Name: Umfassende and Kostengünstig Laboratory Überwachung von HIV / AIDS: eine afrikanische Role Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 56 s
Description: Erfahren Sie, wie Flow-Zytometrie zur HIV-Überwachung in Südafrika eingesetzt wird. Diese Methode ermöglicht präzise CD4-Zellzählungen und verbessert die Diagnostik in ressourcenarmen Regionen.

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Besonderer Dank gebührt dem National Health Laboratory Service (NHL) der Republik Südafrika für die nationale Organisation der HIV verwandten flow diagnostischen Dienstleistungen (http: \ \ www.nhls.ac.za und http://www.plgcd4 . net). Die Studien featured haben an der Abteilung für Hämatologie und Molekulare Medizin, Universität Witwatersrand durchgeführt (Johannesburg, Südafrika, unterstützt durch Abteilungsleiter, Professor Wendy Stevens). Die Autoren haben keinerlei Zuschüsse für diese Veröffentlichung von kommerziellen Unternehmen oder die Finanzierung Agenturen erhalten. Die darin geäusserten Meinungen sind diejenigen der Autoren, ohne zwingend die Ansichten der Organe der University of the Witwatersrand oder dem südafrikanischen NHL.

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Die internationale Patentrechte für CD4 hier beschriebenen Methode werden durch die South African NHL und derzeit unter der Lizenz von BCI, Miami, FL, USA statt.

In den letzten Jahren die Liebe angetrieben und gewähren zugewiesenen Programme haben die Einrichtung von einigen hervorragenden klinischen Praktiken in Ressource begrenzten Gebieten der Erde mit hoher HIV-Belastung beigetragen. Die ART-Programme wurden bei der Verringerung der Sterblichkeit erfolgreich und werden nun bei höheren CD4 initiiert zählt 2,3. Es gibt bereits Anzeichen dafür, dass diese neuen Maßnahmen die Ausbreitung der HIV-Infektion 4,5 abnehmen wird, trotz des Fehlens einer HIV-spezifischen Impfstoff. In unserem Video dokumentieren wir, dass bei der Überwachung von Patienten mit ART, können diese Techniken besser fokussiert werden und sich kostengünstiger als die in der täglichen Praxis in westlichen Labors (Liste 1) beobachtet wurden. Solch ein afrikanischer Führung Ansatz kann gut sein, wesentlich für die Verbesserung der Laborleistungen in einer Zeit zu unterstützen, wenn eine HIV-Infektion, mit ART behandelt werden, ist immer eine chronische Erkrankung. Eine solche Überwachung von ART erfordert eine präzise CD4 Zählen und Viruslast verwandte Technologie, eine anspruchsvolle Aufgabe, als sich einfach durchführen CD4-Zählung für die Platzierung von Patienten in beliebige Gruppen, um eine Entscheidung über das Starten Art. 16 zu unterstützen. Mit Hilfe dieser Diagnostik, dh mit dem CD8/CD38 testen, ist es möglich, die VL-Monitorings Kosten in&gt; 60% der Patienten auf ART 16,19 reduzieren. Es ist auch wichtig zu betonen, dass es die CD8/CD38 test 16,17 ist, und nicht die CD4-Zellzahl 37, die wahrscheinlich zu holen frühe Anzeichen von VL Rebounds und / oder das Fehlen von Compliance der Patienten in die Einnahme des Medikamentes ist. Ein wesentliches Element einer koordinierten kostengünstige zentrale Service ist die Verfügbarkeit einer großen nationalen oder regionalen Netzwerk von Experten und wissenschaftlichen Beratern, die mit der technischen und medizinischen Aspekte des Betriebs unterstützt. Dies wird durch die Aktivitäten der südafrikanischen NHL-Netzwerk und die CD4-PLG.net Ausbildungsmaßnahmen 33, 36, die Ermutigung, Bildung und Qualitätsbewertung sorgen für die kleineren Zentren, und diese können auch &quot;Point-of-care&quot;-Dienste unter Beweis gestellt. Wichtig ist, dass die Operationen der mittel-und Point-of-Care-Labors ergänzen. Während erstere hat die doppelte Rolle der Bereitstellung einer kostengünstigen großflächigen Service-Betrieb sowie grundlegende / Weiterbildung für die peripheren Laboratorien 33,38 trägt der letzteren um die Ausbreitung der ART durch die Rekrutierung von HIV + Patienten, die Anspruch auf sind zu überprüfen ART von einer breiteren Basis, einschließlich der ländlichen Kliniken. Hier einige Vorsicht ist notwendig, weil Point-of-Care-Diagnostik kann sehr viel teurer und garantieren nicht automatisch Genauigkeit 38. Es ist daher sinnvoll, die Zwei-Klassen-System beibehalten und die Koordinierung zwischen den beiden Ebenen zu erleichtern, ohne dass entweder arm zu schwinden. Abschließend, im Bereich der diagnostischen Überwachung der klinischen Behandlung von Infektionskrankheiten eine notwendige Kosteneinsparungen können durch apt-Dienste, die weniger teuer und besser koordinierte Einsatz moderner Technologie mit deutlich verbesserter Qualität 13,39 erreicht werden. Gut organisierte nationalen (und regionalen) Diagnose-Service Bestimmungen sollten besser unterstützt von 6-8 durch die Vermeidung eines Szenarios, wenn nahezu alle Zuschüsse auf teure und / oder unerprobten Methoden sobald verschwendet wird, da diese aus den reichen Ländern importiert werden, ohne eine sorgfältige Vor- vorbeugenden konstruktiven Kontrolle. Ebenso sollte eine flexiblere Gestaltung von klinischen Therapiestudien mit der vollen Einbeziehung der lokalen Ärzten und medizinischem Personal zur Reduzierung der unnötig häufigen und / oder zu ehrgeizig Labortests 3 führen. Diese Politik würde noch eine Chance zu einem besseren Ausnutzung des verfügbaren genaue diagnostische Ergebnisse in einer koordinierten klinischen / Labor Beurteilung von Patienten auf ART geben. Diese intelligenten Diagnostik könnte auch für die ressourcenarmen Ländern 8 in den Bereichen Tuberkulose und Leukämien mit einer vorhandenen vertraut durchflusszytometrischen Plattform 40 ist Vorreiter.

umfassende &amp; kostengünstig laboratory Überwachung von hiv / aids: eine afrikanische role model

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Wir präsentieren das Video über die Unterstützung anti-retrovirale Therapie (ART) durch ein apt-Labor-Service - das entspricht einem südafrikanischen Vorbild für wirtschaftliche großem Umfang diagnostische Tests. In den Ländern mit niedrigem Einkommen kostengünstige ART hat die Aussichten für das Überleben von HIV-seropositiven Patienten verwandelt, aber es gibt Zweifel, ob es notwendig ist, für das Labor Überwachung von ART und was kostet es - in Situationen, in denen die allgemeine Qualität der Pathologie Dienstleistungen noch sehr gering sein. Die passende Antwort auf wirtschaftlich solide Leistungen mit einer besseren Koordinierung und strengere interne Qualitätsbewertung als in westlichen Ländern gesehen zu etablieren. Das Video, an der Stelle in den National Health Laboratory Service (NHL-SA) an der Witwatersrand University in Johannesburg, Südafrika, fotografiert bietet so eine koordinierte Regelung Erweiterung der ursprünglichen 2-Farben-CD4-CD45 PanLeucoGating Strategie (PLG). So die sechs Module der Video-Präsentation zeigen die Einfachheit eines 4-Farb-Durchflusszytometrie-Assay zur hämatologischen, immunologischen und virologischen Tests im Zusammenhang in einem einzigen Rohr verbinden. Diese Video-Module sind: (i) die Einrichtung von Instrumenten, (ii) Probenvorbereitung, (iii) Prüfung absolute zählt und Überwachung der Qualität für jede Probe von Bead-Zählrate, (iv) die heamatological CD45 Test für weiße Zelle zählt und Differentiale, (v) die CD4-Zellzahl, und (vi) die Aktivierung von CD8 + T-Zellen durch CD38-Anzeige gemessen wird, eine Viruslast im Zusammenhang Parameter. Die potenziellen Kosten-Einsparungen sind beachtlich. Diese Anordnung ist ein Paradebeispiel für die Machbarkeit der Durchführung&gt; 800-1000 Tests pro Tag mit einer strengeren Qualitätskontrolle als in westlichen Labors angewendet wird, und auch mit einem Transfer von Technologie an andere Labors in einem NHL-SA-Netzwerk. Fachberater-, Labor-Manager und Politiker, die die Pflicht der Entscheidungsfindung über die Einführung moderner Medizintechnik tragen, sind häufig nicht in der Lage, die neusten technischen Details, wie sie in den großen regionalen Labors mit großen Belastungen der Arbeitsbelastung durchgeführt. Daher dieses Video zeigt Details dieser neuen Entwicklungen.

Anti-retrovirale Therapie von HIV / Aids zu behandeln, ist in Südafrika in großem Umfang überwacht. Die Durchflusszytometrie ist für Hämatologie (CD45), Immunologie (CD4) und Viruslast verbunden CD38-Assay kombiniert. Aufgenommen in den NHL-SA Labors, Johannesburg, sind diese modernen Methoden kostengünstig mit erhöhten lokalen internen Qualitätskontrolle, die als Vorbilder für die begrenzten Ressourcen Diagnostik.

Umfassende &amp; Kostengünstig Laboratory Überwachung von HIV / AIDS: eine afrikanische Role Model

Wir präsentieren ein Video über die Unterstützung der antiretroviralen Therapie (ART) durch einen entsprechenden Labordienst, der als südafrikanisches Vorbild für eine wirtschaftliche ...

Der in diesen Assays verwendete monoklonale Antikörper wird als CD vier bezeichnet. Dieses Grundreagenz dient zum Nachweis von ERT-Lymphozyten. Damit wird die Anzahl der CD vier-positiven Lymphozyten im Blut bestimmt, die schrittweise durch HIV zerstört werden.Die Anzahl der CD4-Zellen steht daher in Beziehung zur Immundefizienz des Patienten. Ein weiterer Reagenzstoff, CD45, wird zur Zählung aller weißen Blutkörperchen verwendet, was ebenfalls ein nützlicher Routine-Assay ist. Ein zusätzlicher Test für die sogenannten Aktivierungsmarker verringert die Kosten für Viruslast-Assays, die sehr hoch sein können.Diese Studien wurden an der Whit Waters Rand University in Johannesburg, Südafrika, unter der Leitung von Professor Deborah Glen Cross und Professor Wendy Stevens durchgeführt. Das Ziel dieses Films ist zweifach. Im ersten Teil sehen Sie, wie ein gut ausgestattetes Labor einen CD4-, CD45- und Viruslast-bezogenen Test durchführt.Dies gliedert sich in sechs Module. Diese technischen Schritte werden anschließend in 70 Laboren in ganz Südafrika umgesetzt. Im zweiten Teil wird die Beziehung zwischen einem großen zentralen Labor, das täglich Tausende von Tests durchführt, und den weiter peripheren Laboren, die nahe am Versorgungsort der Patienten liegen, erörtert.Die vorliegende Diskussion konzentriert sich darauf, wie die Behandlung von mehr HIV-infizierten Patienten mit antiretroviralen Arzneimitteln unterstützt werden kann. Mein Name ist Neil Ney. Ich arbeite, ich bin ein Sek.Ich bin ein Technologe für Durchflusszytometrie. Ich arbeite im Allgemeinen Krankenhaus in Johannesburg, Südafrika. Dies ist der Durchflusszytometer.Dazu verwenden wir die Durchflusszytometrie. Beckman hat den Abluftanschluss installiert. Im Grunde funktioniert die Bibliothek im Rhythmus des Abfalls.Wir führen täglich Summen durch, wie beispielsweise die Zellzählung und die Überprüfung des Durchflussmessgeräts. Dazu gehören wöchentliche Aufgaben wie die Archivierung der Ergebnisse sowie monatliche Arbeiten wie die Wartung.Wenn der Reinigungszyklus abgeschlossen ist, initialisieren wir das Gerät. Wir drücken die Starttaste. Wir führen zwei Landstreifen, zwei Klingelröhrchen oder alternativ zwei Prinzipal- und zwei destilliertes Wasserröhrchen durch.Nach Abschluss der gesamten Reinigung führen wir zunächst die Bodenkontrolle durch, um die Laserjustierung zu überprüfen und die Spannung zu überwachen, sodass sichergestellt ist, dass die Spannung konstant bleibt. Falls die Bodenkontrolle morgens durchgeführt wird und fehlschlägt, muss sie erneut versucht werden. Wenn weiterhin Probleme auftreten, müssen wir den Hauptdienst für FA-Emissionen rufen, damit er das Gerät überprüft.da möglicherweise eine fehlerhafte Justierung des Lasers oder der Spannungen vorliegen könnte. Wir führen jeden Morgen Immunversuche, den normalen und den hohen, durch. Sie können mindestens während der achtstündigen Schichtlaufzeit durchgeführt werden.Jetzt führen wir den hochimmunen CHO durch. Ich werde überprüfen, ob unsere Zellzahlen innerhalb der Bereiche liegen. Mein Name ist Denise Dory.Ich bin Laborleiter in der städtischen Laboreinrichtung des Johannesburg Hospitals und übe eine nationale Funktion in diesem Bereich aus. Ich war an der Einrichtung von Verfahren zur Qualitätssicherung beteiligt, um die Genauigkeit und Zuverlässigkeit der CD4-Zellzählung nicht nur in unserem eigenen Labor, sondern auf nationaler Ebene in Südafrika sicherzustellen.Die Vorbereitung von Ping-CD-vier-Proben ist sehr einfach. Wir verwenden zwei monoklonale Antikörper unterschiedlicher Farben, CD vier und CD 45. Diese liegen normalerweise vorgemischt in einer braunen Flasche vor, die beide Antikörper enthält.Zunächst würden wir 10 µL des CD45-CD4-Antikörpers in den Boden eines sauberen Reaktionsgefäßes pipettieren. Im nächsten Schritt wird dann das Blut hinzugefügt. Für diese Methode verwenden wir 100 µL Blut.Es muss genau vorbereitet werden. Anschließend würden das Blut und der Antikörper miteinander vermischt werden. Die letzte Phase dieser Vorbereitung würde das Hinzufügen des Eising-Reagenz erfordern.Und wie Sie sehen können, ändert sich das Blut nach Zugabe des LY-Reagenzes von einer undurchsichtigen Trüblösung zu einer hämolytischen Lösung, durch die hindurch man tatsächlich die Röhre sehen kann. Dies ist eine sehr einfache Methode, die manuell durchgeführt werden kann. Wenn jedoch, wie in den meisten Laboratorien, große Probenvolumina bearbeitet werden, verwendet man ein automatisiertes System wie dieses, das die Probenvorbereitung für Sie übernimmt. Die Vorbereitung muss jedoch nicht unbedingt über ein automatisiertes System erfolgen, wenn man die Beet-Zählrate verwendet, da die Beet-Zählungen – die Beets, die wir hinzufügen – uns anzeigen, ob die Probe korrekt präpariert wurde.Die letzte Stufe, bevor wir diese Probe in einen Analysator geben, besteht darin, hundert Mikroliter der Perlen hinzuzufügen, die in einem röhrenförmigen Behälter wie diesem geliefert werden. Die Probe wäre dann bereit, auf den Durchflusszytometer aufgegeben zu werden. Mein Name ist Sit MoFA, und ich bin der Beauftragte für Qualitätssicherung in diesem Durchflusszytometrielabor, und ich liebe die Durchflusszytometrie.Wir verfügen hier über sehr schöne Geräte, die EPICS-Excels, die äußerst stabil sind. Tatsächlich fügen wir unsere Bits hinzu, die uns ebenfalls die Stabilität der Instrumente anzeigen. Wie überwachen wir also unsere Durchflusszählrate?Eine niedrige Durchflussrate hängt vollständig vom Team ab. Kürzlich haben wir mit der automatisierten Vorbereitung unserer Instrumente und Proben begonnen, doch die Überwachung der Durchflussrate bleibt eine relevante Qualitätskontrolle. Unser Durchflusszähler zeigt diese Gerade, die veranschaulicht, wie ideal die Durchflussrate ist, aber dennoch besteht Handlungsbedarf.Es gibt immer noch einige Ausreißer, die entweder durch Pipettierfehler verursacht sein können. Wenn wir jedoch die Möglichkeit eines Pipettierfehlers ausschließen, können wir unser Instrument darauf überprüfen, ob es ordnungsgemäß funktioniert, und anschließend die Ingenieure rufen, damit sie unser Instrument reparieren, damit es weiter zum Halter gelangen kann. Dies ist Zo ly von Beckman Ter. Er ist unser Techniker.Ich komme jederzeit, wenn ein Problem auftritt, und außerdem komme ich alle sechs Monate zur Wartung, während unsere Proben mithilfe der Instrumente analysiert werden. Als Qualitätsbeauftragter ist es meine Aufgabe, stets diesen Bildschirm zu überprüfen, der unsere Durchflusszählrate überwacht. Sobald ein Ausreißer erscheint, reagiere ich sofort.Ich kann erkennen, dass es einen Ausreißer gibt. Tatsächlich laufen derzeit fünf Geräte, da unsere Arbeitslast äußerst hoch ist, und diese beiden hier zeigen lediglich, dass es sich nicht um die erfassten Proben handelt. Es handelt sich vielmehr um die Messungen, die wir am Ende jedes Carousells durchführen, aber dennoch beobachten wir gelegentlich einige Ausreißer.Beispielsweise dieser hier auf diesem Gerät, dem Epic Excel vier. Dieser muss auf jeden Fall sofort repariert werden, bevor die Ergebnisse aus dem gesamten Karussell herausgesendet werden, und nach dem Zurücksetzen muss er unverzüglich vor der Kalibrierung durchlaufen werden. Zusammenfassend haben wir festgestellt, dass unsere Geräte optimal laufen.Wir haben die Reproduzierbarkeit der Zählung der Partikel überprüft, um sicherzustellen, dass die nachfolgenden CD4-Zählungen genau sind. Wir haben überprüft, ob die Laser an unseren Geräten korrekt ausgerichtet sind, und die Genauigkeit der Zählungen durch die Analyse von zwei Kontrollstufen validiert. Diese Probe enthält keine Zellen, lediglich CD4 und CD45, und ich muss Ihnen erläutern, warum CD45 für unsere Analyse so wichtig ist.CD 45 ist ein Zellmarker, der alle weißen Blutkörperchen in einer Probe markiert. Dies ist für uns in diesem Zusammenhang wichtig, da es uns ermöglicht, die von uns erhaltene Zahl der weißen Blutkörperchen, die mithilfe von CD 45 bestimmt wurde, mit der Anzahl der weißen Blutkörperchen aus einem Vollblutanalysegerät zu vergleichen. Wie Sie an diesen Beispielen hier sehen können, handelt es sich bei diesem Ausdruck um ein vollständiges Blutbild von einem LH 750 Beckman Coulter-Analysator, und wir erkennen eine Anzahl weißer Blutkörperchen von 7,1; im Durchflusszytometer unter Verwendung von CD 45, wobei wir die gesamten weißen Blutkörperchen anfärben.Wir haben eine sehr ähnliche CD-Gewichtszellanzahl von 7.175. Wir würden einen Wert akzeptieren, bei dem die Differenz der Gewichtszellkonsen weniger als 5 % beträgt. Ein weiterer Vorteil der Einbeziehung von CD45 ist die differenzielle Färbung von CD45 auf weißen Blutkörperchen. Am Durchflusszytometer können wir drei Parameter nutzen: Streuung, Vorwärtsstreuung und CD45.Wenn wir uns dieses Histogramm hier ansehen, sind die Lymphozyten eindeutig abgegrenzt. Sie färben sich in der Regel am intensivsten mit CD 45 und weisen die geringste Komplexität auf, sind also die einfachsten Zellen und zeigen die stärkste Expression von CD 45. Die nächste Zellgruppe sind unsere Monozyten.Unsere Monozyten weisen etwas weniger CD45-Expression auf, sind jedoch komplexer als die Lymphozyten. Danach folgt die nächste größere Zellgruppe, die in einer normalen Probe die größte Zellpopulation darstellt, nämlich unsere granulären Zellen. Diese Populationen sind die häufigsten im peripheren Blut vorkommenden Blutzellen.Der Vorteil der Verwendung der CD45-Färbung am Durchflusszytometer besteht darin, dass wir eine CD4-Zählung, eine absolute Leukozytenzählung und eine automatisierte Differenzialzählung am Durchflusszytometer durchführen können. Die CD45-Färbung ermöglicht es uns, Differenzialzählungen über längere Zeiträume hinweg durchzuführen.Wir können sie bis zu 48 Stunden durchführen. Wenn wir die Expression von CD45 verwenden, sind die Differenzialzählungen mit dieser Methode weniger objektiv als bei anderen Methoden.Beispielsweise lässt sich mithilfe des Goldstandards der manuellen Differenzialblutbildauszählung eine leukämische Population nachweisen, und dieser bildet außerdem die Grundlage für das hier auf dem Bildschirm gezeigte Pan-Lubrikations-CD. Der Vorteil der CD45-Expression auf weißen Blutkörperchen wurde im Bereich der Hämatologie bisher noch nicht vollständig genutzt. Wir verfügen über eine Vielzahl unterschiedlicher Vollblutzählanalysatoren, die verschiedene Techniken zur Ermittlung der weißen Zell-Differenzialzählung verwenden.CD45 auf einem Boden verwenden. Ein Cytometer wäre eine hervorragende Möglichkeit, die Differenzierung von Kegeln zwischen verschiedenen Hämatologie-Analysatoren zu standardisieren, da es eine Methode wäre, mit der alle anderen Hämatologie-Analysatoren verglichen werden könnten. Hallo, mein Name ist Dr. Linda Sier.Ich bin aktiv in die HIV-Forschung eingebunden, die sowohl CD-vier- als auch CD-acht-Tests umfasst. T-Lymphozyten können in CD-vier-positive Zellen und CD-acht-positive Zellen unterteilt werden, wobei CD-vier-positive Zellen zur Überwachung von HIV bei behandelten Patienten verwendet werden. Das Problem mit CD-vier ist jedoch, dass es nicht ausschließlich auf Lymphozyten exprimiert wird, sondern auch auf anderen Zellen CD-vier vorkommt.Im PLG-Protokoll betrachten wir drei verschiedene Aspekte zur effektiven Unterscheidung zwischen Ihren Monozyten und Ihren Lymphozyten. Zunächst nutzen wir die Komplexität oder Granularität, anhand derer Sie erkennen können, dass sich Ihre Lymphozyten und Monozyten für diesen Zweck unterscheiden lassen. Außerdem verwenden wir CD 45 C, mit dem Sie Ihre Lymphozytenpopulation von Ihrer Monocytenpopulation unterscheiden können.CD4 wird stark auf Ihren Lymphozyten und intermediär auf Monozyten exprimiert, was zusammen mit der Komplexität verwendet wird. Es ist recht einfach, zwischen den CD4-starken Lymphozyten und den CD4-schwach exprimierenden Monozyten zu unterscheiden, und ich werde Ihnen ein Beispiel einer Probe von einem gesunden Patienten zeigen, bei dem Sie die Lymphozyten und Monozyten erkennen können; dieser Patient hatte eine CD4-Zahl von über 700. Wenn wir uns eine Probe von einem Patienten mit einer CD4-Zahl von 53 ansehen, können Sie erkennen, dass trotz der niedrigen CD4-Zahl die Unterscheidung zwischen den CD4-positiven Lymphozyten und den CD4-positiven Monozyten weiterhin sehr deutlich ist.Mithilfe der PLG-Methode können wir täglich eine große Anzahl von Analysen durchführen. In unserem Labor führen wir derzeit täglich etwa tausend Proben durch, was wöchentlich rund 5.000 Proben entspricht. Die Arbeitsmenge von zwei Wochen entspricht ungefähr der Menge, die in einem ganzen Jahr erledigt wird.In einem Londoner Krankenhaus in Südafrika verfügen wir über 70 NNRS-Labore, in denen über einen Zeitraum von einem Jahr ungefähr 1,98 Millionen CD4-Tests pro Jahr durchgeführt werden. Hallo, ich bin Kni. Ich mache gerade meine Teepause, aber sobald ich fertig bin, werde ich Ihnen über CD38 und die Viruslast berichten.Grundsätzlich wissen wir alle, dass Durchflusszytometer Zellen zählen können, aber sie können auch die Anzahl der Oberflächenmoleküle erfassen, also Moleküle auf der Zelloberfläche. Dies erfolgt durch die Messung der Fluoreszenzintensität. Unter den zuvor erwähnten Standardbedingungen verwenden wir CD4 und 45, bekannt als die PLG-Methode.Wir gehen einen Schritt weiter, indem wir zwei Tests in ein einziges Reagenzglas geben. Benennen Sie die CD 4 45 PLG-Testmethode. Wir werden diese mit einem zweifarbigen Test für einen Aktivierungsmarker oder einen anderen mit der Viruslast verknüpften Parameter kombinieren, nämlich CD 38.Die Amerikaner verwenden die vierfarbige Immunfluoreszenz. Sie nutzen CD4, CD45, CD8 und CD3. Wir verwenden CD4, CD45, CD8 und ersetzen CD3 durch den Einsatz von CD38.Zunächst ist es wichtig zu beachten, dass für einen Patienten eine Baseline-CD38 bestimmt werden muss, da die Baseline-38 als Kontrolle für diesen bestimmten Patienten dient. Und das ist der Fall, wenn die Viruslast hoch ist, nicht wahr? Ja. Und das ist der Fall, wenn ein Patient mit hoher Viruslast und niedriger CD4-Zahl eintritt. Das ist zu Beginn vor der Therapie.Wir müssen außerdem auf CD38-Ausschläge achten, bei denen ein Anstieg von CD38 auftritt. Dies ist bei diesem hier gezeigten Patienten ersichtlich, bei dem ein plötzlicher Anstieg des CD38-MFI zu verzeichnen ist; wenn man genau hinsieht, zeigt sich auch ein entsprechender Anstieg der Viruslast. Besteht die Möglichkeit, dass der Patient zu diesem Zeitpunkt die Medikamente nicht eingenommen hat?An diesem Punkt ist es tatsächlich möglich, dass der Patient die Therapie abgesetzt hat, weil die Werte wieder normal sind. Warum sind wir dann so zufrieden mit diesem Test? Erstens kombiniert er zwei Testmethoden in einem Reagenzglas.Zweitens ist es kosteneffektiv, da es uns eine CD45-Leukozytenzahl, eine CD4-Zahl sowie ein Aktivierungsmarker liefert. Es wird auf den Geräten eingesetzt, die sich derzeit in unseren Laboren befinden, sodass keine neuen Geräte benötigt werden und das Personal leicht darin geschult werden kann, wie diese Proben präpariert und gemessen werden. Auch die Kosten für die Viruslastbestimmung werden sinken, da derzeit bei jedem Patienten, der zur CD4-Zählung kommt, zusätzlich eine Viruslastbestimmung durchgeführt wird.Doch wenn wir die CD38 überwachen und eine Zunahme des 38-MFI feststellen, können wir die Proben der Patienten erst dann zur Viruslastuntersuchung schicken. Bezüglich der Leistung unseres südafrikanischen nationalen Programms, des NHLE-CD4-Programms, das PLG verwendet und bei dem wir unsere Labore stark unterstützen, verfügen wir über eine zentrale Einrichtung, die alle standardisierten Verfahren sowie die Qualitätskontrolle koordiniert, die an die entfernten Labore dezentralisiert ist.Sie betreiben ihr System und berichten über EQA über unsere Africas zurück an die zentrale Laboreinrichtung, die durch Unterstützung des zentralen Labors erfolgt. Zusätzlich gibt es laufende Schulungsmaßnahmen und Supportdienstleistungen. Und unser Programm als Gruppe schneidet deutlich besser ab als andere nationale Programme, und zwar erheblich – beispielsweise um mehr als 50 % hinsichtlich der Präzision, und das nicht nur innerhalb von Laboren, sondern auch zwischen Laboren.Das bedeutet, dass beispielsweise ein CD4 aus einem Labor in Berkeley sehr ähnlich sein wird zu einem CD4 aus einem Labor in Durban, wenn wir unsere standardisierte Oberfläche verwenden. Sie übertragen also dieses Konzept und dezentralisieren es in die Patientennahe. Zweitens bedeutet dies, dass die Patientennahe durch eine zentrale Koordinierungseinheit erleichtert wird.Es war offensichtlich, dass diese Bemühungen, die von diesen engagierten Personen gezeigt wurden, konzeptionelle Fortschritte darstellen, nicht nur einen Schritt zurück zu einem Viertel-Flow-Cytometer, das diese Ergebnisse liefern kann. Dieselben Konzepte können mit anderen Geräten wie Ton-Dickinson-Geräten oder Partec-Geräten oder solchen von Accur oder einem anderen Unternehmen verwendet werden. Tatsächlich zeigen jüngste Entwicklungen aus anderen Ländern, beispielsweise Indien, dass sie ihre eigene Durchflusszytometrie-Industrie aufbauen sollten, die dieselbe Technologie nutzen würde.Das einzige wichtige Thema hier war die außergewöhnliche Koordination. Nun irren sich jene Personen, die meinen, dass CD4-Zählungen die einzigen Ziele seien, denn hier hatten wir es mit Gesamtblutbildern, absoluten Zahlen und Differenzialblutbildern zu tun. Wir arbeiteten mit CD4 und auch mit Aktivierungsmarkern, wodurch die Assays kostengünstiger sind als vergleichbare Viruslast-Assays.Trotzdem handelt es sich hierbei nicht um einen Wettbewerb zwischen diesen Aktivierungsmarkern und der Viruslast, sondern um eine komplementäre Lösung, die Kosten für die Viruslastbestimmungen einspart. Es handelt sich um wissenschaftlich anerkannte Untersuchungen, und die Ärzte sollten auf diese Tests zurückgreifen, wenn die Therapieadhärenz des Patienten fraglich ist, wenn die Wirksamkeit der Medikamente in Frage steht oder wenn ein Therapiewechsel notwendig wird, weil der Patient beginnt, eine Resistenz zu entwickeln. Die wesentliche Schlussfolgerung war die nunmehr gute Qualitätssicherung, was uns zum letzten Punkt führt, nämlich, dass es weitaus besser ist, exzellente zentrale Labore zu haben, die dann Durchflusszytometrie und Qualitätssicherung für die peripheren Labore bereitstellen können, sodass die peripheren Labore in der Lage sind, mehr Menschen in die antiretrovirale Therapie einzubinden.Wir beobachten hier also eine neue Entwicklung, die aus afrikanischem Boden hervorgeht. Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

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