Name: In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E16 Rattenembryonen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: Erfahren Sie die intrauterine intraventrikuläre Injektion und Elektroporation bei E16-Rattenembryonen. Diese Methode ermöglicht genetische Manipulationen für Studien zur Entwicklungsneurobiologie.

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in utero intraventrikuläre injektion und elektroporation von e16 rattenembryonen

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

In-utero in-vivo-Injektion und Elektroporation von embryonalen Ratten Neocortex ist ein leistungsstarkes Tool für die Manipulation von einzelnen Vorfahren an den Wänden der Seitenventrikel. Diese Technik ist mittlerweile weit verbreitet, um die Prozesse in Kortikogenese durch Überexpression oder umzuwerfen Gene und beobachten die Auswirkungen auf die zelluläre Proliferation, Migration und Differenzierung beteiligt zu studieren. Im Vergleich zu traditionellen Ko-Strategien, bietet in-utero Elektroporation eine schnelle Mittel, um eine Population von Zellen in einem bestimmten Zeitfenster zu manipulieren. In diesem Video-Protokoll, skizzieren wir die experimentelle Methodik zur Vorbereitung Ratten für eine Operation, Freilegung der Uterushörner durch laporatomy, Injektion von DNA in die Seitenventrikel des sich entwickelnden Embryos, Elektroporation von DNA in den Vorläuferzellen entlang der Seitenwand und Pflege von Tieren nach Chirurgie. Unser Labor nutzt dieses Protokoll für Operationen auf E15-E21 Ratten, aber es ist am häufigsten bei E16 durchgeführt, wie in diesem Video gezeigt.

In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E16 Rattenembryonen

Die In-utero-In-vivo-Injektion und Elektroporation des embryonalen Neocortex der Ratte stellt ein leistungsfähiges Instrument zur Manipulation einzelner Progenitorzellen dar ...

Hallo, mein Name ist William Ti. Ich komme aus dem Arnold Creek Stein-Labor. Heute werden ich und andere Ihnen die intrauterine Injektion von E16-Rattenembryonen zeigen. Hallo, mein Name ist Laura Elias.Heute werde ich Ihnen zeigen, wie man die Mikroinjektionspipetten vorbereitet und belädt, um die intraventrikulären Injektionen und Elektroporationen durchzuführen, die wir heute vornehmen werden. Ich werde außerdem zeigen, wie man intraventrikuläre Injektionen und Elektroporationen an E16-Rattenembryonen durchführt. In-utero-Injektionen und Elektroporationen an der Ratte sind besonders nützlich, da die Ratte ein System darstellt, bei dem genetische Modifikationen nur schwer durchführbar sind.OK, es gibt eine Reihe chirurgischer Instrumente, die wir für diesen Eingriff verwenden. Wir benutzen einen Freer, ein paar Adson-Zangen, ein Paar mit Riffelung und ein weiteres Paar mit einem kleinen Zahn an der Spitze. Außerdem verwenden wir ein Paar Hämostatiken.Dies ist eine Schere, und dann verwenden wir diese beiden Hefter. Dies ist der größere, den wir für Ratten verwenden. Dies ist der kleinere, den wir für Mäuse verwenden, der einen sieben Millimeter großen Heftstapel verwendet, und di

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Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E15 muriner Embryonen

In utero Elektroporation ist eine wertvolle Methode zur Transfektion von neuronalen Vorläuferzellen in vivo. Abhängig von der Platzierung der Elektroden und der Entwicklungspsychologie Zeitpunkt der Elektroporation können bestimmte Teilmengen von kortikalen Zellen ausgerichtet werden. Gezielte Zellen können dann in vivo oder in vitro für die Auswirkungen der genetischen Veränderung untersucht werden.

In utero Elektroporation gefolgt von primären neuronalen Kultur für ein Studium Gene Function in Subset von kortikalen Neuronen

In utero Elektroporation ermöglicht eine schnelle Gentransfer in eine räumlich-und zeitlich kontrollierten Art und Weise in den Entwicklungsländern das zentrale Nervensystem (ZNS). Hier beschreiben wir eine sehr anpassungsfähig in utero Elektroporation Protokoll, mit dem Ausdruck Konstrukte in mehreren embryonalen ZNS-Domänen, einschließlich der Telencephalon, Diencephalon und der Netzhaut liefern können.

Effiziente Gene Lieferung in mehrere ZNS Territories mit In Utero Elektroporation

Diese Studie beschreibt die Entwicklung...

In-vitro-Elektroporation von der Unteren Rhombischer Lip von der Schwangerschaft ab muriner Embryonen

Steuern der Expansion von somatischen Stammzellen ist ein Hauptfaktor, was ihrer Studie und therapeutischen Verwendung. Hier beschreiben wir ein System zur zeitlich steuern Nervenstammzellen Expansion während der Entwicklung und im Erwachsenenalter, die verwendet werden, um die Zahl der Neuronen im Gehirn der Maus erzeugt erhöhen kann.

Erweiterung der embryonalen und adulten neuralen Stammzellen<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporation oder Viral stereotaktische Injektion

Quelle: Koza, P., et al. Erzeugung transgener Ratten mittels eines lentiviralen Vektoransatzes. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video demonstriert die mikroinjektionsgestützte Applikation von lentiviralen Vektoren in befruchtete Rattenembryonen zur Erzielung stabiler Transgenintegration für die Erzeugung transgener Ratten.

Lentiviral-Vektor-basierte Transduktion von befruchteten Rattenembryonen

Dieses Video zeigt die Abgabe von Plasmid-DNA in zerebelläre neuronale Zellen von Mausembryonen mittels in utero-Elektroporation. Diese Methode ist nützlich, um die in vivo Funktion von Genen bei der normalen Gehirnentwicklung und die Veränderungen in der Genexpression von Neuronenzellen während der Tumorprogression zu verstehen.

In utero Elektroporation basierte Genabgabe: Eine Technik zur Injektion von Plasmid-DNA in embryonale Kleinhirnzellen von Mausembryonen

Gene bei der Entwicklung des Kortex oder des Hippokampus von Ratten über in utero Elektroporation (IUE) an E16 manipuliert werden, um eine schnelle und gezielte Modifikationen der neuronalen Verbindungen für spätere Untersuchungen des Verhaltens oder der Neuropathologie in erwachsenen Tieren ermöglichen. Postnatale in-vivo-Bildgebung für die Kontrolle der IUE Erfolg durch Biolumineszenz der Aktivierung co-transfizierten Luciferase durchgeführt.

Erzeugung von Aktuell transgenen Ratten durch<em&gt; In utero</em&gt; Elektroporation und<em&gt; In-vivo-</em&gt; Biolumineszenz Screening

Dieses Protokoll beschreibt im Detail, wie verschiedene Regionen im Zentralnervensystem C57BL/6 mittels in utero-Elektroporation spezifisch transfiziert werden. In diesem Protokoll sind detaillierte Anweisungen für Transfektionen von Regionen enthalten, die sich zum Kortex, Hippocampus, Thalamus, Hypothalamus, Nucleus lateralis septum lateralis und Striatum entwickeln.

Cortex, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus, Lateral Septal Nucleus- und Striatum spezifische<em&gt; In Utero</em&gt; Electroporation in der C57BL / 6-Maus,

Periventrikulären noduläre Heterotopie (PNH) ist die häufigste Form der Fehlbildung der kortikalen Entwicklung (MCD) im Erwachsenenalter, aber seine genetische Basis bleibt bei den sporadischen Fällen unbekannt. Vor kurzem haben wir eine Strategie, um neue Kandidatengene für MCDs zu identifizieren und direkt ihre ursächliche Rolle in Vivobestätigen.

Eine neuartige Strategie verbindet Array-CGH, ganze Exome Sequenzierung und In Utero Elektroporation bei Nagetieren verursachenden Gene für Hirnfehlbildungen identifizieren

Erfahren Sie die intrauterine intraventrikuläre Injektion und Elektroporation bei E16-Rattenembryonen. Diese Methode ermöglicht genetische Manipulationen für Studien zur Entwicklungsneurobiologie.

In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E16 Rattenembryonen

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