Avian Embryonale Valvular Progenitorzellen

Die ordnungsgemäße Bildung und Funktion der embryonalen Herzklappen ist entscheidend für den Entwicklungsfortschritt. Das frühe embryonale Herz ist ein U-förmiges Rohr aus ...

Um in Kultur aviaere Ventil-HH-14-minus-Endokardzellen oder HH-25-Polster-Mesenchymzellen zu isolieren, werden befruchtete Eier zwei Tage lang inkubiert. Erstes Stadium HH 14 minus oder 4,5 Tage für HH 25.Anschließend werden die Embryonen isoliert und die Herzen entfernt. Der nächste Schritt des Verfahrens besteht in der Isolierung der HH-14-minus-Atrioventrikularkanäle und -Ausflusstrakte oder der HH-25-Atrioventrikularkanäle. Die HH-14-minus-Atrioventrikularkanäle und -Ausflusstrakte werden longitudinal geschnitten oder die HH-25-Atrioventrikularklappenpolster werden isoliert.Die HH-14-minus-x-Explantate werden lumenseitig nach unten auf Kollagengele platziert. Die HH-25-Ventilkissen werden mit Trypsin verdaut, und die Zellen in Kollagengelen ausgesät; anschließend werden beide kultiviert. Letztendlich ahmen diese 3D-In-vitro-Modelle zentrale valvuläre morphogenetische Ereignisse nach und eignen sich zur Aufklärung der Mechanismen der frühen und späten Agenesis der Herzklappen.Hallo, mein Name ist Gretchen Mahler und ich arbeite in der Abteilung für biomedizinische Technik an der Cornell University. Die Methoden, die Sie heute lernen werden, helfen Ihnen dabei, zentrale Fragen au

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Biologie

In diesem Artikel präsentieren wir Ihnen eine einfache Methode, um langfristig zu...

Ein Ex-ovo Chicken Embryo Culture-System Geeignet für Imaging und Mikrochirurgie Anwendungen

Wir stellen eine Methode zur Isolierung und Kultivierung von reinen Populationen von Herzklappen-Endothelzellen (VEC). VEC von beiden Seiten der Höcker oder Prospekt isoliert werden können und unmittelbar nach ist zugrundeliegenden interstitiellen Zellen (VIC) Isolierung einfach.

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Isolierung von interstitiellen Zellen der Mausklappe: Eine enzymatische Methode zur Isolierung und Kultivierung von VICs aus der Aortenklappe der Maus

Primäre Zellkultur ist eine nützliche Technik für die Analyse von spezifischen Populationen von Zellen, insbesondere von transgenen Maus-Embryonen in bestimmten Entwicklungsstadien. Hierin werden embryonalen Ventrikel seziert und distanziert, und Antikörper-konjugierten Perlen erkennen und trennen die Endothelzellen für die weitere Analyse.

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Die Fähigkeit, Herzklappen-Endothelzellen (VECs) zu isolieren, ist entscheidend für das Verständnis der Mechanismen der Klappenentwicklung, -erhaltung und -erkrankung.  Hier beschreiben wir die Isolierung von VECs aus embryonalen und adulten Tie2-GFP-Mäusen mittels FACS, die Studien zur Bestimmung des Beitrags von VECs zu Entwicklungs- und Krankheitsprozessen ermöglichen wird.

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Ein Roman<em&gt; Ex Ovo</em&gt; Banding-Technik intrakardialer Hämodynamik in einem embryonalen Hühner System ändern

Hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen (HSPC) leiten sich von spezialisierten (hemogenic) Endothelzellen während der Entwicklung, noch wenig über das Verfahren bekannt, von denen einige Endothelzellen angeben zu werden Blut bilden. Wir zeigen eine Durchflusszytometrie basierende Methode ermöglicht die gleichzeitige Isolierung von hemogenic Endothelzellen und HSPC aus murinen embryonalen Geweben.

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