Induction and Clinical Scoring von chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis

Ich bin Christine Beaton. Ich bin wissenschaftlicher Assistent im Labor von George Chen in der Abteilung für Physiologie und Biophysik der University of California in Irvine. Und was ich Ihnen in den nächsten Tagen zeigen werde, ist, wie man chronisch schubförmige EAE, was für Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in DA Ratten steht, induziert und überwacht.

Dies ist ein Tiermodell für Multiple Sklerose, oder sollte ich sagen, eines der Tiermodelle für Multiple Sklerose. Und sie ist gekennzeichnet durch eine aufsteigende schlaffe Lähmung bei den Tieren und histologische Merkmale, die der menschlichen Krankheit ähneln. Das wird also mehrere Tage dauern.

Am ersten Tag zeige ich Ihnen, wie Sie die genetische Emulsion mit naivem rotem Rückenmarkshomogenat in einem vollständigen trans-Adjuvans herstellen. Am zweiten Tag werde ich Ihnen zeigen, wie man die Ratten gegen UCAE immunisiert, und dann werden wir zwischen sieben und 15 Tagen warten, um die ersten klinischen Symptome bei diesen Tieren zu sehen, dann werde ich Ihnen die verschiedenen Stadien des Fortschreitens von EAE bei verschiedenen Tieren zeigen. Also zeige ich Ihnen zuerst alle Reagenzien und Materialien, die zur Herstellung der Emulsion benötigt werden.

Was ich also verwende, ist das komplette Frontadjuvans H 37 ra, aber obwohl es bereits Mikrobiumtuberkulose enthält, werde ich es auf vier Milligramm pro M mit mehr getrocknetem Mycobacterium tuberculosis IH 37 ra ergänzen. Und um diese getrockneten Bakterien zuzubereiten, muss ich sie in mehr Teer geben und mit dem Pele ein dünnes Pulver daraus machen. Sobald das erledigt ist, werde ich diese Bakterien in das Adjuvans geben.

Dann ist das Adjuvans fertig. Der nächste Schritt besteht darin, mein Antigen vorzubereiten. Ich nehme also das Rückenmark von D-Ratten heraus, die bei minus 80 Grad eingefroren sind, und um sie wirklich gefroren zu halten, lege ich sie in Trockeneis auf die Wiegeschale, und ich nehme sie einzeln heraus und zerkleinere das Rückenmark mit einfachen Rasierklingen in Wägeschalen.

Ich werde dann mein ergänztes Adjuvans auf den Wirbel legen. Und während des Vortexens werde ich mein Rückenmark nach und nach zu meinem Adjuvans hinzufügen, nachdem wir das gesamte Rückenmark mit dem Adjuvans auf dem Vortex gemischt haben. Wir werden weitere fünf Minuten vortexen, und danach werden wir die vorbereitete Immersion in fünf M-Glasspritzen übertragen.

Wir werden zwei Fünf-M-Glasspritzen mit einer 16-G-Brücke verbinden und die Emulsion so schnell wie möglich von einer Spritze zur anderen für diese Brücke befördern. Und nach ein paar Minuten, wenn die Emulsion anfängt, härter zu werden, wechseln wir zu einer kleineren Brücke. Das sind 18 G, und das wird die Emulsion noch härter machen, und wir werden sie in diesen Spritzen mit dieser Brücke in Alufolie eingewickelt über Nacht im Kühlschrank aufbewahren.

Also habe ich 30 Milligramm Mikrobentuberkulose auf dem Wägepapier gewogen. Ich habe sie auf einen Morar übertragen. Und mit einem Pelé habe ich die Aggregate der Bakterien zu einem dünnen Pulver zerkleinert.

Aber du willst nicht zu fest mit dem Stößel drücken, um die Bakterien nicht zu brechen. Wenn sich die Bakterien zu Beginn eines Eingriffs ansammeln, sind sie gelbbeige. Wenn du dünnes, dünnes Pulver gemacht hast, hast du am Ende ein weißes Pulver, und das ist es, was du willst, aber du willst nicht zu stark drücken, um die Bakterien zu brechen.

Sobald ich das getan habe, habe ich ein 10 mil Ampere komplettes Trans-Adjuvans genommen und sichergestellt, dass alle Bakterien in Suspension sind. Ich habe diese Probe aufgebrochen und die gesamten 10 mil des vollständigen trans-Adjuvans in die Morta auf das disaggregierte Mycobacterium tuberculosis gegossen. Und jetzt übertrage ich das ergänzte komplette Trans-Adjuvans in eine 50-mil-Tube.

Also nehme ich jetzt mein ergänztes komplettes Trans-Adjuvans und gebe es in eine Tube. Natürlich befinden sich die Bakterien am Boden der Flüssigkeit, und ich werde versuchen, die meisten von ihnen in die Röhre zu bekommen. Aber wenn ich etwas im Mörtel lasse, wird es kein so großes Problem sein, weil ich diesen Mörtel wiederverwenden werde, ohne ihn zu reinigen, um meine Rückenmarksemulsion vorzubereiten.

Hier sind also die Rückenmarks. Sie wurden bei minus 80 Grad eingefroren. Ich 10 Gramm von ihnen, um sie zu 10 ml meines ergänzten Adjuvans hinzuzufügen.

Was ich also mit diesen Rückenmark machen werde, während ich sie so lange wie möglich einfriere, werde ich in diesen Wiegeschalen mit Rasierklingen sehr fein zerkleinern. Um das Rückenmark sehr fein zu zerkleinern, braucht man also zwei Rasierklingen und eine Wiegeschale. Was ich also mache, ist, dass ich ein Rückenmark nehme, es in meine Wiegeschale lege, und ich fange an, es zu schneiden, und ich lege meine Hand darüber, so dass es, da es gefroren ist, sein Herz, anfängt, herumzuspringen und ich die ersten großen Brocken fange, und es wird sehr schnell anfangen aufzutauen und an der Seite meiner Rasierklinge kleben.

Also nehme ich die andere Rasierklinge, um sie abzunehmen, und ich versuche, sie so fein wie möglich und so schnell wie möglich zu zerkleinern, damit sie keine Zeit zum Schmelzen hat, weil es viel schwieriger ist, sie zu schneiden, wenn sie geschmolzen ist. Daher ist es äußerst wichtig, dass das Rückenmark vollständig zerkleinert wird, sehr fein, denn je feiner, je feiner es ist, desto homogener wird das Eintauchen sein, und desto mehr Ratten werden krank und mit einer homogeneren Krankheit. Es ist also extrem wichtig, all diese Rückenmark sehr, sehr gut zu zerkleinern.

Jetzt werde ich also jedes einzelne dieser Rückenmark auf genau die gleiche Weise zerkleinern, bis ich mit den ganzen 10 Gramm Rückenmark fertig bin. Was ich jetzt also tun werde, ist, das Rückenmark in der Morta ein wenig zu mischen, um sicherzustellen, dass ich das gesamte Mycobacterium tuberculosis sammle, das noch in der Morta verbleibt, nachdem ich das Adjuvans ergänzt habe. Und was ich als nächstes tun werde, ist, das Adjuvans auf den Wirbel zu geben.

Und während ich so schnell wie möglich kontinuierlich vortexe, werde ich nach und nach mein gemeines Rückenmark zu diesem Adjuvans hinzufügen. Jetzt habe ich also mein ergänztes Adjuvans auf dem Vortex, und ich werde anfangen, nach und nach meine Mittel hinzuzufügen. Der Grund, warum ich das A, das Antigen, sehr langsam zum Adjuvans hinzufüge, ist, dass wir eine Emulsion aus Wasser in Öl herstellen.

Das Adjuvans ist also meist Mineralöl, und das Antigen ist eine gleichwertige Lösung. Was wir also tun wollen, ist, das Antigen sehr langsam mit dem Öl zu mischen, so dass das Öl das Antigen jedes Mal, wenn wir es hinzufügen, vollständig bedeckt. Wenn wir es also auf einmal hinzufügen würden, würde es das Antigen nicht vollständig beschichten.

Jetzt habe ich also das gesamte gemeine Rückenmark zu dem Adjuvans auf dem Wirbel hinzugefügt, und ich habe den Schlauch auf den Wirbel geklebt, um ihn weitere fünf Minuten drehen zu lassen, um sicherzustellen, dass alles vollständig vermischt wird. Und ich passe die Geschwindigkeit so an, dass ich den höchstmöglichen Scheitelpunkt habe, ohne am Ende der Röhre zu viel zu verlieren. Jetzt sind die fünf weiteren Minuten des Wirbelns vorbei, und ich werde den Wirbel stoppen und meinen Händler in Glasspritzen verlegen.

Also habe ich eine volle Spritze zusammengebaut. Ich habe sie an der Brücke mit größerem Durchmesser befestigt, und an der anderen Hand der Brücke habe ich nur den Zylinder einer Spritze befestigt, und ich werde jetzt die Emulsion in diese Spritze geben. Also jetzt nein.

Jetzt nehme ich die gesamte Flüssigkeit in die untere Spritze, trenne die obere, beende den Zusammenbau der oberen Spritze und stelle sicher, dass sich keine Luftblase in meiner unteren Spritze oder in der Brücke befindet. Und jetzt werde ich wieder anbringen. Jetzt habe ich also beide Spritzen durch diese Brücke miteinander verbunden.

Einer steckt voller Immersion, der andere ist leer. Und was ich jetzt tun werde, ist, so schnell wie möglich zu drücken, den Zähler von einer Spritze zur anderen hin und her zu schieben. Also werde ich jetzt den Steg mit großem Durchmesser gegen einen kleineren mit dem 18 G Steg austauschen.

Durch den kleineren Steg wird die Emulsion noch dicker. Um die Brücken zu wechseln, gebe ich die gesamte Emulsion in eine Spritze. Ich entferne die leere Spritze, stelle sicher, dass ich nichts in der Brücke verliere, entferne die Brücke, setze die neue auf, verjage alle Luftblasen und befestige die andere Spritze wieder.

Und ich wiederhole die Prozedur, dass die Emulsion jetzt viel schwieriger zu durchlaufen ist, und ich achte darauf, diese Brücke, die sehr zerbrechlich ist, nicht zu brechen. Und ich wiederhole diesen Vorgang mit einem weiteren Satz Spritzen, solange ich Emulsion in meinem Röhrchen habe. Also verwende ich so viele Spritzen wie nötig, um die gesamte Emulsion aufzubrauchen.

Jetzt habe ich die Emulsion also mehrmals gemischt, vielleicht 10, 15 Mal, aber es variiert mit diesen Chargen. Und jetzt wird es extrem schwer, da durchzukommen. Und ich werde es noch ein paar Mal machen, naja, oder vielleicht auch nicht.

Es steckt jetzt wirklich fest, also lasse ich es dort. Andernfalls besteht die Gefahr, dass entweder eine Spritze oder die Brücke zerbricht. Wenn es also nicht mehr durchgeht, wenn es sehr früh passiert, bedeutet das, dass die Brücke vielleicht verstopft ist.

Aber an dieser Stelle, da ich es mindestens 10 oder 15 Mal gemischt habe, bedeutet das, dass die Emulsion fertig ist. Er ist sehr dickflüssig, also sollte ich ihn in Ruhe lassen. Jetzt wickle ich es in Alufolie ein und lege es für die Nacht in den Kühlschrank.

Also haben wir gestern die Emulsion mit rotem Rückenmark vorbereitet und die Emulsion über Nacht im Kühlschrank gelassen. Heute nehmen wir es heraus und injizieren es 200 Mikroliter pro Ratte an die Basis des Schwanzes. Aber bevor wir es injizieren, müssen wir sicherstellen, dass die Emulsion gut ist.

Es sollte also immer noch fest sein, und es ist immer noch ein schöner Feststoff. Der Riss, den Sie hier sehen, sagt uns sogar, dass es ein schöner Festkörper ist, er ist nicht in Phasen, in zwei Phasen, getrennt, was schlecht wäre. Diese Emulsion ist also gut zu verwenden.

Jeder Stall erhält also 200 Mikroliter unserer Emulsion. Und um es zu injizieren, verwenden wir drei Mil-Spritzen, aber wir stellen sicher, dass wir Lu-Lock-Spritzen verwenden, denn wenn wir verrutschte Spritzen verwenden, sind es Spritzen. Die Emulsion ist so dickflüssig, dass die Nadel herausspringen könnte, während wir versuchen, zu injizieren.

Entscheiden Sie sich also immer für die Lu-Lock-Spritze. Und als Nadel versuchen wir, mit der kleinstmöglichen Nadel zu arbeiten, aber bei einer so dicken Emulsion müssen wir eine 20-Gauge-Nadel verwenden. Da wir sehr genau an der Schwanzbasis injizieren müssen, anisieren wir die Ratten für ein paar Minuten und nutzen die Gelegenheit, dass diese Ratten fest schlafen, um sie zu markieren und zu markieren.

Wir verwenden Ohrstanzen, und jede Ratte wird durch ein bestimmtes Muster Ihrer Stanzung identifiziert. Jetzt sind wir bereit, die Ratten zu injizieren, und wir werden jeder Ratte 200 Mikroliter Emulsion an der Basis des Schwanzes geben, und wir werden gleichzeitig die Ohren markieren. Ich bereite die Emulsion in der Injektionsspritze jeweils nur für eine Ratte vor, weil es oft sehr schwierig ist, sie zu injizieren, und ich sehr stark drücke, und ich möchte einer Ratte nicht mehr injizieren, als sie braucht.

Also fülle ich die Spritze immer nur für ein Hu auf einmal. Um die Spritze zu füllen, verbinde ich meine Kunststoffspritze mit der Brücke, die ihrerseits mit der Glasspritze verbunden ist, die die Emulsion enthält. Ich habe etwa 300 Mikroliter Emulsion in meine Plastikspritze gegeben.

Dann verbinde ich die Nadel und drücke die Luft aus der Nadel heraus, damit ich diese 50 Mikroliter verlorenen Platz in der Nadel nicht verliere. Und ich stelle sicher, dass ich nur 200 Mikroliter habe, und dann injiziere ich es an die Basis des Schwanzes der Ratte. Jetzt, da wir alle unsere Herzen injiziert haben, werden wir sie täglich überwachen.

Wir werden sie also jeden Morgen wiegen und zweimal täglich auf klinische Anzeichen von EAE untersuchen. Die ersten Anzeichen, wie ich Ihnen zeigen werde, wenn sie auftreten, werden ein schlaffer Schwanz sein, und wir erwarten, dass diese Anzeichen bei den ersten Ratten um den siebten, achten Tag nach der Injektion auftreten werden. Die meisten Ratten werden zwischen dem 10. und dem 12. Tag krank, und die letzten Ratten werden zwischen dem 15. und 17. Tag krank.

Wir sind jetzt am 13. Tag, nachdem wir unsere Herzen mit der Rückenmarksemulsion immunisiert haben, und ich werde diese Tiere jetzt überwachen, um ihren klinischen Score zu überprüfen. Aber bevor ich das tue, möchte ich Ihnen vorstellen, wie wir unsere Tiere unterbringen. Autoimmunerkrankungen sind also die Eigenschaft, dass jeder im Tier vorhandene Krankheitserreger die Autoimmunreaktion reduziert.

Um das so weit wie möglich zu vermeiden, halten wir unsere Ratten unter bestimmten Bedingungen. Der Stall in dieser Liegebox, die gefilterte Luft enthält und unter Überdruck steht, die Tiere selbst werden in autoklavierten Käfigen untergebracht. Also wird absolut alles im Käfig autoklaviert, bevor wir das Rattennetz ausbringen.

Und sie haben Filter auf den Käfigen. Das Essen ist das Standard-Nagetierfutter. Ich bin es, von dem ich ausgegangen bin.

Und wir geben unseren Ratten auch angesäuertes Wasser. Wir nehmen normales Trinkwasser und fügen Salzsäure nach Standardprotokollen hinzu, und wir verwenden angesäuertes Wasser, um die Darmflora auf ein Minimum zu reduzieren, was das Risiko einer Beeinträchtigung unserer Autoimmunreaktion verringert. Jetzt bin ich bereit, die klinische Bewertung meiner Ratten durchzuführen.

Die Punktzahl reicht von einer Punktzahl von null, was keine klinischen Symptome bedeutet, bis sechs, was ein krankhafter Zustand ist, in dem der Fall mit der Tötung der Tiere erfolgt. Und jetzt werde ich Sie Schritt für Schritt führen und Ihnen Beispiele für jeden klinischen Score zeigen, den wir in diesem Modell finden können. Wir sind nun also am Tag 13 nach der Immunisierung der Ratten gegen UCAE.

Und in diesem Käfig habe ich zwei Ratten, die noch nicht krank geworden sind. Sie haben also absolut keine klinischen Anzeichen von yay. Beide Ratten sind also noch gesund.

Sie rennen herum, rennen herum, und wie Sie sehen können, heben sie ihren Schwanz von der Einstreu, wenn sie sich bewegen. Manchmal lassen sie den Schwanz trocknen, aber die meiste Zeit versuchen sie, ihn aus der Einstreu zu heben. Und wenn sie die Chance haben, klettern sie auch aus dem Käfig, was bedeutet, dass sie die volle Kontrolle über alle vier Gliedmaßen haben und bei Bedarf aufstehen können.

Das erste klinische Anzeichen von EA ist also ein schlaffer Schwanz. Wenn ich also eine Ratte aufhebe und meinen Finger gegen den Schwanz drücke, neigt die Ratte dazu, mit der Schwanzspitze zu greifen. Also, wie ihr gerade gesehen habt, hat diese Ratte keinen Li-Schwanz, und ich kann es mit der anderen machen.

Der Schwanz greift nach dem Finger, was bedeutet, dass diese Ratten einen voll reaktiven Schwanz haben. Sie haben einen klinischen Score von null, was bedeutet, dass es eigentlich gar kein a e gibt. Hier ist also eine Ratte, die einen klinischen Score von O 0,5 hat.

Wenn man ihn sich also nur im Käfig ansieht, verhält er sich absolut, normalerweise rennt er herum, er klettert an der Seite des Käfigs hoch, aber die Schwanzspitze kommt nie von der Einstreu ab. Diese Ratte könnte also einen teilweisen Schwanz der Gliedmaßen haben. Was ich also mache, ist, dass ich die Ratte schnappe und den gleichen Test mache, und obwohl der Schwanz einen gewissen Ton hat, kräuselt sich das Ende nicht vollständig an meinem Finger.

Also bewerte ich diese Ratte mit einer Punktzahl von 1,5, was teilweise Li-Schwanz ist. Der klinische Score von eins ist also durch einen vollständig flachen Schwanz gekennzeichnet, so dass kein Teil des Schwanzes einen Ton hat, aber der Rote kann immer noch seine Hinterlinien benutzen. Wie Sie sehen können, steht diese Ratte an der Seite des Käfigs, was zeigt, dass ihre Hinterbeine normal funktionieren.

Aber wenn ich den Schwanz dieser Ratten überprüfe, indem ich sie hochhebe, ist absolut kein Ton in ihrem Schwanz. Ein weiterer Test, den Sie durchführen können, ist, während sich der RU im unteren Teil des Käfigs befindet, wenn Sie den Schwanz mit einem normalen RU anheben, wird der Schwanz langsam nach unten kommen oder vielleicht nicht einmal den Boden mit dem RU mit einer Punktzahl von eins erreichen. Wenn du den Schwanz anhebst, fällt er sofort zu Boden.

Dieses EVU hier kann alle vier Gliedmaßen bewegen, aber die hinteren Gliedmaßen sind zu schwach, um dieses EVU aufstehen zu lassen. Daher klassifiziere ich diese RU mit einem klinischen Score von zwei. Der Hauptunterschied zwischen einer Punktzahl von eins und zwei besteht also darin, dass die Punktzahl von eins nur ein schlaffer Schwanz ist.

Die Hinterbeine sind voll funktionsfähig, und bei drei Punkten würde die Ratte auf die Seite fallen. Zwei ist mittelschwer, so dass die Ratte sie mit dem Rücken und den Hinterbeinen benutzen kann, aber sie sind viel schwächer als die einer normalen Ratte. Diese Ratte hat also eine ungewöhnliche Eigenschaft von EAE.

Normalerweise wird EAE als aufsteigende schlaffe Lähmung charakterisiert, aber in einigen Fällen, die ziemlich selten sind, wie in diesem, entwickeln die Ratten zuerst eine Lähmung der vorderen Gliedmaßen, bevor die hintere Gliedmaße gelähmt wird. Und das ist bei dieser Ratte der Fall. Wenn man es sich also ansieht, ist es so, dass sein Kopf tiefer ist als der Rest seines Körpers, weil der Rechte Schwierigkeiten mit seinen vorderen Gliedmaßen hat und er nicht an der Seite des Käfigs klettern kann.

Und obwohl seine hinteren Gliedmaßen normal arbeiten, kann er mit seinen vorderen Gliedmaßen nicht drücken. Also würde ich diese Ratte immer noch mit einer Punktzahl von zwei bewerten, was milden Paras entsprechen würde, obwohl wir das normalerweise bei den Hintergliedmaßen in diesem Ru sehen, sehen wir es bei den vier Gliedmaßen. Diese RU hat also einen viel schwereren Phänotyp als die vorherigen.

Es hat einen klinischen Score von drei. Wie ich Ihnen zeigen werde, funktionieren die vorderen Gliedmaßen absolut normal, aber die beiden hinteren Gliedmaßen haben eine moderate Parais. Beide Gliedmaßen können sich also vom EVU bewegen, aber das EVU fällt auf die Seite und kann diese Beine nicht vollständig kontrollieren.

Diese Sporen werden viel schwächer, als sie es normalerweise ohne EE wären. Und in diesem Stadium machen wir uns keine Sorgen mehr über das Hinken des Schwanzes, denn viele dieser Ratten fangen nach einer Weile an, einen sehr drahtigen Schwanz zu haben. Dieser hat also immer noch einen sehr schlaffen Schwanz, aber manchmal kann man etwas Dystonie sehen. Der Schwanz beginnt sich also unkoordiniert zu bewegen.

Wir schauen also nicht mehr auf den Schwanz auf dieser Ebene, sondern nur noch darauf, wie die Gliedmaßen funktionieren. Wir bewerten das mit 3,5 richtig, denn wenn wir uns seine Hintergliedmaßen ansehen, bewegt sich eines, aber das andere ist vollständig gelähmt und hilft überhaupt nicht bei der Bewegung nach vorne. Dies wird also als vollständige Lähmung einer Hinterlinie und damit als Punktzahl von 3,5 angesehen.

Dieses RU hat einen klinischen Score von vier, was eine vollständige Lähmung der Hinterlinie bedeutet, und dies ist gekennzeichnet durch eine völlige Unfähigkeit, seine Hinterbeine zu bewegen. Die Ratte, die wir in diesem Käfig haben, hat einen klinischen Score von fünf, was einer kompletten Hinterlinienlähmung mit zusätzlicher Inkontinenz entspricht. Dieses Tier ist inkontinent, wie wir sehen können, sein vollständiges Gewicht in diesem Bereich, das wir bei den anderen Tieren, die nicht auf dem Kontinent sind, nicht sehen.

Wenn unsere HUS drei oder mehr Punkte haben, geben wir ihnen Wasserflaschen mit langen Trinkschläuchen, um sicherzustellen, dass sie Zugang zum Wasser haben. Und wir legen auch Futter auf den Boden des Käfigs und geben ihnen auch Gelpackungen. Aber trotz alledem bieten wir den Ratten jedes Mal, wenn wir sie überwachen, was zweimal am Tag der Fall ist, Wasser an, falls sie tagsüber nicht genug Wasser haben.

Hier habe ich eine Ratte mit einem klinischen Score von vier. Und in diesem Stadium müssen diese Tiere ein wenig zum Fressen ermutigt werden. Was ich also mache, ist, dass ich ihr Futter nass mache, was es für sie viel einfacher macht, darauf zu kauen.

In den letzten zwei Wochen habe ich Ihnen gezeigt, wie Sie chronisch schubförmige EAE bei DA-Ratten induzieren und überwachen können. Im ersten Schritt habe ich Ihnen gezeigt, wie Sie das Eintauchen in das Rückenmark vorbereiten und es dann an die Basis des Schwanzes dieser Ratten injizieren. Und heute habe ich Ihnen gezeigt, wie Sie Ratten mit unterschiedlichen Krankheitsgraden bewerten können.

Natürlich handelt es sich um ein chronisch schubförmiges Modell, daher gehen wir davon aus, dass die Ratten schwankende Werte aufweisen. Die Krankheit wird in ein paar Tagen in Remission gehen und mit der Zeit einen Rückfall erleiden. Einige Ratten werden in eine chronischere Krankheitsphase übergehen.

Das ist von Tier zu Tier unterschiedlich. Bevor wir dieses Video beenden, möchte ich eine Sache über das Testen von Medikamenten in diesen Modellen betonen. Der sehr wichtige Punkt ist, die Tiere so gut wie möglich nach dem Zufallsprinzip zu randomisieren.

Eine sehr wichtige Sache, die man wissen sollte, ist, je früher das Tier krank wird, desto schwerer ist die Krankheit. Sie möchten also nicht alle Ihre Kontrolltiere am ersten Tag gruppieren, und Sie werden in den nächsten Tagen behandelt. Sobald ein Tier krank wird und wir mit der Behandlung beginnen möchten, teilen wir die Tiere nach dem Zufallsprinzip in zwei verschiedene Gruppen ein.

Wenn wir zum Beispiel eine Kontrollgruppe und eine behandelte Gruppe haben, dann kommt das erste Herz in die Kontrollgruppe, das zweite in eine behandelte Gruppe und so weiter, bis alle Tiere in ihre eigene Gruppe eingeteilt sind. Aber wir stellen sicher, dass diese Randomisierung so früh wie möglich im Protokoll erfolgt. Ich hoffe also, dass dieses Video für Sie hilfreich war und dass Sie in der Lage sein werden, chronisch schubförmige EAE bei D-Ratten zu induzieren und zu überwachen.

Und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.