Name: Anwendung von Licht-gehärteten Dental Adhesive Resin für Montage-Elektroden oder Mikrodialysesonden in Chronic Experimente (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: Lernen Sie die Anwendung von lichtgehärtetem Dentalharz zur sicheren Montage von Elektroden oder Mikrodialysesonden bei chronischen Experimenten. Diese Methode ermöglicht direktes Bonding am Schädel und eliminiert Schraubenanker.

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Wir danken unseren Kollegen in RIKEN-BSI für die freundliche Unterstützung und fruchtbare Ratschläge bei dieser Arbeit. Ich möchte meinen aufrichtigen Dank Professor Shigemi Mori, Professor G bor Juh sz, Drs. auszudrücken. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK kesi und rp d Dobolyi, die mich zu Mikrodialyse-Methode während der Diplom-Studium an der Graduate University for Advanced Studies, Japan-Studie beraten. Abschließend danken wir Herrn Chris Sarnecky und Dr. Akitsugu Takasu für ihre Unterstützung in Video-Aufzeichnung.

Schritt 1. Vorbereitung der Sonde Implantation <ol><li> Anästhesie (nicht im Video gezeigt) Anesthetize jeder Vogel mit einem interperitoneale Injektion eines Ketamin (12,5 mg / kg Körpergewicht) und Xylazin (25 mg / kg) Mischung auf einem konstanten Niveau von chirurgischen Anästhesie zu erzeugen. </li><li> Fix einen Kopf zu einem stereotaktischen Rahmen Verwenden Sie Xylocain (TM) Gelee zu lokalen Schmerzen Ohr Bars &quot;Druck zu reduzieren. Der Kopf des Vogels ist in einem stereotaktischen Apparatur, bestehend aus Ohr Bars und einen Schnabel Halter, dass der Kopf in einem Winkel von 45 ° hält fixiert. Während der stereotaktischen Operation zur Implantation, erwärmen den Körper des Vogels durch chirurgische Pad mit thermischen (Temperatur = 34 ~ 36 ° C). </li><li> Desinfizieren OP-Bereich Desinfizieren Sie das OP-Feld mit isodine (TM) vor der Operation. </li></ol> Schritt 2. Stereotaktische Positionierung <ol><li> Referenzpunkt Ausrichtung Richten Sie Dummy-Sonde (Glasmikropipette), um die Lambda (Y-Punkt) und Mark Y-Punkt mit dem Farbstoff gefüllten Pipette. Verbleibende Dextran-TMR der letzten Tracer-Studie wurde in dem Video verwendet. </li><li> Inzision der Haut Entfernen Sie Haut und setzen der Oberfläche des Schädels. Dann reinigen Sie die Oberfläche des Schädels mit einem Wattestäbchen. </li><li> Die Positionierung der Dummy-Kanüle (in horizontaler Richtung) Bewegen Sie den Dummy-Kanüle an den Zielort (AP-Achse und Lateral-Koordination) </li><li> Kleine Kraniotomie und Inzision der Dura mater. Verwenden einer feinen Pinzette für Kraniotomie und einer Geldstrafe Injektionsnadel (30 G) für Einschnitte der Dura mater. Dann reinigen Sie die Oberfläche des Schädels. </li><li> Endgültige Positionierung (Implantation) von Dummy-Kanüle Suchen Sie die Spitze des Führungskanüle auf 0,30 mm über dem Mikrodialysesonde-anvisierten Region. Schließlich ist die Oberfläche des Schädels wieder, denn eine saubere und trockene Oberfläche für den harten Bindung erforderlich ist. </li></ol> Schritt 3. Eine Vorbehandlung der Oberfläche der Schädelbasis (Die ähnliche Vorgehensweise für &quot;direkte Befüllung Wiederherstellung&quot; der zahnärztlichen Produkt wird eingesetzt werden.) <ol><li> Primer-Behandlung <ol><li> Mix PRIMAR Flüssigkeit A mit B auf einem Teller. </li><li> Übernehmen Sie die Mischung auf der Oberfläche des Schädels mit einem kleinen Pinsel. </li><li> Lassen Sie für 30 Sekunden. </li><li> Trocken mit milder Luftstrom. (Nicht waschen.) </li></ol></li><li> Die Anwendung des Bindemittels <ol><li> Wenden Sie das Bindemittel an der Oberfläche des Schädels mit einem kleinen Pinsel. </li><li> Tragen Sie einen sanften Luftstrom. (Nicht waschen.) </li><li> Light-Kur für 20 Sekunden. </li></ol></li></ol> Schritt 4. Montage Komposit <ol><li> Berg-Harz mit einfachen plugger Wenn ein Plain Stopfer nicht verfügbar ist, kann ein Mikro-Spatel verwendet werden. </li><li> Lichthärtung </li><li> Incremental Montage Incremental Montage zu gewährleisten, eine vollständige Umsetzung des Harzes empfohlen. Bei inkrementellen Montage gelten Haftvermittler vor jeder Montage. </li><li> Mold den Komposit-und lichthärtenden für die endgültige Aushärtung. </li><li> Ende der Operation </li></ol> Reinigen Sie den OP-Bereich, gelten Antibiotikum (Gentamicin Salbe), und entfernen Sie das Tier aus der stereotaktischen Flamme. Dann halten die Tiere in einem thermo-kontrollierten Kammer (Temperatur = 33-35 ° C) für post-Aufwachraum. Wie in dem Video zu sehen, wurde kein anormales Verhalten in einem der Tiere am nächsten Tag nach der Operation beobachtet.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

Die Experimente wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien für Tierversuche der Brain Science Institute, RIKEN (RIKEN-BSI) und des Instituts Tier Ethikkommission genehmigt ihnen unternommen.

Im Vergleich zu der Anwendung der konventionellen Selbsthilfeeffekt Acrylharze, hat die Einführung Technik mehrere wichtige Vorteile: 1. Eine direkte Verbindung: Selbst Akrylat kann bis auf die Knochen für eine Weile befestigt werden aber nicht bis auf die Knochen halten. Daher sind Verankerungsschrauben erforderlich, um eine Grundplatte fixieren (siehe Abbildung 2a). Im Gegensatz dazu kann Lichthärtung Kunstharzbindung bis auf die Knochen direkt so Schrauben sind nicht erforderlich (Abbildung 2B). Deshalb können Größe...

Foto 1A zeigt Mikrodialysesonde (a), einer Überwurfmutter (b) und eine Anleitung Kanüle (c). Auf diesem Foto ist die Führung Kanüle durch zahnärztliche Harz, das an den Schädel hält direkt umgeben. Foto B zeigt ein Vogel während der Droge Perfusion. Auf der Oberseite des Kopfes, gibt es eine Mikrodialysesonde, dass zu einer Geldstrafe tefron Rohr verbunden ist. Maßstabsbalken = 1 cm für A-und 2 cm für B sind. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> Abbildung 1 - Fotografien einer Mikrodialyse-Sonde (A) und ein Vogel während der Droge Perfusion (B)

anwendung von licht-gehärteten dental adhesive resin für montage-elektroden oder mikrodialysesonden in chronic experimente

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

Bei der chronischen Aufnahme-Experimente haben selbsthärtenden zahnärztliche Acrylharzen als Grundplatte von Elektroden oder Mikrodialyse-Sonden verwendet worden. Da diese Acrylfarben nicht Bindung an den Knochen haben Schrauben als Anker benutzt worden. Allerdings in kleinen Versuchstieren wie Finken oder Maus, sind ihre Schädel sehr zerbrechlich und kann nicht erfolgreich halten die Anker. In diesem Bericht schlagen wir eine neue Anwendung von lichthärtenden Dentalharze für Montagesockel von Elektroden oder Mikrodialysesonden in chronischen Experimenten. Dieses Material ermöglicht die direkte Anbindung an die Schädeldecke. Daher sind Ankerschrauben nicht erforderlich und chirurgischen Bereich erheblich reduziert werden. Die bisherigen Erfahrungen zeigen, dass die Klebewirkung mehr als 2 Monate hält. Konventionelle Harzes Zeitfenster, wenn die Materialien weich und bearbeitbar sind nur ein paar Minuten. Allerdings ist das Fenster der Arbeitszeit für diese Dentaladhäsive deutlich breiter und einstellbar.

In diesem Bericht schlagen wir eine neue Anwendung von lichthärtenden Dentalharze für Montagesockel von Elektroden oder Mikrodialysesonden in chronischen Experimenten. Dieses Material ermöglicht die direkte Anbindung an die Schädeldecke.

Anwendung von Licht-gehärteten Dental Adhesive Resin für Montage-Elektroden oder Mikrodialysesonden in Chronic Experimente

In chronischen Registrierungsexperimenten wurden selbsthärtende Zahnacrylharze als Befestigungsbasis für Elektroden oder Mikrodialyse-Sonden verwendet. Da diese ...

Bei chronischen Experimenten der Elektrophysiologie oder Mikrodialyse wurde selbsthärtender Zahnkunststoff häufig als Montagebasis für Elektroden oder Mikrodialyseson den verwendet. Da diese Acrylate nicht an der Knochenoberfläche haften, wurden Schrauben als Verankerungen eingesetzt. Bei kleinen Versuchstieren wie FIEs oder Mäusen ist der Schädelknochen jedoch sehr zerbrechlich und kann die Anker nicht zuverlässig halten.Manchmal verursachen diese Knöchelschrauben eine Infektion und Entzündung des Gewebes. In diesem Bericht schlagen wir eine neue Anwendung von rechtem aushärtendem Zahnmaterial als Träger für die Montagebasis vor. Dieses Material ermöglicht eine direkte Verbindung mit dem Schädelknochen.Daher sind Verankerungsschrauben nicht erforderlich und das Operationsfeld kann erheblich verkleinert werden. Das Gesamtgewicht einer Sonde, einer Führungskanüle, eines Gehäuses und einer Montagebasis betrug weniger als ein Gramm. Frühere Erfahrungen zeigen, dass die Verklebung länger als zwei Monate anhält.Diese Technik kann auch für andere Versuchstiere wie Mäuse, Fische und so weiter verwendet werden. Zwei Durchführungen in zwei Gruppen wurden videoaufgezeichnet. In dieser Videod

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Das Video zeigt ein Verfahren zur Implantation einer drahtlosen bidirektionalen Mehrkanal-Elektrodeneinheit in ein Rattengehirn, um mehrkanalige neuronale Netze aufzuzeichnen und zu stimulieren.

Implantation eines drahtlosen bidirektionalen Mikroelektrodensystems in ein Rattengehirn

Traditionelle Kopffixationstechniken haben metallische Rahmen, die am Schädel befestigt sind, als Schnittstelle für Kopffixationsgeräte verwendet. Dieses Protokoll demonstriert eine rahmenlose, auf Acrylharz basierende Kopffixierungstechnik für Verhaltensaufgaben bei Nagetieren.

Acrylharz-Form Based Leiter Fixationstechnik in Nagetiere

Ein pH-sensitive ratiometrisch Farbstoff wird in Kombination mit konfokaler Laser-Scanning-Mikroskopie und digitale Bildanalyse zur Überwachung der extrazellulären pH in der dentalen Biofilme in Echtzeit verwendet.

Ratiometrisch Imaging von extrazellulären pH in Dental Biofilme

Wir stellen Methoden zur Konstruktion von Elektroden vor, um gleichzeitig extrazelluläre neuronale Aktivität aufzuzeichnen und mehrere neuroaktive Substanzen in der Nähe der Aufzeichnungsstellen bei wachen Mäusen freizusetzen. Diese Technik ermöglicht die detaillierte Analyse mutmaßlicher lokaler synaptischer Eingaben an das interessierende Neuron.

Die extrazelluläre Aufnahme neuronaler Aktivität in Kombination mit Microiontophoretic Anwendung von neuroaktiven Substanzen in Awake Mäuse

Scharfe Mikroelektroden ermöglichen eine genaue elektrophysiologische Charakterisierung der Photorezeptor- und visuellen Interneuronenleistung in lebenden Drosophila. Hier zeigen wir, wie man mit dieser Methode qualitativ hochwertige Spannungsreaktionen einzelner Zellen auf kontrollierte Lichtstimulation aufzeichnen kann. Diese Methode ist ideal, um die neuronale Informationsverarbeitung in Facettenaugen von Insekten zu untersuchen.

Elektrophysiologische Verfahren zur Aufzeichnung von intrazellulärer Spannung Antworten von<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorezeptoren und Inter auf Lichtreize<em&gt; In Vivo</em

Hier beschreiben wir eine Methode zur in Vivo Mikrodialyse Aspartat- und Glutamat Freisetzung im ventralen Hippocampus von epileptischen und nicht-epileptischen Ratten, in Kombination mit EEG-Ableitungen zu analysieren. Extrazelluläre Konzentrationen von Aspartat- und Glutamat können mit den verschiedenen Phasen der Erkrankung korreliert werden.

Mikrodialyse exzitatorischen Aminosäuren während der EEG-Ableitungen in Ratten frei beweglich

Durch das Schrumpfen von Zahnzement während der Aushärtung wird die Grundplatte verdrängt. Dieses Protokoll minimiert das Problem, indem es ein erstes Fundament des Zahnzements schafft, das Platz für die Zementierung der Grundplatte lässt. Wochen später kann die Bodenplatte mit wenig neuem Zement auf diesem Gerüst zementiert werden, wodurch die Schwindung reduziert wird.

Verwendung von Baseplating und einem Miniskop, das mit einer Objektivlinse vorverankert ist, für die Calcium-Transienten-Forschung bei Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Konstruktion von Kohlefaser-Mikroelektroden-Arrays für chronische und akute in vivo elektrophysiologische Aufnahmen in Maus (Mus musculus) und Frettchen (Mustela putorius furo) aus mehreren Hirnregionen. Jeder Schritt nach dem Kauf von Rohkohlenstofffasern zur Mikroelektroden-Array-Implantation wird detailliert beschrieben, wobei der Schwerpunkt auf der Konstruktion von Mikroelektroden-Arrays liegt.

Konstruktion und Implementierung von Kohlefaser-Mikroelektroden-Arrays für chronische und akute In-vivo-Aufnahmen

Hier stellen wir ein leichtes, kostengünstiges Sondenimplantatsystem für die chronische Elektrophysiologie bei Nagetieren vor, das für Benutzerfreundlichkeit, Sondenwiederherstellung, experimentelle Vielseitigkeit und Kompatibilität mit dem Verhalten optimiert ist.

Das DREAM-Implantat: ein leichtes, modulares und kostengünstiges Implantatsystem für die chronische Elektrophysiologie bei kopffesten und sich frei verhaltenden Mäusen

Wir haben einen vereinfachten und kostengünstigen Ansatz für die Elektrodenherstellung entwickelt und Aufzeichnungen von Signalen über mehrere Regionen hinweg in frei beweglichen Mäusen durchgeführt. Die Verwendung der Optogenetik in Verbindung mit der Multiregionen-Elektrophysiologie und der Kalziumsignalaufzeichnung ermöglichte die Aufdeckung neuronaler Aktivitäten über Regionen hinweg im Anfallskindling-Modell.

Eine integrierte Methode zur Herstellung flexibler und komfortabler elektrophysiologischer Optroden für die In-vivo-Aufzeichnung in mehreren Regionen

Dieses Protokoll beschreibt eine zweiphasige chirurgische Methode, um bei Mäusen ein großes, wiederverschließbares, dura-schonendes Schädelfenster zu schaffen. Diese Technik ermöglicht chronische, multimodale elektrophysiologische Aufzeichnungen aus verteilten, tief-gehirnbasierten Netzwerken wie dem Default Mode Network über mehrere Wochen.

Chirurgisches Protokoll für ein großes, wiederverschließbares Schädelfenster, das longitudinale, multimodale elektrophysiologische Aufzeichnungen des Maus-Default-Mode-Netzwerks ermöglicht

Lernen Sie die Anwendung von lichtgehärtetem Dentalharz zur sicheren Montage von Elektroden oder Mikrodialysesonden bei chronischen Experimenten. Diese Methode ermöglicht direktes Bonding am Schädel und eliminiert Schraubenanker.

Anwendung von Licht-gehärteten Dental Adhesive Resin für Montage-Elektroden oder Mikrodialysesonden in Chronic Experimente

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