Name: Fare Tails Genomik DNA izolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Öğrenin fare yavrusu kuyruk biyopsisi ile genomik DNA izolasyonu yöntemini. Bu teknik, genetik analiz için bireysel fareleri tanımlamada ve çapraz kontaminasyonu önlemede kritik öneme sahiptir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style="margin-top: 0in"><li> Kuyruk parçaları (3mm) ve işareti kulakları kesin. </li><li> 720 m l STE ve 30 m l Proteinaz K (10 mg / ml stok) ekleyin. </li><li> 55 inkübe ° C ısıtma bloğu ve vorteks her saat 3 saat için 10 saniye boyunca en yüksek hızda. </li><li> 70 ° C&#39;de 5 dakika proteinaz K inaktive. </li><li> 5 dakika boyunca buz üzerinde Quench. </li><li> Tam hızda 10 dakika kuyruk DNA santrifüjleyin. </li><li> 720 m l Isopropanol içeren yeni bir tüp içine süzün . &nbsp; </li><li> Çökelme DNA tersini tüp veya vorteks. </li><li> 5 dakika tam hızda DNA aşağı spin. Süpernatantı. </li><li> Pelet% 70 etanol ile yıkayın. </li><li> Genomik DNA 5 dakika tam hızda dönerler. Süpernatantı. </li><li> DNA 1-2 dakika kurumasını bekleyin. </li><li> Pelet boyutuna bağlı olarak 100-200 m l DNA süspanse edin. </li><li> Yeri tüp 55 ° C &#39;de 1 saat süreyle DNA çözülme kolaylaştırmak. &nbsp; </li></ol>

<table><tbody><tr><td>STE</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / H2O içinde</td></tr><tr><td>TE</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl</td></tr></tbody></table>

fare tails genomik dna izolasyonu

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

Fare Tails Genomik DNA izolasyonu

Burada 10 günlük bir fare yavrusu var; kuyruk biyopsisi yapacağım ve ardından kuyruğundan genomik DNA ekstraksiyonu gerçekleştireceğim. İşlem olarak, kuyruğun ucundan yaklaşık üç milimetre kadar küçük bir parça keseceğim, ardından bu kuyruk parçasını bir Eppendorf tüpüne yerleştirip tüpü kuru buz üzerine koyacağım. Bir fareden diğerine kontaminasyonu önlemek için, genellikle jilet üzerinde son kesimi yaptığım yeri işaretlerim.Böylece bir sonraki fare için, bir sonraki kuyruk biyopsisini alırken temiz bir jilet parçası kullandığımdan emin olacağım. Yumatanızdaki farklı fareleri birbirinden ayırt etmek için fareleri tanımlamanın bir yoluna ihtiyacınız olacak. Bunun bir yolu, burada gösterilen bir kulak delici kullanarak kulaklarına delik açmaktır.Fareyi, göründüğü gibi ensesinden nazikçe tutun, ters çevirin ve kuyruğunu parmaklarınızla sıkıştırın. Diğer elinizle kulak delme aletini alın ve farenin kulağında hızlıca bir kesik oluşturun. Bunun ne kadar ağrısız olduğunu gördünüz mü?Tamam, şimdi bu Eppendorf tüplerinde bazı kuyruk parçaları olduğunu görebilirsiniz ve şimdi bunların sindirilmesine yardımcı olacak solüsyonları ekleyeceğim. İlk olarak 720 µL STE solüsyonu ekleyeceğim ve ard

isolation-of-genomic-dna-from-mouse-tails

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Doku sindirim ve PCR okuma da dahil olmak üzere bir fare kuyruğu örnek tam genotipleme, bir ve bir buçuk saat Sigma'nın SYBR Green Özü-N-Amp Doku PCR kiti kullanılarak yapılır.

Sigma&#39;nın Özü-N-Amp Doku PCR Kit kullanarak Fare Doku hızlı Genotiplendirme

Biz fare embriyonik doku doku-spesifik gen ekspresyonu başlangıcı sırasında veya sonrasında doku spesifik genlerin faktör etkileşimleri belirlemek için yöntem bir kromatin immunoprecipitation (ChIP) göstermektedir. Bu protokol, normal embriyonik gelişim sırasında ortaya çıkan doku-spesifik gen aktivasyon çalışması için yaygın olarak uygulanabilir olmalıdır.

Erken evre Fare Embriyolar kullanarak Doku özel Genler Kromatin Immunoprecipitation Testi

Biz Amerikan pika gösterildiği gibi, verimli bir şekilde zor küçük memeliler saç örnekleri toplamak için bir non-invaziv örnekleme yaklaşımı sunuyoruz. Biz örneklenmiş saç DNA açılan ve yaban hayatı ekolojisi ve korunması çalışmalarında yaygın olarak kullanılan moleküler belirteçler çeşitli yükseltme bu yöntemin yararını göstermektedir.

Elusive Küçük Memeliler Yüksek Kalite DNA Edinme Noninvaziv Saç Örnekleme Tekniği

Bu videoda, periferik kanı toplamak için bir fare modelinde kuyruk kesme prosedürünü gösteriyoruz. Toplanan kan daha sonra daha ileri deneyler için kullanılabilecek ayrı plazma için santrifüjlemeye tabi tutulur.

Periferik Kan Alma ve Plazma İzolasyonu için Bir Fare Kuyruğu Snip Prosedürü

Bu kulak ve farelerin kuyrukları primer fibroblastlar üretilmesi için basit ve hızlı bir deney prosedürü tarif etmektedir. Prosedür özel hayvan eğitim gerektirmeyen ve 10 gün oda sıcaklığında saklanan kulaklardan fibroblast kültürlerin üretimi için de kullanılabilir.

Fare Kulak ve Kuyruk Dokular Yaratma İlköğretim Fibroblast Kültürleri

Fare oositlerinin mikroenjeksiyonu hem klasik transgenezis ( yani, transgenlerin rastgele bütünleşmesi) hem de CRISPR aracılı gen hedeflemesi için yaygın olarak kullanılır. Bu protokol, kalite kontrolü ve genotiplendirme stratejileri üzerinde özel bir vurguyla mikroenjeksiyondaki en son gelişmeleri gözden geçiriyor.

Oositlerin Mikroenjeksiyonu ile Genetiği Değiştirilmiş Farelerin Üretilmesi

Biz Lambda seçin CII mutasyon tahlil transgenik kemirgenler kültürlü hücrelerdeki veya faiz kimyasal/fiziksel ajanı ile tedavi karşılık gelen hayvanlar için detaylı bir protokol tanımlamak. Bu yaklaşım yaygın kanserojen memeli hücreleri, mutagenisitesinin test etmek için kullanılmıştır.

Lambda seçin CII mutasyon tespit sistemi

Burada, hızlı bir şekilde yüksek kaliteli çekirdekleri aşağı akım kitlesel paralel RNA sıralama için taze veya dondurulmuş dokusundan izole etmek için bir iletişim kuralı mevcut. İkisi de çekirdek yalıtımı için kullanılan deterjan-mekanik ve mekanik hipotonik doku bozulma ve hücre lizis seçenekleri, içerir.

Yetişkin omurilik çekirdeği yalıtım kitlesel paralel tek-çekirdek RNA sıralama için

Mevcut protokol, Gja1'de tam uzunlukta Connexin43 jenerasyonunu koruyan, ancak daha küçük GJA1-20k dahili olarak çevrilmiş izoformun translasyonunu önleyen tek bir M213L mutasyonunu tanımlamaktadır.

Tam Boy Proteinin İfadesini Korurken mRNA'dan Bir İç Translasyonel Başlangıç Bölgesinin Çıkarılması

Bu protokol, otoimmün hastalığın gelişimi sırasında murin bağırsak mikrobiyota değişikliklerinin analizi için basit, uygun maliyetli bir DNA izolasyon yöntemi sağlar.

Lupus Eğilimli Farelerde Fekal Mikrobiyota Dinamiğinin Basit, Uygun Maliyetli Bir DNA İzolasyon Yöntemi Kullanılarak Analizi

Genetiği değiştirilmiş fare modellerinde ortaya çıkan tümörlerde terapötik hedefleri ve karşılık gelen insan tümör tipini belirlemek ve karşılaştırmak için genomik analizler ve fonksiyonel genomik ekranlar kullanan türler arası karşılaştırmalı bir onkogenomik yaklaşım geliştirdik.

Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörünün Fare Modellerinde Terapötik Hedefleri Belirlemek için Genetik Profilleme ve Genom Ölçeğinde Bırakma Taraması

Öğrenin fare yavrusu kuyruk biyopsisi ile genomik DNA izolasyonu yöntemini. Bu teknik, genetik analiz için bireysel fareleri tanımlamada ve çapraz kontaminasyonu önlemede kritik öneme sahiptir.

Fare Tails Genomik DNA izolasyonu

Daha fazla video keşfet