Name: Large Scale Zebrafisch-Based In-vivo- Small Molecule-Screen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-30T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie mit Zebrafisch-Embryonen in 96-Well-Platten eine hochdurchsatzfähige Screening-Methode für kleine Moleküle durchführen. Diese Technik ermöglicht die Identifizierung bioaktiver Verbindungen, die die embryonale Entwicklung und Physiologie modulieren.

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1) Zebrafisch Egg Collection <ol><li> Am Nachmittag vor dem Tag der chemischen Bildschirm einrichten 10 bis 20 Zebrafisch Zuchtbecken. Füllen Sie die einzelnen Behälter mit Wasser aus der Aquakultur System. Mit einem Fangnetz, Transfer ein erwachsenes Männchen und 1-2 erwachsenen Weibchen zu Innenbehälter in jedem Aufzuchtbecken. Separate der männlichen und weiblichen Fische voneinander mit einem Teiler. Beschriften Sie die Käfige und einen Deckel über sie. </li><li> Am Morgen des Bildschirms, entfernen Sie die Teiler von Zuchtbecken und ermöglichen Zebrafisch zu paaren. Im Laufe der nächsten 1 Stunde ermöglichen befruchteten Eizellen durch das Gitter an der Unterseite eines jeden inneren Behälter fallen. </li><li> Nach 1 Stunde zurück Erw. Zebrafisch zurück zur permanenten Speicher, entfernen Sie den inneren Behälter und sammeln die Eier durch Anstrengung das Wasser in jedes Aufzuchtbecken durch eine Kunststoff-Teesieb. </li><li> Kehren Sie die Sieb über einer Petrischale und spülen Sie das Sieb vorsichtig, um die Eier in die Petrischale bündig mit einer Waschflasche mit dem E3 Medium. </li><li> Alle unbefruchteten Eiern, die undurchsichtig erscheinen, sollten entfernt mit einem Einweg-Kunststoff-Pipette werden. Jede Paarung Kreuz sollte Ausbeute etwa 200 Embryonen. </li></ol> 2) Arraying Embryos in 96-well Platten <ol><li> Transfer ca. 5 Embryonen in E3 Medium in jedes Well einer 96-Well-Platte mit einem Glas Pasteur Pipette. </li><li> Einmal Embryonen auf die 96-Well-Platte sind aufgereiht, entfernen Sie so viel von der E3 Medium wie möglich aus dem Brunnen mit einem 12-Kanal (30 bis 300 ul) Pipette, dabei nicht zu durchstechen des Embryos. Mit dem 12-Kanal-Pipette, liefern 250 ul E3-Medium mit Kanamycin 0.5μg/ml in jede Vertiefung so schnell wie möglich, um nicht zu erlauben Embryonen zu versiegen. </li><li> Setzen Sie die 96-Well-Platten in 28,5 ° C Inkubator bis sie die gewünschte Stufe, wenn die Verbindungen hinzugefügt werden zu erreichen. </li></ol> 3) Übertragung von Small Molecule-Bibliothek Während Verbindung Transfer mit Roboter-Transfer-Methoden automatisiert werden können, beschreiben wir die manuelle Methode zur Übertragung. <ol><li> Kleines Molekül-Bibliotheken werden in der Regel in einer 96-Well-Format geliefert, wobei jede Verbindung in DMSO als 10 mM Lager abgelegt. Etwa 60 Minuten vor der Embryonen das Stadium erreicht, wenn die Verbindungen hinzugefügt werden sollen, Tauwetter eine gewünschte Anzahl von 96-well-Platten mit Aliquots von kleinen Molekülen (Quelle Platte). Beachten Sie die Seriennummer oder sonstige Identifizierungsnummer der Quelle Platten. Zur Minimierung von Kondenswasser auf den Platten, kann Auftauen in einer Austrocknung Kammer mit Drierite (WA HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH) auftreten. </li><li> Kurz-Spin-Down der Platten in einer Tischzentrifuge mit Multi-Well-Platte-Adapter ausgestattet. </li><li> Entfernen Sie die Aluminium-Versiegelung von Quelle Platte. Mit einem 12-Kanal-Pipette, verdünnte die Verbindungen in die Quelle Platte, um die Konzentration von 0,5 mM (zum Beispiel, wenn beginnend mit 250 nL Aliquots von 10mM Lager, fügen 4,75 l DMSO in jede Vertiefung). </li><li> Wenn die Embryonen in der 96-Well-Platte (Empfänger Platte) den gewünschten Zustand zu erreichen, verwenden Sie ein 12-Kanal (2-20 mL) Pipette 2.5μL von Verbindungen (0,5 mm) von der Quelle Platten Transfer in die Empfänger-Platten, die die Embryonen. </li><li> Notieren Sie sich die Kennnummer der Quelle Platten auf den Empfänger Embryo Platten. Decken Sie die Empfänger-Platten nun mit den Embryonen und Verbindungen mit Deckel, vorsichtig mischen die Platten durch vorsichtiges Schwenken, und legen Sie sie in einem 28,5 ° C Inkubator. </li><li> Cover jede Quelle Platte mit ungenutzten kleinen Molekülen (0,5 mM) mit einem Aluminium-Dichtband und in einem -80 ° C Gefrierschrank für langfristige Lagerung. </li></ol> 4) Vorsorgeuntersuchungen für Wirkung von kleinen Molekülen durch visuelle Inspektion der Phänotypen <ol><li> Vor der Durchführung des Bildschirms, formulieren ein bestimmtes Kriterium für das, was wäre ein &quot;Hit&quot; darstellen. </li><li> Am gewünschten Zeiten in der Entwicklung, entfernen Sie die 96-well-Platten, die Verbindung behandelten Embryonen aus Inkubator und prüfen jede Vertiefung unter einem Stereomikroskop. Zur besseren Visualisierung von subtilen Veränderungen, wie zum Beispiel Änderungen in Kreislauf-Muster kann eine Phasen-Kontrast-inverse Mikroskop verwendet werden. Fluoreszenz-Mikroskopie kann verwendet werden, um Störung der Expression von GFP oder DsRed Proteine ​​unter einer Gewebe-spezifischen Promotor zu untersuchen. </li><li> Schnell die 96-Well-Platten für alle gut in die mindestens 3 von 5 Embryonen zeigen die vorgeschriebenen &quot;Hit&quot;-Phänotyp. Notieren Sie sich die Identität der Platte und die auch Standort eines jeden potentiellen Hit. </li><li> Bestätigen Sie ein potentieller Hit von erneute Testen der Auswirkungen der Verbindung bei mehreren Dosen (1 uM, 5 uM, 10 uM und 50 uM). Für jede Dosis wurden 10 Embryonen in 0,5 ml E3-Medien in einer 48-Well-Platte-Format getestet. Der Zeitpunkt der Verbindung hinaus für eine erneute sollte identisch mit dem des ursprünglichen Screening. Ein Hit ist bestätigt, wenn die ausgelöste Phänotyp auf einen erneuten Test der compoun wiedergegebend </li><li> Identifizieren Sie die Hit-Verbindung aus der Datenbank von kleinen Molekülen in der chemischen Bibliothek. </li></ol>

<ol><li>Bayliss, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modulation+of+receptor+signaling+inhibits+regenerative+angiogenesis+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+chemical+biology%22%5BJournal%5D)">Chemical modulation of receptor signaling inhibits regenerative angiogenesis in adult zebrafish.</a> Nature chemical biology. 2, 265-273 (2006).</li>
<li>Burns, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+assay+for+small+molecules+that+modulate+zebrafish+embryonic+heart+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+chemical+biology%22%5BJournal%5D)">High-throughput assay for small molecules that modulate zebrafish embryonic heart rate.</a> Nature chemical biology. 1, 263-264 (2005).</li>
<li>Hao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+structure-activity+relationship+study+of+dorsomorphin+analogues+identifies+selective+VEGF+and+BMP+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+chemical+biology%22%5BJournal%5D)">In vivo structure-activity relationship study of dorsomorphin analogues identifies selective VEGF and BMP inhibitors.</a> ACS chemical biology. 5, 245-253 (2010).</li>
<li>Hong, C. C., Peterson, Q. P., Hong, J. Y., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artery%2Fvein+specification+is+governed+by+opposing+phosphatidylinositol-3+kinase+and+MAP+kinase%2FERK+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Artery/vein specification is governed by opposing phosphatidylinositol-3 kinase and MAP kinase/ERK signaling.</a> Curr Biol. 16, 1366-1372 (2006).</li>
<li>Milan, D. J., Peterson, T. A., Ruskin, J. N., Peterson, R. T., MacRae, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugs+that+induce+repolarization+abnormalities+cause+bradycardia+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Drugs that induce repolarization abnormalities cause bradycardia in zebrafish.</a> Circulation. 107, 1355-1358 (2003).</li>
<li>Peterson, R. T., Link, B. A., Dowling, J. E., Schreiber, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule+developmental+screens+reveal+the+logic+and+timing+of+vertebrate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Small molecule developmental screens reveal the logic and timing of vertebrate development.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12965-12969 (2000).</li>
<li>Yu, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsomorphin+inhibits+BMP+signals+required+for+embryogenesis+and+iron+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+chemical+biology%22%5BJournal%5D)">Dorsomorphin inhibits BMP signals required for embryogenesis and iron metabolism.</a> Nature chemical biology. 4, 33-41 (2008).</li>
<li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews%22%5BJournal%5D)">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nature reviews. 4, 35-44 (2005).</li>
<li>Stern, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecules+that+delay+S+phase+suppress+a+zebrafish+bmyb+mutant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+chemical+biology%22%5BJournal%5D)">Small molecules that delay S phase suppress a zebrafish bmyb mutant.</a> Nature chemical biology. 1, 366-370 (2005).</li>
<li>Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+suppression+of+a+genetic+mutation+in+a+zebrafish+model+of+aortic+coarctation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Chemical suppression of a genetic mutation in a zebrafish model of aortic coarctation.</a> Nature biotechnology. 22, 595-599 (2004).</li>
</ol>

Bei der Planung eines Zebrafisch-basierte chemische Bildschirm, muss besonderes Augenmerk auf die Robustheit der Phänotyp unter Berücksichtigung der Hintergrund von solchen Phänotyp bezahlt werden. Dies ist besonders wichtig für Bildschirme für chemische Suppressoren einer induzierten Phänotyp. Zum Beispiel für einen Phänotyp durch Hitze-Schock-Induktion einer Transgen hervorgerufen, die Bedingung, dass der Phänotyp induziert reproduzierbar muss genau abgebildet werden aus vor Beginn der Bildschirm zu unvertretbar hohen...

<ol><li> Mindestens 20 Paar erwachsenen Zebrafisch der gewünschten Genotyp. </li><li> Fischernetzen, Zuchtbecken, mit abnehmbarem Innenbehälter und Teiler (aquatische Habitate). </li><li> Petrischalen (10 cm). </li><li> Plastic Teesieb. </li><li> Waschflasche containg Embryo Wasser. </li><li> Einweghandschuhe aus Polyethylen Transferpipetten. </li><li> Polystyrol 96-well Rundboden-Assay-Platten (Corning Costar, Lowell, MA). </li><li> Glass Pasteurpipette (Fisher Scientific). </li><li> Manuelle Pipetten Pumpe, 10 mL (Bel-Art Products, Pequannock, NJ). </li><li> E3 Embryo Medium: 5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl 2, 0,33 mM MgSO 4, mit 0,003% PTU (Phenylthio-Carbamid, Sigma, St. Louis, MO). PTU kann als 10-fach durch Auflösen von 0,3-g PTU in 1 L E3 Embryo Medien vorbereitet werden. Lösungen, die PTU sollten vor Licht durch Abdecken mit Alufolie geschützt werden. </li><li> 12-Kanal-Pipetten, 2-20 ul (Eppendorf). </li><li> 12-Kanal-Pipetten, 3-300 ul (Eppendorf). </li><li> Disposable Pipette Polystyrol-Becken, 50 mL (Fisher Scientific). </li><li> Kleines Molekül-Bibliothek von strukturell unterschiedlichen Verbindungen in einer 96-wll-Format bei 10 mM Lager in DMSO angeordnet. Jeder Master Platte wird in 96-well Polypropylen Speicherplatten (Corning) aliquotiert und bei -80 ° C bis zur Verwendung. </li><li> Aluminium Dichtband für 96-Well-Platten (Nunc, Rochester, NY). </li><li> DMSO (Sigma, St. Louis, MO). </li><li> Grundlegende Inkubator, 28,5 ° C (Fisher Scientific). </li><li> Stereomikroskop mit Durchlichtbasis (Leica Microsystems, Bannockburn, IL). </li></ol>

large scale zebrafisch-based in-vivo- small molecule-screen

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Aufgrund ihrer kleinen Größe Embryo, schnelle Entwicklung, Transparenz, Fruchtbarkeit und zahlreichen molekularen, morphologischen und physiologischen Ähnlichkeiten zu den Säugetieren, hat Zebrafisch als leistungsfähige entstanden<em&gt; In vivo</em&gt; Plattform für Phänotyp-basierten Wirkstoff-Bildschirme und chemisch-genetischen Analyse. Hier zeigen wir eine einfache, praktische Methode zur groß angelegten Screening von kleinen Molekülen mit Zebrafisch-Embryos.

Zebrafisch als leistungsfähige entstanden<em&gt; In vivo</em&gt; Plattform für Phänotyp-basierten Wirkstoff-Bildschirme und chemisch-genetischen Analyse. Hier zeigen wir eine einfache, praktische Methode zur groß angelegten Screening von kleinen Molekülen mit Zebrafisch-Embryos.

Large Scale Zebrafisch-Based In-vivo- Small Molecule-Screen

Aufgrund ihrer geringen Embryogröße, ihrer schnellen Entwicklung, ihrer Transparenz, ihrer hohen Fruchtbarkeit sowie zahlreicher molekularer, morphologischer und physiologischer Ähnlichkeiten zu ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments besteht darin, kleine Moleküle zu finden, die spezifisch wichtige Aspekte der embryonalen Entwicklung und Physiologie modulieren. Dies wird erreicht, indem eine große Anzahl befruchteter Eier in 96-Well-Screening-Platten überführt wird, was als zweiter Schritt erfolgt. Anschließend werden Aliquote einer Bibliothek kleiner Moleküle den Embryonen in den 96-Well-Platten zugegeben.Multiwellplatten werden auf Phänotypen untersucht, die durch die kleinen Moleküle hervorgerufen werden. Es werden Ergebnisse erhalten, die zeigen, welche kleinen Moleküle die Entwicklung oder Physiologie von Superfischen gezielt beeinflussen. Hallo, mein Name ist Charles Hong an der medizinischen Fakultät der Vanderbilt University.In unserem Labor führen wir Hochdurchsatz-Chemikalien-Screens mit Zebrafischembryonen durch. Dies ist eine relativ einfache Technik, die breit angepasst werden kann, um neuartige bioaktive Verbindungen zu entdecken. Am Nachmittag vor dem Tag des Chemikalien-Screens richten Sie 10 bis 20 Zebrafisch-Zuchtbecken ein.Platzieren Sie einen Trenner in jeden Behälter und füllen Sie jeden Behälter mit Wasser aus dem Aquakultursystem, wobei ein ausgewachsener männlicher und ein bis zwei ausgewachsene weibliche Zebrafische mithilfe eines Fischnetzes in den inneren Behälter überführt werden. Beschriften Sie in jedem Zuchtbehälter die Behälter und legen Sie am Morgen des Screenings einen Deckel darauf. Entfernen Sie die Trenner aus den Zuchtbehältern und lassen Sie die Zebrafische paaren.Während der nächsten Stunde. Lassen Sie befruchtete Eier durch das Gitter am Boden jedes inneren Behälters fallen. Nach einer Stunde bringen Sie die adulten Seberfische zurück in die dauerhaften Aufbewahrungstanks.Entfernen Sie den inneren Behälter und sammeln Sie die Eier, indem Sie das Wasser aus jedem Zuchtbehälter durch ein Plastikteesieb abgießen. Stellen Sie das Sieb auf eine Petrischale umgedreht auf und spülen Sie es vorsichtig ab, um die Eier in die Petrischale zu spülen. Mit einer Spüllasche, die E3-Medium enthält, sollten alle unbefruchteten Eier, die trüb erscheinen, entfernt werden.Unter Verwendung einer Einweg-Plastikpipette sollte jeder Kreuzungsansatz etwa 200 Embryonen liefern. Anschließend etwa fünf Embryonen in E3-Medium mithilfe einer Glas-Pasteur-Pipette in jedes Loch einer 96-Loch-Platte übertragen. Sobald die Embryonen auf einer 96-Loch-Platte angeordnet sind.Entfernen Sie mithilfe einer 12-Kanal-Pipette so viel wie möglich vom E-drei-Medium aus den Vertiefungen, wobei darauf geachtet werden muss, die Embryonen nicht zu verletzen. Geben Sie anschließend mit der 12-Kanal-Pipette 250 Mikroliter E drei zu.Medium, das 0,5 Mikrogramm pro Milliliter Canamycin enthält, so schnell wie möglich in jede Vertiefung geben, um zu verhindern, dass die Embryonen austrocknen. Die 96-Loch-Platten in einen Inkubator bei 28,5 °C stellen, bis die Embryonen den gewünschten Entwicklungsstadium erreichen, zu dem die Verbindungen zugegeben werden sollen. In diesem Protokoll suchen wir nach Verbindungen, die die frühe embryonale Musterbildung stören, und werden die Embryonen für drei Stunden oder bis bei mehr als 90 % der Embryonen das Stadium der 1000 Zellen erreicht ist, inkubieren, da kleine Molekül-Bibliotheken in der Regel so bereitgestellt werden.In einer 96-Well-Quellplatte, in der jede Verbindung als 10 Millimolar-Stammlösung in DMSO gelagert ist, eine geeignete Anzahl von 96-Well-Platten mit Aliquots kleiner Moleküle etwa 60 Minuten vor Erreichen des gewünschten Entwicklungsstadiums durch die Embryonen auftauen. Notieren Sie die Serien- oder andere Identifikationsnummer der Quellplatten, um Kondensation an den Platten zu minimieren. T fall in eine Trockenkammer mit Trockenmittel.Rechts.Die Platten kurz in einer Tischzentrifuge mit einem Adapter für Mehrwellplatten abspinnen. Die Aluminiumdeckfolie von der Quellplatte mit einer 12-Kanal-Pipette entfernen und die Verbindungen in der Quellplatte mit DMSO auf die gewünschte Konzentration verdünnen. In diesem Protokoll verwenden wir eine Endkonzentration von 0,5 Millimolar und geben 4,75 Mikroliter DMSO hinzu, um die 10-Millimolar-Stammlösung zu verdünnen.Wenn die Embryonen in der 96-Well-Platte das gewünschte Entwicklungsstadium erreicht haben, überführen Sie mit einer 12-Kanal-Pipette 2,5 µL der Verbindungen von den Quellplatten in die Zielplatten, die die Embryonen enthalten. Decken Sie die Platten, die nun die Embryonen und Verbindungen enthalten, mit Deckeln ab und notieren Sie die Identifikationsnummer der Quellplatten auf den Embryonalplatten. Mischen Sie die Platten durch vorsichtiges Schwenken und stellen Sie sie in einen Inkubator bei 28,5 °C.Decken Sie jede Quellplatte mit ungenutzten kleinen Molekülen mit Aluminiumfolie ab, verschließen Sie sie mit Klebeband und lagern Sie sie zur Langzeitkonservierung bei minus 80 Grad Celsius ein. Formulieren Sie vor Durchführung des visuellen Screens ein spezifisches Kriterium für einen Treffer. Beispielsweise könnte bei einem Screen nach kleinen Molekülen, die die Entwicklung von vier Gehirnbereichen hemmen, ein Treffer eine Verbindung sein, die zum Verlust des Vorderhirns führt.Das Fehlen von Augen ist ein einfacher visueller Indikator für den Verlust des Vorderhirns und erfordert keine Fluoreszenzuntersuchung zu den gewünschten Zeitpunkten der Entwicklung. Entfernen Sie die 96-Loch-Platten mit den mit der Substanz behandelten Embryonen aus dem Inkubator und untersuchen Sie jedes Loch unter einem Stereomikroskop, wenn Sie nach kleinen Molekülinhibitoren der Vorderhirnentwicklung screenen. Untersuchen Sie die Platten nach 28 Stunden auf den Verlust des Auges als Marker für die Hemmung der Vorderhirnentwicklung. Notieren Sie die Identität der Platte und die Position des Lochs für jedes Loch, in dem mindestens drei von fünf Embryonen das vorgeschriebene hi-Phänotyp aufweisen. Stellen Sie die 96-Loch-Platte zurück in den Inkubator.Bestätigen Sie erneut den Verlust der Augen und des Vorderhirns nach 48 Stunden. Obwohl die Embryonen kein Vorderhirn besitzen werden, überleben sie mindestens bis zu vier Tage. Bestätigen Sie einen möglichen Treffer erneut, indem Sie die Wirkung der Substanz in mehreren Dosen erneut testen; für jede Dosis werden 10 Embryonen in 0,5 Milliliter E3-Medium in einem 48-Well-Plattenformat getestet.Der Zeitpunkt der Zugabe der Verbindung zur erneuten Prüfung sollte identisch mit dem des ursprünglichen Screenings sein. Ein HIIT wird bestätigt, wenn das hervorgerufene Phänotyp bei der erneuten Prüfung der Verbindung dosisabhängig reproduziert wird. Schließlich wird die hi-Verbindung aus der Datenbank kleiner Moleküle in der chemischen Bibliothek identifiziert.Mithilfe eines auf Zebrafischen basierenden visuellen chemischen Screenings entdeckten wir ein kleines Molekül, das den Hedgehog-Signalweg aufgrund seiner Wirkung auf die Körperachse hemmt. Dieses Bild zeigt Embryonen, die dem Hedgehog-Inhibitor ausgesetzt waren und eine deutliche ventrale Krümmung des Schwanzes aufweisen. Bei 24 Stunden zeigten dieselben Embryonen, die bei 48 Stunden untersucht wurden, weiterhin das ventral gekrümmte Phänotyp. Diese Aufnahme zeigt das mit der Verbindung behandelte Embryo im Vergleich zum Embryo mit einer Hedgehog-Signalweg-Mutation. Sobald diese Technik beherrscht ist, kann eine Person etwa 400 Verbindungen pro Woche innerhalb weniger Stunden screenen. Diese Technik hat zudem den Weg dafür geebnet, dass chemische Biologen Prozesse wie die Zellentwicklung, Zellsignalwege und die embryonale Entwicklung untersuchen können.Bei der Arbeit mit nicht charakterisierten kleinen Molekülen ist es wichtig, angemessene Sicherheitsmaßnahmen zu beachten, wie das Tragen von Laborkitteln und Handschuhen, da diese nicht charakterisierten Moleküle potenziell gefährlich sein könnten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

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Entwicklung von automatisierten Imaging und Analyse für Zebrafisch chemische Bildschirme.

In diesem Artikel werden Zebrafischembryonen für das Screening chemischer Toxizität verwendet. Die chemische Toxizität korreliert mit den Phänotyp-Messwerten. Das Probenprotokoll zeigt einen methodischen Ansatz zur Durchführung des chemischen Toxizitätsscreenings.

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Hier beschrieben ist ein Protokoll zur halbautomatischen Bilderzeugungsgewebespezifischer Fluoreszenz in Zebrafischembryos.

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Ein Handbuch Kleine Molecule Bildschirm Nähern Hochdurch Mit Zebrafischembryonen

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