Name: Transformation von Plasmid-DNA in E. coli mit dem Hitzeschock-Methode (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Lernen Sie die Hitzeschock-Methode zur Transformation von Plasmid-DNA in kompetente E. coli-Zellen bei 42 °C. Diese Technik bereitet Bakterien für genetische Anwendungen und nachfolgende Zebrafisch-Studien vor.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

transformation von plasmid-dna in e. coli mit dem hitzeschock-methode

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

Transformation von Plasmid-DNA in E. coli mit dem Hitzeschock-Methode ist eine grundlegende Technik der Molekularbiologie. Es besteht aus ein fremdes Plasmid oder Ligationsprodukt in Bakterien. Dieses Video-Protokoll beschreibt die traditionelle Methode der Transformation mit Hilfe von kommerziell erhältlichen chemisch kompetente Bakterien aus Genlantis. Nach einer kurzen Inkubation in Eis, ist eine Mischung aus chemisch kompetente Bakterien und DNA bei 42 ° C für 45 Sekunden gesetzt (Hitzeschock) und anschließend wieder in Eis gestellt. SOC-Medium zugegeben und die transformierten Zellen werden bei 37 ° C für 30 min unter Rühren inkubiert. Um zu isolieren Kolonien unabhängig von Transformationseffizienz gesichert werden, sind zwei Mengen von transformierten Bakterien überzogen. Das traditionelle Protokoll erfolgreich eingesetzt werden kann auf die meisten handelsüblichen kompetente Bakterien zu transformieren. Die turbocells aus Genlantis kann auch in einem Roman 3-Minuten-Transformation-Protokoll, in der Bedienungsanleitung beschrieben verwendet werden.

Transformation von Plasmid-DNA in E. coli mit dem Hitzeschock-Methode

Die Transformation von Plasmid-DNA in E. coli mittels der Hitzeschockmethode ist eine grundlegende Technik der Molekularbiologie. Sie besteht darin, eine fremde ...

Hallo, ich bin Alex Hoge. Ich arbeite im Gym Hall Lab in der Abteilung für Physiologie und Biophysik an der University of California Irvine. Heute zeige ich Ihnen, wie man elektrisch kompetente E. coli mittels Elektroporation transformiert.Heute verwende ich diese Technik, um ein coli mit meinem Lationsprodukt zu transformieren, da ich einen Prob durchführe, um eine Ganzpräparat-Färbung bei Zebrafischen durchzuführen. Okay, wir werden nun mit der Transformation beginnen. Zunächst benötigen Sie ein Wasserbad oder einen Trockenblock bei 42 Grad.Sie müssen Ihre Bakterien, die Sie gerade aus der Hauptkultur entnommen haben, auf Eis lagern. Heute verwenden wir elektrokompetente Zellen von ities sowie Ihre DNA auf Eis. Außerdem benötigen Sie ein Gefäß mit SOC-Medium bei Raumtemperatur oder 37 °C und Ihre Platten mit LB-Plus-Antibiotikum-Medium.Jetzt füge ich die DNA zu den Bakterien hinzu. Ich arbeite dabei neben der Flamme, um die Bakterien nicht zu kontaminieren. Also gebe ich die DNA zusammen mit den Bakterien hinzu.Es sind 50 Mikroliter Bakterien, danach sofort zurück auf Eis; Sie können es leicht anstoßen, um die Bakterien und Ihre DNA zu mischen, und lassen es bis zu 15 Minuten auf

transformation-of-plasmid-dna-into-e-coli-using-the-heat-shock-method

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Seite Mutagenese ganzer Plasmide ist ein einfacher Weg, um etwas anders Variationen eines Original-Plasmid zu erzeugen. Hier zeigen wir eine einfache und kostengünstige Möglichkeit, Basensubstitutionen in ein Plasmid mit Standard-Reagenzien einzuführen.

Hausgemachte Mutagenese von Whole Plasmide

Quelle: Stefan, A., et al., Die vielfältigen Vorteile der Protein-Co-expression in Escherichia coli. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt das Verfahren zur Transformation von Escherichia coli mit einem Plasmid, das ein Antibiotikaresistenzgen trägt, einschließlich Zellvorbereitung, Elektroporation, Wiederherstellung und Auswahl von Transformanten.

Präparation und Umwandlung von Bakterien mittels Hochspannungs-Elektroporation

Elektroporation ist ein häufig verwendetes Verfahren zur Einführung von DNA in Bakterien in einem als Transformation bekannt. Traditionellen Protokolle zur Herstellung von elektrokompetenten Zellen sind zeitaufwendig und arbeitsintensiv. Dieser Artikel beschreibt eine alternative, schnelle und effiziente Methode zur Herstellung von elektrokompetenten Zellen derzeit von einigen Labors eingesetzt.

Rapid-Protokoll für die Herstellung von Elektrokompetente<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Und<em&gt; Vibrio cholerae</em

Dieses Protokoll zeigt die Chaperon-Aktivität des Hitzeschockproteins 70 (Hsp70). E. coli dnaK756-Zellen dienen als Modell für den Assay, da sie ein natives, funktionell beeinträchtigtes Hsp70 beherbergen, was sie anfällig für Hitzestress macht. Die heterologe Einführung von funktionellem Hsp70 rettet die Wachstumsschwäche der Zellen.

Escherichia coli-basierter Komplementationsassay zur Untersuchung der Chaperonfunktion des Hitzeschockproteins 70

Die In-vivo-Assemblierung ist eine ligationsunabhängige Klonierungsmethode, die auf intrinsischen DNA-Reparaturenzymen in Bakterien beruht, um DNA-Fragmente durch homologe Rekombination zusammenzusetzen. Dieses Protokoll ist sowohl zeit- als auch kosteneffizient, da nur wenige Reagenzien benötigt werden und die Klonierungseffizienz bis zu 99 % betragen kann.

Verwendung von In-vivo-Assemblierung für den hocheffizienten Plasmidbau

Purifying Plasmid-DNA aus Bakterien-Kolonien mit dem Qiagen Miniprep Kit

Diese Arbeit zeigt, wie ein RNA / DNA-Hybrid bei der chromosomalen Ebene bilden und zeigen Übertragung der genetischen Information von RNA, um genomische DNA in Hefezellen.

Generierung von RNA / DNA-Hybride in genomischer DNA durch Transformation mit RNA-haltigen Oligonukleotiden

Wir präsentieren ein Verfahren, mit dem zweidimensionalen Agarose-Gel-Analyse verwendet werden, um die Struktur der Replikation Zwischenprodukte, die nach UV-Bestrahlung auftreten, identifiziert werden können.

Visualisierung der UV-induzierten Replikation Zwischenprodukte in E. coli Mit Hilfe von zweidimensionalen Agarose-Gel-Analyse

Dieses Protokoll ist eine kostengünstige Alternative für eine effiziente parallele Klärung und Plasmid-DNA Aufreinigung...

Optimierte Reinigung von Plasmid-DNA aus prokaryontischen Kulturen

Hier zeigen wir ein einfaches Protokoll, um eine zufällige Mutantenbibliothek für eine bestimmte Zielsequenz zu schaffen. Wir zeigen, wie diese Methode, die in vivo in Escherichia coli durchgeführt wird, mit funktionellen Selektionen gekoppelt werden kann, um neue enzymatische Aktivitäten entwickeln.

Mutagenese und Functional Selection Protocols for Directed Evolution von Proteinen in E. coli</em

Lernen Sie die Hitzeschock-Methode zur Transformation von Plasmid-DNA in kompetente E. coli-Zellen bei 42 °C. Diese Technik bereitet Bakterien für genetische Anwendungen und nachfolgende Zebrafisch-Studien vor.

Transformation von Plasmid-DNA in E. coli mit dem Hitzeschock-Methode

Weitere Videos entdecken