Name: Induction and Clinical Scoring von chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 48 s
Description: Lernen Sie die Induktion und klinische Bewertung der chronisch-rezidivierenden experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis bei DA-Ratten. Dieses Modell ermöglicht die Erforschung von Multipler Sklerose mit standardisierten Methoden.

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Induktion und Überwachung von chronisch-rezidivierenden EAE Die Emulsion ist eine 1:1-Mischung von Antigen in wässriger Lösung hinzugefügt ergänzt komplettem Freund-Adjuvans. Es ist sehr wichtig, um das Antigen an das Adjuvans und nicht umgekehrt hinzuzufügen! Es gibt eine Menge von Abfällen, wenn Herstellung und Injektion einer Emulsion. Immer vorzubereiten 1,5 oder 2-mal mehr als das, was Sie brauchen. Verwenden Sie autoklaviert Mörtel, Pistill, Glasspritzen und Brücken. Alle Kunststoffe sollten steril sein. Das Präparat kann in regelmäßigen Labortisch durchgeführt werden. 1. Vorbereitung des ergänzt adjuvante Wiegen Sie 30 mg Mycobacterium tuberculosis (Difco Katalog # 231141) und in einen Mörser. Machen Sie in dünne Pulver ohne Druck zu hart, um zu vermeiden brechen die Bakterien. 10 ml komplettem Freund-Adjuvans H37Ra (Difco Katalog # 231131) und mischen. Dies ergänzt adjuvante enthält nun 4 mg / ml Mycobacterium tuberculosis. Transfer in ein Rohr. 2. Vorbereitung der Rückenmark-Homogenat Sammeln Rückenmark von DA-Ratten (Alter / Geschlecht gleichgültig) und bei -80 ° C eingefroren Wiegen Sie die gefrorenen Rückenmark haben genug, um 1:1 (Gewicht: Volumen) mischen sich mit den ergänzten Adjuvans. Mince das Rückenmark so fein wie möglich mit einer Rasierklinge, um den Mörtel in Abschnitt 1 zu übertragen, und eine Paste mit dem Pistill. 3. Herstellung der Emulsion <ol><li> Legen Sie ergänzt komplettem Freund-Adjuvans in einem Rohr. Vortex mit hoher Geschwindigkeit. Fügen Sie die Rückenmark-Homogenat tropfenweise unter Vortexen. Wenn alle Rückenmark-Homogenat hinzugefügt wird, Wirbel für weitere 5 Minuten. Die Mischung sollte wiederum hellrosa. </li><li> Legen Sie die Emulsion in einem 5 ml Glasspritze und verknüpfen es mit weiteren 5 ml Glasspritze mit einer 18G-Brücke (Fisher Katalog # 14-825-17L). Senden Sie die Emulsion aus einer Spritze auf der anderen, bis sie hart (5-10 min) wird. Wenn mehr als 5 ml Emulsion hergestellt wird, nutzen mehrere 5 ml Spritzen KEINE größere Spritzen. </li><li> Die Emulsion kann in die Spritzen bei 4 ° C für 3 Wochen gelagert. Ich empfehle bereitet es mindestens 12 Stunden im Voraus zu überprüfen, ob sie nicht brechen. Es sollte auch weiterhin dick und nicht getrennt in 2 Phasen. Die Farbe wird über Nacht ändern, um eine hellgelbe oder beige. </li></ol> 4. Die Immunisierung der Ratten <ol><li> Mix der Emulsion in die Spritzen für ein paar Minuten und Transfer zum Spritzen für die Injektion verwendet. Inject 200 ul subkutan in die eigentliche Basis des Schwanzes mit 23G Nadeln und 3 ml Luer-Lock Spritzen unter kurzfristigen Anästhesie. </li><li> Die Empfänger sind 7-9 Wochen alte weibliche DA-Ratten. Wir bekommen unsere Ratten von Harlan-Sprague Dawley. </li><li> Ratten sollte zweimal täglich beobachtet und gewogen täglich. Klinische Symptome sind 7-15 Tage nach der Injektion der Emulsion zu erwarten. </li></ol> Klinische Wertung: 0: keine Krankheit 0,5: distalen schlaffen Schwanz 1: schlaffe Schwanz 2: mild Paraparese, Ataxie 3: mäßige Paraparese, die Ratten Reisen von Zeit zu Zeit 3,5: ein Hinterbein des Körpers ist gelähmt, die andere bewegt sich 4: komplette Hinterbein Lähmung 5: komplette Hinterbein Lähmung und Inkontinenz 6: moribund, Atembeschwerden, nicht essen oder trinken. Euthanize sofort.

CB und KGC sind Mitbegründer und Berater für Airmid Inc.

Es gibt ein paar wichtige Überlegungen für dieses Protokoll. Genetik der DA-Ratten wird etwas anders sein je nachdem, welche Züchter werden sie von gekauft. Diese Unterschiede können Zu-oder Abnahme der Empfindlichkeit von Ratten die Induktion EAE. Wenn Ihr Ratten anfälliger für EAE sind, werden Sie wollen, um die Stärke der Immunisierung unter Verwendung von nicht-ergänzten komplettem Freund-Adjuvans oder sogar unvollständig Freunds Adjuvans reduzieren. Sie können sich auch die Verringerung der Menge der Emulsion injiziert oder Ver...

<table><tbody><tr><td>Vollständiges Freund&amp;rsquo;s Adjuvans</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF 311-360-5</td><td>Hergestellt von Difco</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF3114-33-8</td><td>Hergestellt von Difco</td></tr><tr><td>DA-Ratte</td><td>Tier</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>Weiblich, 7–9 Wochen alt.</td></tr><tr><td>Glasspritzen – 5 ml</td><td>Werkzeug</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td></td></tr><tr><td>Metallkanüle – 18G</td><td>Werkzeug</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Luer-Lock-Kunststoffspritzen – 3 ml</td><td>Werkzeug</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>Kanülen – 20G 1 1/2</td><td>Werkzeug</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5C</td><td></td></tr></tbody></table>

induction and clinical scoring von chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen enzephalomyelitis

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple Sklerose (MS) ist eine chronische entzündliche Erkrankung des zentralen Nervensystems (ZNS), die häufig bei jungen Erwachsenen. Es wird durch Demyelinisierung und Gliazellen zu erschrecken in Bereichen des Gehirns und des Rückenmarks verbreitet charakterisiert. Diese Läsionen verändern Nervenleitung und induzieren die zu Beeinträchtigungen führende neurologische Defizite, die mit der Lage der demyelinisierte Plaques im ZNS (zB Paraparese, Lähmung, Erblindung, Inkontinenz) variieren. Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) ist ein Modell für MS. EAE wurde zum ersten Mal versehentlich in den Menschen während der Tollwutimpfung induziert, mit Viren auf Kaninchen Rückenmark gewachsen. Rückstände von Rückenmark injiziert mit dem inaktivierten Virus induzierten ZNS Erkrankungen. Nach diesen Beobachtungen wurde ein erstes Modell der EAE in nicht-menschlichen Primaten mit einer ZNS-Homogenat durch Flüsse und Schwenther in 1935 immunisiert beschrieben. EAE ist seitdem in einer Vielzahl von Arten erzeugt worden und kann verschiedene Kurse je nach Art / Stamm und immunisierende Antigen verwendet folgen. Zum Beispiel Immunisierung Lewis Ratten mit Myelin basisches Protein in Emulsion mit Adjuvans induziert eine akute Modell der EAE, während das gleiche Antigen induziert eine chronische Krankheit bei Meerschweinchen. Die EAE-Modell beschrieben ist hier durch die Immunisierung von DA Ratten gegen DA Ratte Rückenmark in Emulsion in komplettem Freund-Adjuvans induziert. Ratten entwickeln eine aufsteigende schlaffe Lähmung innerhalb von 7-14 Tagen post-Immunisierung. Klinische Symptome folgen einem schubförmigen Verlauf über mehrere Wochen. Pathologie zeigt große Immunsystem Infiltrate im ZNS und Demyelinisierung Plaques. Besondere Überlegungen für die Betreuung von Tieren mit EAE sind am Ende des Videos beschrieben.

Dieses Video zeigt die Induktion und klinischen Scoring von einem Tiermodell der Multiplen Sklerose: chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in DA-Ratten. Die Krankheit, durch die Immunisierung von Ratten mit einer Emulsion, die ganze Ratte Rückenmark und komplettem Freund-Adjuvans induziert, weist klinische Symptome ähnlich der menschlichen Erkrankung.

Induction and Clinical Scoring von chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis

Multiple Sklerose (MS) ist eine chronisch-entzündliche Erkrankung des zentralen Nervensystems (ZNS), die häufig junge Erwachsene betrifft. Sie ist charakterisiert durch ...

Ich bin Christine Beaton. Ich bin wissenschaftliche Mitarbeiterin im Labor von George Chen am Department für Physiologie und Biophysik der University of California in Irvine. Und ich werde Ihnen in den nächsten Tagen zeigen, wie man eine chronisch rezidivierende EAE – das steht für experimentell autoimmune Enzephalomyelitis – bei DA-Ratten auslöst und überwacht.Dies ist ein Tiermodell für multiple Sklerose, oder besser gesagt, eines der Tiermodelle für multiple Sklerose. Es zeichnet sich durch eine aufsteigende schlaffe Lähmung bei diesen Tieren sowie histologische Merkmale aus, die der menschlichen Erkrankung ähneln. Dieser Vorgang wird daher mehrere Tage in Anspruch nehmen.Am ersten Tag zeige ich Ihnen, wie man die Genick-Emulsion mit naivem rotem Rückenmarkshomogenat in komplettem adjuvanten Transmittel herstellt. Am zweiten Tag zeige ich Ihnen, wie man die Ratten gegen UCAE impft, und danach warten wir zwischen sieben und 15 Tagen, um die ersten klinischen Anzeichen bei diesen Tieren zu beobachten. Zu diesem Zeitpunkt zeige ich Ihnen die verschiedenen Stadien des EAE-Verlaufs bei den unterschiedlichen Tieren. Zunächst zeige ich Ihnen alle Reagenzien und Materialien, die zur Her

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In diesem Video zeigen wir, wie man mononukleären Zellen aus dem zentralen Nervensystem von Ratten mit experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis isolieren.

Isolierung von mononukleären Zellen aus dem zentralen Nervensystem von Ratten mit EAE

Das Video zeigt die Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in einem Mausmodell durch Injektion einer Kombination aus Myelin-Oligodendrozyten-Glykoproteinen und inaktiviertem Mycobacterium tuberculosis. Das Modell ermöglicht es Forschenden, Krankheitsmechanismen zu untersuchen und therapeutische Interventionen zu testen.

Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

In diesem Video wird ein Mausmodell für Multiple Sklerose mit Hilfe der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) erstellt. Der Maus wird eine Emulsion injiziert, die ein neuronales Peptid und ein Adjuvans enthält, wodurch eine Immunantwort ausgelöst wird, die autoreaktive T-Zellen aktiviert. Darauf folgt eine Injektion von Pertussis-Toxin (PTX), um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass die autoreaktiven T-Zellen das Gehirn infiltrieren können. Diese...

Dieses Manuskript beschreibt die Methoden zur Induktion und Bewertung des experimentellen Modells der autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE), zusammen mit der Beurteilung der Immunzellverteilung und der mRNA-Zytokinspiegel in Lymphknoten, Milz, Blut und Rückenmark mittels Durchflusszytometrie bzw. quantitativer PCR in verschiedenen Krankheitsstadien.

Die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis bei Mäusen und die Auswertung des Krankheitsabhängige Verteilung von Immunzellen in verschiedenen Geweben

Hier präsentieren wir Ihnen Protokolle, um die Beeinträchtigung der neurovaskuläre Einheit während experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis in vivo zu untersuchen. Wir gezielt auf Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke und Gelatinase Tätigkeit in Leukozyte Migration über die Glia Limitans ermitteln.

Beeinträchtigung der Endothelzellen und glialen Barrieren des Referats neurovaskuläre während experimentelle Autoimmune Enzephalomyelitis In Vivo Visualisierung

Dieses Manuskript stellt ein Protokoll zur Induzieren von aktiver experimenteller Autoimmunenzephalomyelitis (EAE) bei Mäusen dar. Eine Methode zur Isolierung und Charakterisierung der infiltrierten Lymphozyten im Zentralnervensystem (ZNS) wird ebenfalls vorgestellt, um zu zeigen, wie Lymphozyten an der Entwicklung einer CNS-Autoimmunerkrankung beteiligt sind.

Flow Cytometric Analyse der Lymphozyteninfiltration im Zentralnervensystem während der experimentellen Autoimmunenzephalomyelitis

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in einem Mausmodell unter Verwendung von Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein und die Überwachung des Krankheitsprozesses mit einem klinischen Scoring-System. Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis-bezogene Symptome werden mittels Mausfemur-Mikro-Computertomographie und Freilandtest analysiert, um den Krankheitsprozess umfassend zu beurteilen.

Induktion und diverse Bewertungsindikatoren der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis

Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) dient als Tiermodell der Multiplen Sklerose. Dieser Artikel beschreibt einen Ansatz zur Bewertung von Rückenmarksentzündungen, Demyelinisierung und axonalen Verletzungen bei EAE. Darüber hinaus wird eine Methode zur Quantifizierung des löslichen Neurofilament-Lichtspiegels im Mäuseserum vorgestellt, die die Beurteilung der axonalen Schädigung in lebenden Mäusen erleichtert.

Bewertung von Entzündungen, Demyelinisierung und Axonverletzungen des Zentralnervensystems bei experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis

Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis ist eines der am weitesten verbreiteten murinen Modelle der Multiplen Sklerose. Im aktuellen Protokoll werden C57BL/6J-Mäuse beiderlei Geschlechts mit dem Myelin-Oligodendrozyten-Glykoproteinpeptid immunisiert, was hauptsächlich zu einer aufsteigenden Parese des Schwanzes und der Gliedmaßen führt. Hier besprechen wir das Protokoll der EAE-Induktion und -Auswertung.

Modellierung der Multiplen Sklerose bei beiden Geschlechtern: MOG35-55-induzierte experimentelle Autoimmunenzephalomyelitis

Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) ist ein Tiermodell für Multiple Sklerose (MS), das mit der menschlichen Krankheit eine robuste humorale Autoimmunreaktion teilt. In dieser Arbeit berichten wir über ein einfaches und flexibles ELISA-Protokoll zur Quantifizierung von Autoantikörpern im Serum von EAE-immunisierten Mäusen.

Quantifizierung autoreaktiver Antikörper in Mäusen nach experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis

Lernen Sie die Induktion und klinische Bewertung der chronisch-rezidivierenden experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis bei DA-Ratten. Dieses Modell ermöglicht die Erforschung von Multipler Sklerose mit standardisierten Methoden.

Induction and Clinical Scoring von chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis

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