Name: Die Aufrechterhaltung Wolbachia in zellfreien Medium (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: Erfahren Sie die Reinigung von Wolbachia pipientis aus Anopheles gambiae Zellkulturen mittels Glasperlen-Lyse und Differentialzentrifugation. Diese Methode ermöglicht die Kultivierung in zellfreiem Medium und die Durchführung von Viabilitätsassays.

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die aufrechterhaltung wolbachia in zellfreien medium

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

In diesem Video-Protokoll, sind Verfahren nachgewiesen (1) reinigen Wolbachia Symbionten aus kultivierten Zellen Mücke, (2) mit einem Fluoreszenz-Assay, um die Lebensfähigkeit des gereinigten Wolbachia zu ermitteln und (3) halten die jetzt extrazellulären Wolbachia in zellfreien Medium . Gereinigtes Wolbachia lebendig bleiben in der extrazellulären Phase aber nicht replizieren, bis in eukaryotischen Zellen wieder geimpft. Extrazelluläre Wolbachia auf diese Weise gereinigte bleibt für mindestens eine Woche lebensfähig bei Raumtemperatur und möglicherweise länger. Gereinigtes Wolbachia sind für die Mikro-Injektion, DNA-Extraktion und andere Anwendungen geeignet.

Dieses Video beschreibt ein Verfahren zur Reinigung von Wolbachia pipientis von einer Anopheles gambiae Zelllinie und dann Kultivierung des Endosymbionten in zellfreien Medium. Ein Test für die Lebensfähigkeit des Bakteriums nachgewiesen ist.

Die Aufrechterhaltung Wolbachia in zellfreien Medium

In diesem Videoprotokoll werden Verfahren demonstriert, um (1) Wolbachia-Symbionten aus kultivierten Mückenzellen zu reinigen und (2) einen Fluoreszenz-Assay zu verwenden, um ...

Mein Name ist Courtney Ston. Ich arbeite an der Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health im Labor von Dr. Jason Rascon. Heute werden wir eine bakterielle Aufreinigung aus kultivierten Insektenzellen durchführen.Es handelt sich tatsächlich um ein sehr einfaches Verfahren. Wir beginnen damit, unsere Zellen zu gewinnen, und zerstören dann die Membranen der eukaryotischen Wirtszellen physikalisch durch Lysierung mit Glaskügelchen. Anschließend verwenden wir die Differenzialzentrifugation, um die Bakterien von den Wirtszelltrümmern zu trennen.Und dann verwenden wir eine Reihe von Filtrationsschritten, um weitere Wirtszellpartikel zu entfernen, sodass am Ende lediglich das gereinigte bakterielle Pellet übrig bleibt. Dies ist tatsächlich eine der wichtigsten Voraussetzungen. Es handelt sich um eine Zellkulturhaube, die dazu dient, alles steril zu halten, da Zellkulturen sehr anfällig für Kontaminationen sind.Wir benötigen außerdem Zellkulturmedien, die Zellen selbst, und wir kultivieren sie in Plastikflaschen. Außerdem benötigen wir drei Millimeter große Glasperlen, 50-ml-Konizentrischenröhrchen und einen Zentrifugen, der in der Lage ist, Hochgeschwindigkeitszentrifugationen durchz

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wolbachia Bakterielle Infektion in Drosophila

Quantitative und automatisierte Hochdurchsatz-genomweiten RNAi-Screens in C elegans</em

Vampiric Isolation der extrazellulären Flüssigkeit aus<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Dieses Video stellt eine Methode zur Isolierung und sterilen Kultivierung embryonaler C. elegans-Zellen  in vitro vor.

Enzymatischer Verdau und manuelle Dissoziation: Eine Methode zur Vorbereitung von C. elegans-Embryonen für die Zellkultur

C. elegans ist in der Regel auf festen Agarplatten oder in Flüssigkulturen ausgesät mit E. coli. Um bakterielle Nebenprodukte aus Verwechslung toxikologischen und Ernährungsstudien zu verhindern, verwendeten wir eine axenischen flüssigen Medium, CEHR, um für eine Reihe von nachgelagerten Anwendungen wachsen und synchronisieren Sie eine große Anzahl von Würmern.

Die Züchtung Caenorhabditis elegans In Axenic Flüssige Medien und Erstellung von transgenen Worms durch Mikropartikelbeschuss

Aedes Aegypti Moskitos mit Wolbachia infiziert werden in natürlichen Populationen zu unterdrücken, die Übertragung von Arboviren freigesetzt. Wir beschreiben Methoden nach hinten Ae. Aegypti mit Wolbachia Infektionen im Labor für Experimente und Feld Freigabe, Vorsichtsmaßnahmen zum Labor Anpassung und Auswahl zu minimieren.

Pflege, Aedes Aegypti Moskitos mit Wolbachia infizierte

Dieses Protokoll beschreibt die Virusinfektion in Vivo in Drosophila Melanogaster mit dem Nano-Injektionsverfahren und Grundtechniken zu Virus-Wirt Interaktionen analysieren zu etablieren.

Gründung der Virusinfektion und Analyse von Host-Virus-Wechselwirkung in Drosophila Melanogaster

Vier Methoden wurden verwendet, um intrazelluläre Wolbachia nachzuweisen, die sich gegenseitig ergänzten und die Nachweisgenauigkeit der Wolbachia-Infektion von Aedes albopictus-abgeleiteten Aa23 und Aa23-T, die von nativer Wolbachia-Infektion mit Antibiotika geheilt wurden, verbesserten.

Nachweis des Wolbachia-Stammes wAlbB in Aedes albopictus-Zelllinien

Hier wird ein optimiertes Protokoll für die Kultivierung isolierter einzelner Nematoden auf festen Medien in mikrofabrizierten Multi-Well-Bauelementen vorgestellt. Dieser Ansatz ermöglicht es, einzelne Tiere ihr ganzes Leben lang auf eine Vielzahl von Phänotypen im Zusammenhang mit dem Altern und der Gesundheit zu überwachen, einschließlich Aktivität, Körpergröße und -form, Bewegungsgeometrie und Überleben.

Langzeitkultur und Monitoring von isolierten Caenorhabditis elegans auf festen Medien in Multi-Well-Geräten

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll vor, um isolierte einzelne Nematoden auf festen Medien zu kultivieren, um eine lebenslange Verfolgung physiologischer Parameter und eine Fluoreszenzquantifizierung zu ermöglichen. Dieses Kultursystem umfasst eine Palmitinsäurebarriere um einzelne Wurmbrunnen, um die Flucht der Tiere zu verhindern, was den Einsatz aversiver Interventionen, einschließlich pathogener Bakterien und chemischer Stressoren, ermöglicht.

Langzeitkultur einzelner Caenorhabditis elegans auf festen Medien für longitudinales Fluoreszenzmonitoring und aversive Interventionen

Zelllinien sind nützlich für Studien an intrazellulären Organismen, die nicht außerhalb ihrer Wirtszellen kultiviert werden können. Obwohl Wolbachia-infizierte Linien viele Entdeckungen ermöglicht haben, kann die Heterogenität innerhalb dieser Linien zu unterschiedlichen experimentellen Ergebnissen führen. Wir stellen ein Protokoll zur Generierung von Einzelzellklonen und kontinuierlichen Kulturen aus Wolbachia-infizierten JW18-Zellen vor.

Generierung monoklonaler Kulturen aus Wolbachia-infizierten Drosophila melanogaster JW18-Zelllinien

Erfahren Sie die Reinigung von Wolbachia pipientis aus Anopheles gambiae Zellkulturen mittels Glasperlen-Lyse und Differentialzentrifugation. Diese Methode ermöglicht die Kultivierung in zellfreiem Medium und die Durchführung von Viabilitätsassays.

Die Aufrechterhaltung Wolbachia in zellfreien Medium

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