Single Particle Electron Microscopy Rekonstruktion der Exosom Complex Mit der Random-konische Tilt-Methode

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, die dreidimensionale Struktur des Exosomenkomplexes mit Hilfe der Methode der zufälligen konischen Neigung zu erhalten. Dies wird erreicht, indem zunächst eine dünne Schicht Kohlenstofffilm auf das heilige Kohlenstoffgitter aufgebracht wird, um in einem zweiten Schritt das Stützsubstrat für den Proteinkomplex und die Färbung herzustellen. Die Probe und der Fleck werden auf das Gitter aufgetragen, wodurch die Probe in Schwermetallsalzen vergraben wird.

Anschließend wird eine Elektronenmikroskopie durchgeführt, um Kipppaare von Mikroskopaufnahmen der Probe zu erhalten. Schließlich werden Ergebnisse erzielt, die die dreidimensionale Struktur des Exosomenkomplexes auf der Grundlage einer Bildanalyse mit der Methode der zufälligen konischen Neigung zeigen. Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten haben, da manchmal eine gute Vorbereitung der Probe für die Methode der zufälligen konischen Kippung schwierig ist, ebenso wie das Verfahren für die Bildverarbeitung, die auf View folgt.