Name: In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E15 muriner Embryonen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 17 s
Description: Lernen Sie die Methode der intrauterinen Injektion und Elektroporation in E15-Mausembryonen zur gezielten Manipulation neuronaler Gewebe. Diese Technik ermöglicht die Einführung von Plasmid-DNA in die Seitenventrikel für Entwicklungsbiologie-Studien.

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in utero intraventrikuläre injektion und elektroporation von e15 muriner embryonen

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In-utero in-vivo-Injektion und Elektroporation von embryonalen Maus Neocortex ist ein leistungsstarkes Tool für die Manipulation von einzelnen Vorfahren an den Wänden der Seitenventrikel. Diese Technik ist mittlerweile weit verbreitet, um die Prozesse in Kortikogenese durch Überexpression oder umzuwerfen Gene und beobachten die Auswirkungen auf die zelluläre Proliferation, Migration und Differenzierung beteiligt zu studieren. Im Vergleich zu traditionellen Ko-Strategien, bietet in-utero Elektroporation eine schnelle Mittel, um eine Population von Zellen in einem bestimmten Zeitfenster zu manipulieren. In diesem Video-Protokoll beschreiben wir die experimentelle Methodik zur Vorbereitung Mäuse für Chirurgie, Freilegung der Uterushörner durch laporatomy, Injektion von DNA in die Seitenventrikel des sich entwickelnden Embryos, Elektroporation von DNA in den Vorläuferzellen entlang der Seitenwand und Pflege von Tieren nach der Operation . Unser Labor nutzt dieses Protokoll für Operationen auf E13-E16-Mäuse, ist es jedoch am häufigsten bei E15 durchgeführt, wie in diesem Video gezeigt.

In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E15 muriner Embryonen

Die In-utero-In-vivo-Injektion und Elektroporation des embryonalen Neokortex der Maus stellt ein leistungsfähiges Instrument zur Manipulation einzelner Vorläuferzellen dar ...

Hallo, ich bin William Tis aus dem Krete-Labor. Heute werden ich und andere Ihnen intrauterine Injektionen an E15-Maus-Embryonen demonstrieren. Hallo, mein Name ist Laura Elias.Heute werde ich Ihnen zeigen, wie man die Mikroinjektionspipetten vorbereitet und belädt, um die intraventrikulären Injektionen und Elektroporationen durchzuführen, die wir durchführen werden. Mein Name ist David Castaneda, und heute werde ich bei in-vivo-in-utero-Injektionen an Mausembryonen assistieren. Wir werden Plasmid-DNA in das Seitenventrikel von sich entwickelnden Mausembryonen injizieren.Wir zielen auf die CE-Rinde dieser Embryonen ab, um die Expression verschiedener Moleküle durch Gliazellen zu erzielen, die später in der Entwicklung zu Neuronen werden. Bei diesen intrauterinen Injektionen benötigen Sie einige wichtige Werkzeuge, die ich Ihnen nun zeigen werde. Wir verwenden einen Freer-Haken und ein paar Adson-Stopfer.Eine, ein Paar mit Sägezahnkante und ein weiteres Paar, das am Ende einen kleinen Zahn aufweist. Wir verwenden ein Paar anatomische Pinzetten. Dies ist ein Paar Scheren.Und dann verwenden wir diese beiden Klammernvorrichtungen. Dies ist die größere, die wir für Ratten verwenden. Die

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e15-mouse

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E16 Rattenembryonen

In utero Überleben Chirurgie in Mäusen ermöglicht die molekulare Manipulation der Genexpression während der Entwicklung. Hier beschreiben wir den Einsatz von Hochfrequenz-Ultraschall-Bildgebung, um die Injektion von retroviralen Vektoren in Gehirn der Maus am Embryonaltag (E) 9,5 führen.

Ultraschall-gesteuerte Mikroinjektion in der Maus Vorderhirnneuronen In Utero In E9.5

In utero Elektroporation ermöglicht eine schnelle Gentransfer in eine räumlich-und zeitlich kontrollierten Art und Weise in den Entwicklungsländern das zentrale Nervensystem (ZNS). Hier beschreiben wir eine sehr anpassungsfähig in utero Elektroporation Protokoll, mit dem Ausdruck Konstrukte in mehreren embryonalen ZNS-Domänen, einschließlich der Telencephalon, Diencephalon und der Netzhaut liefern können.

Effiziente Gene Lieferung in mehrere ZNS Territories mit In Utero Elektroporation

Ein Gentransfer-Methode in den Entwicklungsländern Gehirn der Maus ist mit einer einzigartigen chirurgischen Verfahren und spezielle Form der Elektroden beschrieben. Diese einzigartige Technik erlaubt die Transfektion von Plasmid-DNA zeitlich und räumlich, was viele Neurowissenschaftler in das Studium der Entwicklung des Gehirns wird die Beihilfe.

Maus in Utero Elektroporation: Kontrollierte Spatiotemporal Gene Transefection

Steuern der Expansion von somatischen Stammzellen ist ein Hauptfaktor, was ihrer Studie und therapeutischen Verwendung. Hier beschreiben wir ein System zur zeitlich steuern Nervenstammzellen Expansion während der Entwicklung und im Erwachsenenalter, die verwendet werden, um die Zahl der Neuronen im Gehirn der Maus erzeugt erhöhen kann.

Erweiterung der embryonalen und adulten neuralen Stammzellen<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporation oder Viral stereotaktische Injektion

Dieses Video zeigt die Abgabe von Plasmid-DNA in zerebelläre neuronale Zellen von Mausembryonen mittels in utero-Elektroporation. Diese Methode ist nützlich, um die in vivo Funktion von Genen bei der normalen Gehirnentwicklung und die Veränderungen in der Genexpression von Neuronenzellen während der Tumorprogression zu verstehen.

In utero Elektroporation basierte Genabgabe: Eine Technik zur Injektion von Plasmid-DNA in embryonale Kleinhirnzellen von Mausembryonen

Trotz der funktionalen und medizinische Bedeutung des...

Genetische Manipulation der Maus entwickeln Hypothalamus durch<em&gt; In utero</em&gt; Elektroporation

Dieses Protokoll beschreibt im Detail, wie verschiedene Regionen im Zentralnervensystem C57BL/6 mittels in utero-Elektroporation spezifisch transfiziert werden. In diesem Protokoll sind detaillierte Anweisungen für Transfektionen von Regionen enthalten, die sich zum Kortex, Hippocampus, Thalamus, Hypothalamus, Nucleus lateralis septum lateralis und Striatum entwickeln.

Cortex, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus, Lateral Septal Nucleus- und Striatum spezifische<em&gt; In Utero</em&gt; Electroporation in der C57BL / 6-Maus,

Die doppelte Utero-Elektroporation ermöglicht die Ausrichtung auf Zellpopulationen, die räumlich und zeitlich getrennt sind. Diese Technik ist nützlich, um Wechselwirkungen zwischen diesen Zellpopulationen mit fluoreszierenden Proteinen unter normalen Bedingungen, aber auch nach funktionellen Experimenten zu visualisieren, um Gene von Interesse zu stören.

Double In Utero Elektroporation, um zeitlich und räumlich getrennte Zellpopulationen anzuvisieren

In diesem Protokoll beschreiben wir, wie die Amnionhöhle der Maus bei E7.5 mit Lentivirus injiziert wird, was zu einer gleichmäßigen Transduktion der gesamten Neuralplatte führt, mit minimalen nachteiligen Auswirkungen auf das Überleben oder die Embryonalentwicklung.

Murine Neural Plate Targeting by In Utero Nano-Injection (NEPTUNE) at Embryonic Day 7.5

Lernen Sie die Methode der intrauterinen Injektion und Elektroporation in E15-Mausembryonen zur gezielten Manipulation neuronaler Gewebe. Diese Technik ermöglicht die Einführung von Plasmid-DNA in die Seitenventrikel für Entwicklungsbiologie-Studien.

In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E15 muriner Embryonen

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