Name: Die Verwendung eines Hanging-Gewicht-System für Leberischämie in Mäuse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 53 s
Description: Erfahren Sie eine präzise Leberischämie-Technik mit einem Hanging-Gewicht-System bei Mäusen. Diese Methode minimiert Gewebeschäden und ermöglicht kontrollierte Reperfusionsstudien für hepatische Forschung.

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Die vorliegenden Studien wurden vom United States National Institutes of Health Zuschuss R01-HL092188, R01-DK083385 und R01HL098294 und Stiftung für Anästhesie Bildung und Forschung (FAER) gewährt HKE und ein DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) Research Fellowship (GR2121/1- 1) und der American Heart Association Grant AG.

Allgemeine Bemerkungen. Alle Arbeiten sind unter einer aufrechten Binokular (Leica) und mit Hilfe eines chirurgischen Koagulator durchgeführt werden. Die Mäuse in den experimentellen und Schein-Gruppen sollten im Alter und Gewicht angepasst werden, um die Vergleichbarkeit der Ergebnisse zu gewährleisten. Temperatur, Blutdruck, Anästhesie und Flüssigkeitszufuhr sollte stabil sein und überwacht während des gesamten Experiments. 1. Anästhesie und Chirurgie <ol><li> C57BL / 6 Mäusen sollte innerhalb einer Altersspanne von 10 bis 16 Wochen betragen und sie sollten geschlechtsspezifische abgestimmt in den jeweiligen Gruppen sein. </li><li> Anesthetize Mäuse mit Natrium-Pentobarbital (70 mg / kg Körpergewicht ip) und Aufrechterhaltung einer Narkose mit ca. 10 mg / kg / h Natriumpentobarbital. Eine Überdosierung kann deutlich den Blutdruck senken und somit können die Ergebnisse verändern. </li><li> Ort Mäusen auf eine Temperatur gesteuerte beheizte Tisch (RT, Effenberg, München, Deutschland) mit einer rektalen Sonde zu einem Thermometer thermischer Rückführung befestigtSteuerung der Körpertemperatur bei 37 ° C zu halten </li><li> Platz Mäuse in Rückenlage auf dem OP-Tisch, mit den oberen und unteren Enden an dem Tisch mit entfernbaren Klebeband. </li><li> Im Falle des Überlebens Experimente richtige aseptische Techniken einschließlich Clipping von Haaren, Desinfektion der Haut mit Iodophoren (zB Betadine), sterile Handhabung der Instrumente autoklaviert und mit Masken eine sterile Handschuhe für den Chirurgen erforderlich. </li></ol> 2. Portal Triad Occlusion <ol><li> Bedecken Sie den Einschnitt mit Mineralöl um das Einatmen von Maus Haare durch Schneiden der Haut und verhindert so das Risiko von Allergien Maus Haare zu verhindern. Führen Mittellinie Laparotomie und Inzision der Linea alba bis zum oberen Ende, so dass Sie leicht entlarven die Leber. Wenn möglich, führen Sie den Schnitt mit einer Koagulationselektrode (Erbe, ICC50, Tübingen, Deutschland), um eine Blutung zu verhindern. </li><li> Legen Sie die Heiz-Tabelle mit der Maus in der Lage, dass der Schwanz Richtung istTed für den Chirurgen. Diese Position bietet Ihnen die beste Einstellung zu lokalisieren und den Dreiklang, um die Naht zu platzieren. </li><li> Anschließend verdrängt man das Darm auf der rechten Seite mit einem feuchten Wattestäbchen Wattestäbchen, das Portal Dreiklang aussetzen. </li><li> Geringfügig verschieben den Median und linken Lappen in Richtung der Membran und der rechte Lappen in Richtung Darm. Das gibt Ihnen einen klaren Blick auf das Portal Dreiklang oberhalb der Bifurkation der rechten, mittleren / linken Lappen. </li><li> Überprüfen Sie sorgfältig das Portal Dreiklang und halten Sie die rechte Lappen sanft mit einer Pinzette fad. Das gibt Ihnen eine schöne Aussicht auf dem linken Portal Dreiklang. </li><li> Einmal visuell festgestellten Ort die Nadel mit dem Faden (7/0 Nylonnaht; Ethicon, Norderstedt, Deutschland) über einen Nadelhalter unter dem linken Portal Dreiklang, einschließlich der Leberarterie, Lebervene, und Gallengang von der linken auf die rechte Seite der Maus. </li><li> Der Stich muss eng sein, unter dem Dreiklang. Ein tiefer Stich kann zu Verletzungen der Vena Vaca unterlegen, die unter befindetder Dreiklang. Deshalb halten Sie die rechte Leberlappen nach unten mit der Zange, um die Vena Cava, bevor Sie den Stich zu identifizieren. </li><li> Nehmen Sie die Spitze der Nadel auf der rechten Seite mit einer Pinzette heraus und ziehen Sie sie vorsichtig aus der Leber Bereich ohne Verletzung der Leber. </li><li> An jedes Ende des Fadens ein Eppendorf-Röhrchen (etwa 3 g, mit Wasser gefüllt) und stellen sowohl Fadenenden über Nahtmaterial Halter. Platzieren Sie die Fadenhalter distal von der Masche, so dass die Naht nicht mit der rechten Triade stören. </li><li> Durch die Anwendung der Gewichtungen der Triade wird sofort verschlossen, wodurch Unterbrechung der Blutversorgung des linken und mittleren Lappen der Leber. Erfolgreiche Okklusion kann leicht durch visuelle Inspektion der blasse Blanchieren der ischämischen Lappen bestätigt werden. Im Gegensatz dazu die Änderung der Farbe sofort verschwindet, wenn die Gewichte hängen von den Polen freigesetzt werden und die Leber reperfundiert. Diese partielle hepatische Ischämie-Modell vermeidet Staus mesenterialen durch die Erhaltung Blood Strömung zu den rechten Leberlappen. </li><li> Ersetzen Sie den Darm in die Bauchhöhle. Halten Sie die Leber und Darm warm mit einem feuchten Wattestäbchen mit Wasser bei 37,0 ° C eingetaucht Neben der Körpertemperatur stabil zu halten decken die Mäuse, die mit handelsüblichen Frischhaltefolie nach Beendigung der Operation. </li><li> Führen Ischämie nach experimentellen Protokoll erforderlich. Nach einer definierten Zeit Release Ischämie und Reperfusion die Gewichte der mittleren und linken Leberlappen wird sofort gestartet. Diese Technik erlaubt die Herstellung reversible Ischämie bei Mäusen. Wenn keine weiteren Ischämie Zeiten durchgeführt werden, entfernen Sie vorsichtig die Naht. </li><li> In etwa 400 ul Natriumchlorid in die Bauchhöhle 15 Minuten vor und unmittelbar nach der Reperfusion. Weiter zur Flüssigkeit ersetzen alle 30 Minuten in einer Menge von 100 ul zu Flüssigkeitsverlust während der Reperfusion zu kompensieren. </li><li> Für das Überleben Experimente die OP-Wunde wird geschlossen mit fortlaufenden Naht des Muskels Wand und die Haut with einer 4/0 Nahtmaterial. </li></ol> 3. Änderungen in Leberperfusion Die folgenden Outcome-Parameter werden empfohlen, um Leberschäden nach hepatischer Ischämie zu bestimmen: Bestimmen Sie Leberenzyme (zB ALT, AST) und Leberhistologie (H &amp; E Färbung) folgende Leber Ischämie und Reperfusion 3,9. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/2550/2550fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="1"> Abbildung 1 Modell eines Hanging-Gewicht-System für Leberischämie:. Eine hängende Gewicht System wurde eingerichtet, um Leber-Ischämie des linken und Mittellappen 3 zu induzieren. (A) Deshalb ist die caudatus und rechten Lappen wurden vorsichtig aus dem linken Lappen getrennt. Der rechte Lappen war dann leicht verschoben, klar zu sehen das Portal Dreiklang oberhalb der Bifurkation der rechten, mittleren und linken Lappen. Der 8,0 Nylonnaht wurde unter dem linken Leber-Dreiklang platziert. (B) am Ende jedes Fadens ein kleines Gewicht (3 g Eppendorf tuBES mit Wasser gefüllt) befestigt war und angewendet werden. Hepatischer Ischämie sichtbar durch eine Farbänderung des linken und Mittellappen von rot zu verblassen. Das experimentelle Design erlaubt eine präzise Okklusion und Reperfusion des linken Leber-Dreiklang durch Anlegen und Lösen der Gewichtsbelastung. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/2550/2550fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="2"> 2. Auswirkungen unterschiedlicher Leberischämie Mal auf Alanin (ALT) und Aspartat-(AST) Aminotransferase in Mäusen. Teilweise Portal Dreiklang Ischämie wurde wie angegeben (- 60 min Ischämie 0) induziert. Nach 2 Stunden Reperfusion wurden ALT (A) und AST (B) gemessen. 7 Mäuse / Gruppe - Ergebnisse sind als Mittelwert ± SE von 6 ausgedrückt. * P &lt;0,05 im Vergleich zu 0 min Ischämie (Schein-Kontrolle).

<ol><li>Rook, M., Rand, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+long-term+outcome+after+liver+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Organ.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Predictors of long-term outcome after liver transplant.</a> Curr. Opin. Organ. Transplant. 16, 499-504 (2011).</li>
<li>Henrion, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia%2Freperfusion+injury+of+the+liver%3A+pathophysiologic+hypotheses+and+potential+relevance+to+human+hypoxic+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Gastroenterol.+Belg%22%5BJournal%5D)">Ischemia/reperfusion injury of the liver: pathophysiologic hypotheses and potential relevance to human hypoxic hepatitis.</a> Acta. Gastroenterol. Belg. 63, 336-347 (2000).</li>
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<li>Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+adenosine+production+by+ecto-5%27-nucleotidase+protects+during+murine+hepatic+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Extracellular adenosine production by ecto-5'-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning.</a> Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).</li>
<li>Beraza, N., Ludde, T., Assmus, U., Roskams, T., Vander Borght, S., Trautwein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte-specific+IKK+gamma%2FNEMO+expression+determines+the+degree+of+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte-specific IKK gamma/NEMO expression determines the degree of liver injury.</a> Gastroenterology. 132, 2504-2517 (2007).</li>
<li>Lentsch, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+and+function+of+hepatocyte+NF-kappaB+in+postischemic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation and function of hepatocyte NF-kappaB in postischemic liver injury.</a> Hepatology. 42, 216-218 (2005).</li>
<li>Luedde, T., Assmus, U., Wustefeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+IKK2+in+hepatocytes+does+not+sensitize+these+cells+to+TNF-induced+apoptosis+but+protects+from+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Deletion of IKK2 in hepatocytes does not sensitize these cells to TNF-induced apoptosis but protects from ischemia/reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 115, 849-859 (2005).</li>
<li>Kapitsinou, P. P., Liu, Q., Unger, T. L. Hepatic HIF-2 regulates erythropoietic responses to hypoxia in renal anemia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKapitsinou%2C+PP+%22Blood%22">Blood</a>. , (2010).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die vorliegende Studie beschreibt eine Technik, bei der Ischämie in einem Mausmodell mit Hilfe eines hängenden Gewicht für Okklusion der linken Leberpforte Dreiklang. Obwohl es eine einfache Methode, lernen die folgenden Gefahren sollten berücksichtigt werden. Ein sehr häufiger Fehler am Anfang ist ein tiefer Stich, die das Portal Dreiklang und die Vena Cava umfasst. Die Atem-und Herzfrequenz verlangsamt sich innerhalb von 15 Minuten durch den erhöhten Widerstand und die Abnahme der Rückkehr Blutes zum Herzen, was zu einem frühen Tod der Mäuse. Der beste Weg, die einschließlich der Vena Cava zu verhindern, ist die Lokalisierung des Hohlvene vor dem Stich durch Halten der rechten Lappen nach unten mit einer Pinzette. Ein weiterer wichtiger Punkt ist, dass die Gewichte nicht zu schwer sind, die in zu viel Stress auf der linken und rechten Portal-Studie, die ebenfalls stoppt den Blutfluss zu den rechten Lappen führen kann. Daher ist die Menge an Wasser in der Eppendorfgefäße sollte der Maus beträgt und der s eingestellt werdenukunft Halter sollte distal von der Masche Ort platziert werden. Auf der gegenüberliegenden, wenn die Gewichte sind zu niedriger Blutdruck ist nicht vollständig gestoppt. Beide Fehler sind leicht erkennbar durch eine zusätzliche Farbwechsel bis blass des rechten Lappens oder unzureichende Farbumschlag der mittleren und linken Lappen, beziehungsweise. Deshalb ist die hepatische Farbänderung gemäß der Anwendung der Gewichte sollten alle 10 Minuten kontrolliert werden. Eine weitere häufige Komplikation ist die chirurgische Verletzungen der Leber mit der Nadel. Deshalb sind die rechten Lappen sollten mit einem milden Zange, so dass die Spitze der Nadel leicht gesehen werden kann und genommen mit einem Nadelhalter gehalten werden. Wenn diese Mängel zu Beginn berücksichtigt werden die hängenden Gewicht für hepatischer Ischämie bietet eine hohe Reproduzierbarkeit der Schädigung durch Ischämie durch Minimieren der Variabilität der Leberschäden mit Klemmung des Portals Triade zugeordnet. Durch die Verwendung eines hängenden Gew.-System wird das Portal Triade nur einmal im gesamten manipuliertchirurgischen Eingriff, wodurch deutlich weniger Schäden an den Leberlappen. Darüber hinaus tritt keine hepatische oder intestinale Kongestion mit dieser Technik. Mehr Gewebetrauma erfolgt durch Entfernen und Ersetzen Gefäßklemmen, vor allem mit Wiederanbringung der Klemme während mehrerer Zyklen wie Ischämie während der ischämischen Präkonditionierung. Die Verwendung der hängenden Gewichte, die in einem entfernten Standort aus dem Lebergewebe sind, nach unseren Beobachtungen, bietet den Vorteil einer zuverlässigen Verschluss und verhindert gleichzeitig Gewebetrauma durch Manipulation der Leberlappen durch erneute Anwendung von einer Klemme. Zusammengefasst stellt die vorliegende Studie Durchführbarkeit des hängenden Gewicht für Portal Triade Verschlusses während der Ischämie, die Minimierung der Variabilität und Einschränkungen Klemmelement verbunden ist. Damit diese Technik könnten von Interesse für andere Forscher, die ein Studium hepatischer Ischämie zu erwägen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Natrium-Pentobarbital (Fatal Plus) </td><td> Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd </td><td> VPL 9372 </td><td> 4 mg / ml in physiologischer Kochsalzlösung </td></tr><tr><td> Nahtmaterial, Prolene 8,0 </td><td> Ethicon, USA </td><td> M8739 </td><td> wiederverwendbar </td></tr><tr><td> Seziermikroskop </td><td> Leica </td><td> n / a </td><td> betrachten großzügigen Arbeitsabstand </td></tr><tr><td> Heiztisch </td><td> Rt, Effenberger, Deutschland </td><td> n / a </td><td> und nur einzelne Anbieter </td></tr><tr><td> Chirurgische Instrumente </td><td> WPI, Dumont </td><td></td><td> Pinzetten, Nadelhalter </td></tr><tr><td> Koagulator </td><td> Erbe, ICC50, Tübingen, Deutschland </td><td> n / a </td><td> Verschiedene Anbieter von Koagulatoren </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Spezifischen Reagenzien und Geräte.

die verwendung eines hanging-gewicht-system für leberischämie in mäuse

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

Akute Leberschädigung aufgrund einer Ischämie kann während mehrerer klinischer Verfahren z. B. Leber-Transplantation, Leber-Resektion des Tumors oder Trauma Reparatur auftreten können und in Leberversagen, die eine hohe Sterblichkeitsrate 2.1 hat zur Folge haben. Deshalb murinen Studien der hepatischer Ischämie sind zu einem wichtigen Bereich der Forschung durch die Bereitstellung der Gelegenheit zu nutzen, pharmakologischen und genetischen Studien 3-9. Ausdrücklich stellen bedingte Mäuse mit gewebespezifischen Deletion eines Gens (CRE, flox System) Einblicke in die Rolle von Proteinen in bestimmten Geweben 13.10. Wegen der technischen Schwierigkeiten mit manuell Einspannen des Portals Dreiklang in Mäusen verbunden sind, führten wir eine systematische Auswertung mit einem hängenden Gewichts-System für Portal-Triade Okklusion, der zuvor 3 beschrieben. Durch die Verwendung eines Hanging-System Gewicht legen wir einen Faden um den linken Ast des Portals Dreiklang ohne dass es zu Schäden an den Leberlappen, da auch derfeinsten Klemmen zur Verfügung kann Lebergewebe Schaden wegen der engen Lage des Lebergewebes zu den Gefäßen verursachen. Ferner ist die rechte Zweig der hepatischen Triade noch folglich keine Überlastung auftritt Darm mit dieser Technik, da der Blutfluss zu den richtigen Leberlappen erhalten bleibt perfundiert. Ferner ist das Portal Triade nur einmal im gesamten chirurgischen Eingriffs manipuliert. Als ein Ergebnis, wie Verfahren Vorkonditionierung, mit kurzen Zeit von Ischämie und Reperfusion, kann leicht durchgeführt werden. Systematische Evaluation dieses Modells, indem Sie verschiedene Ischämie und Reperfusion Zeiten ergab eine enge Korrelation von hepatischer Ischämie Zeit mit Leberschäden wie durch Alanin (ALT) und Aspartat-(AST)-Aminotransferase-Serumspiegel 3,9 gemessen. Zusammengenommen bestätigen diese Studien in hohem Maße reproduzierbar Leberschädigung bei der Verwendung der hängenden Gewicht für hepatischer Ischämie und Reperfusion intermittierende. Somit könnte diese Technik nützlich sein für andere Forscher Interesseed in Leberischämie Studien an Mäusen. Deshalb ist die Video-Clip bietet eine detaillierte Schritt-für-Schritt-Beschreibung dieser Technik.

Wir gründeten eine neue Mausmodell der eine hängende Gewicht für Portal-Triade Okklusion. Diese Technik kann hilfreich sein für zukünftige Untersuchungen der Ischämie in Maus-Leber-Modelle.

Die Verwendung eines Hanging-Gewicht-System für Leberischämie in Mäuse

Akute Leberschäden aufgrund von Ischämie können bei verschiedenen klinischen Eingriffen auftreten, z. B. bei Lebertransplantationen, hepatischen Tumorresektionen oder Traumabehandlungen und ...

Das Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine Leberischämie zur Untersuchung der Reperfusionsschädigung zu induzieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die Leberlappen freigelegt werden. Im nächsten Schritt wird das linke Lebertrias freigelegt, das die Pfortader, die Leberarterie und den Gallengang umfasst.Nach der Isolierung wird eine Naht um die linke Trias gelegt, und ein hängendes Gewichtssystem wird angebracht, um eine Leberischämie zu induzieren. Zu einem bestimmten Zeitpunkt nach der Ischämie werden die Gewichte angehoben, um die Reperfusion einzuleiten. Letztendlich kann das Ausmaß der Leberschädigung nach Ischämie und Reperfusion bestimmt werden, indem die aLT- und aST-Werte im Blut gemessen und eine Leberhistologie durchgeführt wird. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie beispielsweise der Verwendung von Klammern zur Induktion einer Leberischämie, liegt darin, dass die Naht kein Lebergewebe verletzt und der Zeitpunkt der Ischämie präziser gesteuert werden kann.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, da die exakte Platzierung der Naht entscheidend dafür ist, reproduzierbare Leberischämie zu erzielen, ohne das Gewebe zu schädigen. Beginnen Sie damit, den chirurgischen Bereich mit sterilisierten Instrumenten und allen weiteren für die Operation erforderlichen Materialien vorzubereiten. Legen Sie zunächst eine anästhesierte Maus in Rückenlage auf einen temperaturgeregelten, beheizten Tisch.Befestigen Sie die oberen und unteren Extremitäten mit abnehmbarem Klebeband am Tisch, um die Lokalisation des Triadengefäßes und das Setzen der Naht zu erleichtern. Positionieren Sie die Maus und den Heiztisch so, dass der Schwanz zum Chirurgen weist. Anschließend wird eine an einen temperaturregulierten Controller angeschlossene rektale Sonde eingeführt, um die Körpertemperatur konstant zu halten.Bedecken Sie den Operationsbereich mit Mineralöl, um das Einatmen von Mausenhaaren zu verhindern und die Allergenexposition zu reduzieren. Sobald das Tier ordnungsgemäß vorbereitet ist, überprüfen Sie die Tiefe der Anästhesie, bevor Sie eine mediane Laparotomie durchführen. Setzen Sie das Durchtrennen der Linea alba fort, bis die Leber leicht freigelegt werden kann.Verwenden Sie anschließend einen feuchten Wattestäbchen, um die Därme zu verschieben und die Pfortadertriade freizulegen. Um eine bessere Sicht zu erzielen, schieben Sie das mediale und linke Leberlappen zum Zwerchfell hin und das rechte Leberlappen in Richtung Darm. Halten Sie das rechte Leberlappen mit einer stumpfen Pinzette nieder, um eine klare Sicht auf die linke Pfortader zu erhalten.Trias und Vena cava inferior. Fädeln Sie vorsichtig einen Faden um die linke portale Trias. Diese umfasst die Arteria hepatica, die Vena hepatica und den Ductus choledochus.Verwenden Sie eine Pinzette, um die Nadelspitze von der rechten Seite zu greifen, und ziehen Sie die Naht vorsichtig hindurch, ohne die Leber zu beschädigen. Der Stich sollte direkt unter der Trias gesetzt werden; tiefer liegende Stiche könnten die Vena cava inferior verletzen. Sobald die Naht positioniert ist, befestigen Sie an jedem Ende ein gewichtetes Endotrachealtubus-Stück.Wenn bereit, werden diese Gewichte über Nahtführer gelegt, die sich distal der Nahtstelle befinden. Wie hier zu sehen, bringen Sie beide Gewichte über die Nahtführer an, um die Ischämie auszulösen. Die Trias wird sofort okkludiert, wodurch die Durchblutung der linken und medianen Leberlappen unterbrochen wird.Ein erfolgreicher Verschluss wird durch die blasse Aufhellung der mittleren und linken Leberlappen bestätigt. Dieses Modell einer partiellen hepatischen Ischämie vermeidet eine mesenteriale Stauung, indem der Blutfluss zu den rechten Leberlappen erhalten bleibt. Sobald der vorbestimmte ischämische Zeitraum abgelaufen ist, heben Sie die Gewichte an, um die Spannung auf die Naht zu lösen.Eine Farbänderung sollte erkennbar sein, während die Leber reperfundiert wird. Das Darmstück wird wieder in die Bauchhöhle zurückgelegt und Leber sowie Darm mit einem mit warmer Flüssigkeit getränkten Tupfer warmgehalten. Nach der Reperfusionsphase können Blut- und Lebergewebsproben gesammelt werden, um das Ausmaß der Leberschädigung nach hepatischer Ischämie zu beurteilen.Das Ausmaß einer Leberschädigung kann durch Färbung des Gewebes mit Hämatoxylin und Eosin bestimmt werden. Das hier gezeigte gesunde Gewebe weist im Vergleich zur ischämischen Leber weniger Hepatozyten, Degeneration und Schwellung auf. Die Leberenzyme Alaninaminotransferase (ALT) und Aspartataminotransferase (AST) sind hier gängige Marker für Leberschäden.Die Konzentrationen sowohl des LT als auch des ST stiegen an, wenn die ischämische Zeit verlängert wurde. Eine Masterlösung. Diese Technik kann innerhalb von 10 Minuten durchgeführt werden, wenn sie ordnungsgemäß ausgeführt wird.Andere Methoden wie die ischämische Präkonditionierung können durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen bezüglich Leberschäden aufgrund von Ischämie zu beantworten.

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Forschung

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Medizin

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Die Verwendung eines Hanging Weight System für Okklusion in Mäuse

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Die Verwendung eines Hanging-weight-System für Isolated Nierenarterie Occlusion

Chirurgisches Trauma eine entzündliche Reaktion induziert. Zytokine und endogene Liganden bekannt zu modulieren Myokardinfarkt Größe nach Ischämie und Reperfusion. Wir präsentieren eine modifizierte geschlossener Brust Modell der murinen Ischämie und Reperfusion mit hängenden Gewichte zu Auswirkungen der Thorakotomie zu minimieren.

Ein Maus-Closed-Brust-Modell von Myokardischämie und Reperfusion

Dieser Film zeigt, wie die systemische und hepatische Hämodynamik bei Mäusen zu erwerben. Die ganze Überwachung umfasst Erwerb von Vitalparametern, systemischer Blutdruck, zentraler Venendruck, gemeinsame Leberarterie Strömungsrate und Pfortader Druck sowie das Portal Flussrate bei Mäusen.

Überwachung der System und Leber hämodynamischen Parameter in Mäuse

Hierin beschreiben wir ein chirurgisches Verfahren, das zeigt, wie eine dauerhafte Ligation der links-vorderen absteigenden Herzkranzgefäße bei Mäusen erreicht werden kann. Dieses Modell ist von hoher Relevanz für die Untersuchung der Pathophysiologie des Myokardinfarkts und der damit einhergehenden biologischen Prozesse.

Murine Myokardinfarkt Modell mit permanenten Ligation der linken Anterior absteigende Koronararterie

Wir beschreiben detailliert ein klinisch relevantes Tumormodell der Darmkrebslebermetastasen (CRLM) und den Einfluss der Leberischämie-Reperfusion (I/R) auf Tumorwachstum und Metastasierung. Dieses Modell kann helfen, die Mechanismen, die der chirurgieinduzierten Förderung des metastasierenden Wachstums der Leber zugrunde liegen, besser zu verstehen.

Murine Modell der metastasierenden Lebertumoren in der Einstellung der Ischämie Reperfusionsverletzung

Das Protokoll beschreibt eine einfache Methode zur Resektion einer intakten Mausleber für Stoffwechselstudien durch Pfortaderperfusion.

Ex vivo Leberperfusion durch die Portalader in der Maus

Für die Leber von Mäusen wurde ein normothermisches ex vivo Leberperfusionssystem (NEVLP) entwickelt. Dieses System erfordert Erfahrung in der Mikrochirurgie, ermöglicht aber reproduzierbare Perfusionsergebnisse. Die Möglichkeit, Mäuselebern zu verwenden, erleichtert die Untersuchung molekularer Signalwege zur Identifizierung neuartiger Perfusat-Additive und ermöglicht die Durchführung von Experimenten, die sich auf die Reparatur von Organen konzentrieren.

Normotherme ex vivo Lebermaschinenperfusion bei Mäusen

Es hat sich gezeigt, dass die Assoziierung der Leberpartition und der Pfortaderligatur bei der gestiebenen Hepatektomie (ALPPS) mehrere Wochen nach der Operation im ersten Stadium zu einer bemerkenswerten Leberregeneration führt. Tiermodelle, die einer ALPPS unterzogen wurden, wurden entwickelt, um die potenzielle Regenerationsfähigkeit der Leber zu untersuchen und günstige klinische Ergebnisse zu erzielen.

Ein Mausmodell der zugehörigen Leberpartition und der Pfortaderligatur für ein gestuftes Hepatektomieverfahren mit Hilfe der Mikroskopie

Dieses Protokoll enthält technische Informationen für die Gefäßrekonstruktion mit der Manschettentechnik bei der orthotopen Lebertransplantation der Maus.

Gefäßrekonstruktion mit der Manschettentechnik bei der orthotopen Lebertransplantation der Maus

Das Mausmodell der partiellen 2/3 (66%) Hepatektomie ist in der Literatur gut beschrieben, aber ausgedehntere Hepatektomien, die das Small-for-Size-Syndrom nach Lebertransplantation nachahmen, wurden selten verwendet. Wir beschreiben eine erweiterte 78%ige Hepatektomie in einem Mausmodell, die bei gesunden Mäusen zu einer postoperativen Letalität von etwa 50% führt.

Erweiterte 78%-Hepatektomie in einem chirurgischen Mausmodell

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