Name: Genaue und einfache Messung der pro-inflammatorischen Zytokins IL-1β mit einem Vollblut Stimulation Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-01T18:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Erfahren Sie eine einfache Methode zur Messung pro-inflammatorischer Zytokine wie IL-1β im Vollblut-Stimulation-Assay mit LPS. Diese Technik ermöglicht die schnelle Bewertung von Zytokinspiegeln bei Patienten mit autoinflammatorischen Erkrankungen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde durch die Interne Research Program des National Institute of Arthritis and Bewegungsapparates und Hautkrankheiten der National Institutes of Health unterstützt.

1. Sammlung von Vollblut <ol><li> Besorgen Sie sich ein Minimum von 10 ml peripheres Blut von Betroffenen sowie Alter und Geschlecht gegenübergestellten gesunden Kontrollgruppe. Das venöse Blut muss in Natrium-Heparin enthaltende Vacutainer Blutentnahmeröhrchen gesammelt werden, anstatt die andere Gerinnungshemmer wie EDTA, und umgekehrt mehrmals, um die ordnungsgemäße Mischung mit dem Natrium-Heparin zu gewährleisten. Beachten Sie, dass 10 mL der minimalen Volumen von Vollblut für die Beschichtung Proben in zweifacher Ausfertigung für diesen speziellen Test erforderlich ist. </li><li> Die Proben sollten so bald wie möglich nach der Entnahme für die besten Ergebnisse verarbeitet werden. Allerdings kann Heparinblut bei Raumtemperatur unter schlechten Lichtverhältnissen gelagert werden bis zu 24 Stunden bis zu seiner Verarbeitung (2) sein. </li></ol> 2. Vorbereitung von Whole Blood <ol><li> Centrifuge alle Blutproben bei 3000 Umdrehungen pro Minute (mit Bremse ausgeschaltet) für 10 Minuten bei Raumtemperatur. Ohne Beeinträchtigung der Buffy-Coat, kann das Plasma von der Spitze gesammelt und gespeichert werden für andere experimentelle Zwecke. Plasmaproben können vorübergehend bei -20 ° C oder -80 ° C für die langfristige Lagerung gespeichert </li><li> Sobald Plasma gesammelt wird, waschen Proben durch Resuspendieren der roten Blutkörperchen (RBC) Pellet-und Buffy-Coat mit serumfreiem (unvollständige) RPMI 1640 Medium (bei Raumtemperatur). Gently Pipette die Mischung in der Sammlung Rohre und Transfer zu einem 50 mL konischen Rohr. </li><li> Volumen bis 50 ml mit unvollständigen RPMI 1640 Kulturmedien und vorsichtig umdrehen die Rohre zu einem homogenen Gemisch zu erzeugen. Centrifuge Proben bei 3000 rpm (mit Bremse ausgeschaltet) für 10 Minuten. Sicherstellen, dass es eine klare Trennung, absaugen der Überstand, darauf achten, daß der Buffy-Coat stören. Wiederholen Sie diesen Vorgang 2-4 mal, um sicherzustellen, dass alle Verunreinigungen und gebundenen Zytokine sind, bevor die Stimulation entfernt. </li><li> Nach der letzten Waschung, resuspendieren RBC Pellet-und Buffy-Coat, so dass das Gesamtvolumen 20 ml (für 10 ml Vollblut zunächst gezeichnet) mit unvollständigen RPMI 1640 Medium ist. Das Gesamtvolumen kann bezogen auf das Volumen des Blutes zunächst gezeichnet angepasst werden. </li><li> Mit dem Cellometer Vision, kann verdünnt das Blut, ohne Lyse Erythrozyten, indem Sie die Anzahl der weißen Blutkörperchen Option mit Acridinorange (AO) gezählt werden. Fügen Sie einen Teil verdünntes Blut mit einem Teil AO und Last 20 ul der 1:1-Mischung in einen Einweg-Zählkammer. Die Endkonzentration der AO nach Verdünnung sollte 1μg/mL. </li><li> Passen Sie entsprechend mit unvollständigen RPMI 1640 Medium, um eine endgültige Zellkonzentration von 2,0 x 10 6 Zellen / ml. </li></ol> 3. Stimulation von Vollblut <ol><li> Der Test erfordert ein Minimum von vier Bedingungen (jeweils in doppelter Ausfertigung): unstimulierten, Zugabe von LPS allein die Zugabe von ATP allein, und schließlich LPS plus ATP addiert. 1 ml der vorbereiteten 2,0 x 10 6 Zellen / ml verdünntem Vollblut in die entsprechende Vertiefung einer 24-well Zellkulturschale. </li><li> Die Stimulanzien sollten aufgelöst und bis auf Raumtemperatur gebracht, bevor die Stimulation Assays. Lyophilisierte LPS und ATP sollte nach den Anweisungen des Herstellers rekonstituiert werden. Nach der Zubereitung kann LPS und ATP weiter, um eine ordnungsgemäße Lager-Konzentration mit dem unvollständigen RPMI 1640-Medium verdünnt werden. </li><li> Add LPS, die LPS nur so gut wie die LPS plus ATP auch so, dass die endgültige Arbeitskonzentration von LPS 1 pg / mL ist. Die gesamte Stimulation beträgt 3 Stunden. Allerdings ist Vollblut mit LPS für 2 Stunden und 40 Minuten stimuliert. Die Proben sollten in einem Brutschrank bei 37 ° C und 5% CO 2 platziert werden. </li><li> ATP ist in den verbleibenden 20 Minuten der 3 Stunden Stimulation Zeitraum aufgenommen. Add ATP um die ATP allein und die LPS-und ATP sowie Ort und Proben im Inkubator. Die letzte Arbeit Konzentration von ATP beträgt 2 mm. </li><li> Nach dem 3 Stunden Inkubationszeit, sammeln Überstände durch Aliquotierung jede Probe in ein 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen und anschließend zentrifugiert Proben bei 10000 rpm für 2 Minuten bei Raumtemperatur. Die Überstände auf einen anderen Satz von 1,5 Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> Die Proben können sofort getestet werden oder zwischengelagert bei -20 ° C oder -80 ° C für eine langfristige Lagerung. </li></ol> 4. Cytokinassay <ol><li> Proben, die eingefroren sind notwendig, um auf Raumtemperatur vor der Analyse Gleichgewicht zu bringen. Cytokine Konzentrationen für IL-1βcan anhand einer Vielzahl von Methoden. Wir nutzen die Bio-Plex Pro menschliche Zytokin x-plex-Test mit dem Bio-Plex 200-System, den Anweisungen des Herstellers. In diesem Protokoll sind wir speziell die Messung von IL-1β, jedoch nutzen wir diese Multiplex-Zytokin-Assays, um gleichzeitig zu messen mehrere Zytokine in einem Test mit dem Vorteil der Verwendung eines kleinen Probenvolumen. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse Die Analyse der IL-1β Produktion bei erfolgreicher Stimulation mit LPS und ATP zeigt eine nichtse Antwort abhängig von der Anzahl der Zellen stimuliert. Wir haben festgestellt, dass 2,0 x 10 6 Zellen / ml ausreichend hoher Konzentration, um eine optimale und messbare Konzentration von IL-1β sowie anderer Zytokine (Abbildung 2) zu produzieren. Vollblut-Assays sind nützlich bei der Untersuchung Patienten, die mit autoinflammatorisches Erscheinungsformen zu präsentieren. Diese Patienten können einen Defekt in der angeborenen Immunsystems, die durch eine Überproduktion von IL-1β (wenn im Vergleich zu Kontrollen) nach Stimulation mit LPS allein (Abb. 3) charakterisiert werden kann. <img src="/files/ftp_upload/2662/2662fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Representative Bild von AO Färbung für kernhaltigen weißen Blutkörperchen, um zur Zellkonzentration in verdünntem Vollblut-Proben zu bestimmen. <img src="/files/ftp_upload/2662/2662fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. IL-1β Produktion in Vollblut Überstände von einem gesunden Spender nach Stimulation mit LPS zu erhöhen Zelle Konzentrationen gemessen. Die Proben wurden in dreifacher Ausfertigung analysiert. <img src="/files/ftp_upload/2662/2662fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Repräsentative Ergebnisse der IL-1β Sekretion im Vollblut Überstände von zwei gesunden Kontrollpersonen sowie zwei Patienten mit IL-1β-assoziierten autoinflammatorisches Manifestationen gemessen.

<ol><li>Martinon, F., Mayor, A., Tschopp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammasomes%3A+guardians+of+the+body%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The inflammasomes: guardians of the body.</a> Annu Rev Immunol. 27, 229-265 (2009).</li>
<li>Thurm, C. W., Halsey, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cytokine+production+using+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Measurement of cytokine production using whole blood.</a> Curr Protoc Immunol. 66, 7-18 Forthcoming.</li>
<li>Mariathasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopyrin+activates+the+inflammasome+in+response+to+toxins+and+ATP%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cryopyrin activates the inflammasome in response to toxins and ATP.</a> Nature. 440, 228-232 (2006).</li>
<li>Gabay, C., Lamacchia, C., Palmer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1+pathways+in+inflammation+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">IL-1 pathways in inflammation and human diseases.</a> Nat Rev Rheumatol. 4, 232-241 (2010).</li>
<li>Franchi, L., Elgenbrod, T., Muñoz-Planillo, R., Nuñez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammasome%3A+a+caspase-1-activation+platform+that+regulates+immune+responses+and+disease+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The inflammasome: a caspase-1-activation platform that regulates immune responses and disease pathogenesis.</a> Nat Immunol. 3, 241-247 (2009).</li>
<li>Sims, J. E., Smith, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+IL-1+family%3A+regulators+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The IL-1 family: regulators of immunity.</a> Nat Rev Immunol. 2, 89-102 (2010).</li>
<li>Haug, R., Joø, G. B., Westvik, A. B., Kierulf, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokine+production+and+pattern+recognition+receptor+%28PRR%29+expression+in+whole+blood+stimulated+with+pathogen-associated+molecular+patterns+%28PAMPs%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Chemokine production and pattern recognition receptor (PRR) expression in whole blood stimulated with pathogen-associated molecular patterns (PAMPs.</a> Cytokine. 32, 304-315 (2005).</li>
<li>Netea, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+requirement+for+the+activation+of+the+inflammasome+for+processing+and+release+of+IL-1bin+monocytes+and+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differential requirement for the activation of the inflammasome for processing and release of IL-1bin monocytes and macrophages.</a> Blood. 113, 2324-2335 (2009).</li>
<li>Latz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammasomes%3A+mechanisms+of+activation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immnol%22%5BJournal%5D)">The inflammasomes: mechanisms of activation and function.</a> Curr Opin Immnol. 22, 28-33 (2010).</li>
<li>Masters, S. L., Simon, A., Aksentijevich, I., Kastner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horror+autoinflammaticus%3A+the+molecular+pathophysiology+of+autoinflammtory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Horror autoinflammaticus: the molecular pathophysiology of autoinflammtory disease.</a> Annu Rev Immunol. 27, 621-668 (2009).</li>
</ol>

Die Vollblut-Assay beschrieben ist eine einfache Methode, die genauer imitiert physiologischen Bedingungen zu anderen Techniken, die Zell-Isolierung und umfangreiche Stichprobe Bearbeitung und Manipulation erfordern würde verglichen. Diese Methode nutzt die Cellometer Vision mit AO zum weißen Blutkörperchen im Vollblut zu zählen und daher bietet die Möglichkeit, präzise Standardisierung Proben auf Zell-Zahlen. Es ist zu beachten, dass für diesen Test, Vollblut in Heparin-Natrium-Röhrchen gez...

<table><tbody><tr><td>Blutentnahmeröhrchen mit Natriumheparin</td><td>BD Biosciences</td><td>366480</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640-Medium</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>21870-100</td><td></td></tr><tr><td>Acridinorange</td><td>Invitrogen</td><td>A3568</td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Vision</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td></td><td>Kontaktieren Sie das Unternehmen für Geräteinformationen</td></tr><tr><td>Cellometer-Zellzählkammern</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>CHT4-SD100</td><td></td></tr><tr><td>24-Loch-Zellkulturplatte</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-reines &lt;em&gt;E. coli&lt;/em&gt; K12 LPS</td><td>Invitrogen</td><td>tlrl-eklps</td><td></td></tr><tr><td>Adenosin-5&amp;#180;-triphosphat-Disalz-Hydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A26209</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Plex 200-System</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>Kontaktieren Sie das Unternehmen für Geräteinformationen</td></tr><tr><td>Bio-Plex Pro Human Zytokin x-plex-Assay</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>x-plex-Assays werden nach Maßgabe der gewünschten Zytokine kundenspezifisch hergestellt</td></tr></tbody></table>

genaue und einfache messung der pro-inflammatorischen zytokins il-1β mit einem vollblut stimulation assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Entzündliche Prozesse, die sich aus der Sekretion von löslichen Mediatoren von Immunzellen, die verschiedenen Erscheinungsformen in der Haut, Gelenke und andere Gewebe sowie veränderte Zytokin-Homöostase führen. Das angeborene Immunsystem spielt eine entscheidende Rolle bei der Anerkennung Krankheitserreger und andere endogene Gefahr Reize. Einer der wichtigsten Zytokine durch angeborene Immunsystem Zellen freigesetzt wird Interleukin (IL) -1. Daher verwenden wir eine Vollblut-Stimulation Assays, um die Sekretion von inflammatorischen Zytokinen zu messen und gezielt der pro-inflammatorischen Zytokine IL-1β 1, 2, 3. Patienten mit genetischen Störungen des angeborenen Immunsystems verursacht autoinflammatorisches Syndrome zeigen eine übertriebene Version von reifen IL-1β nach Stimulation mit LPS allein. Um das angeborene Immunsystem Komponente der Patienten, die mit entzündlichen-assoziierten Erkrankungen derzeit zu bewerten, verwenden wir einen spezifischen Immunoassay für die zelluläre Immunantwort zu pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), wie die gram-negative bakterielle Endotoxine zu erkennen, Lipopolysaccharid (LPS ). Diese PAMPs werden durch Erreger recognition receptors (PRR), die auf die Zellen des angeborenen Immunsystems 4, 5, 6, 7 gefunden werden anerkannt. Eine primäre Signal, LPS, in Verbindung mit einem sekundären Signal, ATP, ist notwendig für die Aktivierung der Inflammasom, ein Multiproteinkomplex, dass Pro-IL-1β Prozesse ihrer reifen, bioaktive Form 4, 5, 6, 8, 9, 10. Die Vollblut-Assay erfordert nur minimale Probe Manipulation Zytokin-Produktion zu bewerten, wenn andere Methoden, die arbeitsintensive Isolierung und Kultivierung von spezifischen Zellpopulationen erfordern verglichen. Diese Methode unterscheidet sich von anderen Vollblut Stimulation Assays, sondern als Verdünnen von Proben mit einem Verhältnis von RPMI-Medium, führen wir eine weiße Blutzelle direkt count aus verdünntem Vollblut und damit zu stimulieren eine bekannte Anzahl von weißen Blutzellen in Kultur 2. Die Ergebnisse dieser besonderen Vollblut-Assay zeigen eine neuartige Technik nützlich bei der Aufklärung Patientengruppen präsentiert mit autoinflammatorisches Pathophysiologien.

Wir beschreiben eine einfache Immunoassay auf die Produktion von pro-inflammatorischen Zytokinen wie IL-1 beta Produktion, bei Patienten mit autoinflammatorisches Phänotypen zu messen. Durch Aktivierung von Zellen in Vollblut-Kulturen mit pathogen-associated molecular patterns, speziell mit Lipopolysaccharid kann Zytokinsekretion bequem in Vollblut Überstände ausgewertet werden.

Genaue und einfache Messung der pro-inflammatorischen Zytokins IL-1β mit einem Vollblut Stimulation Assay

Entzündungsprozesse, die aus der Sekretion löslicher Mediatoren durch Immunzellen resultieren, führen zu verschiedenen Manifestationen in der Haut, den Gelenken und anderen Geweben ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, proinflammatorische Zytokine zu messen, die in einem Ganzblut-Stimulationsassay produziert werden. Zunächst werden die zellulären Bestandteile des Vollbluts durch Zentrifugation vom Plasma getrennt, und die weißen Blutkörperchen werden mittels Acridinorange-Färbung gezählt. Anschließend werden die Zellen in einer Platte kultiviert und mit LPS stimuliert, gefolgt von einem TP, um die Zytokinproduktion durch Zellen, die mikrobielle Mustererkennungsrezeptoren exprimieren, auszulösen. Danach werden die Kulturüberstände zu bestimmten Zeitpunkten nach Beginn der Stimulation gesammelt.Abschließend werden die Zytokinkonzentrationen in den Überständen in einem Multiplex-Assay in einer 96-Well-Platte gemessen. Mithilfe dieser einfachen Methode können Variationen in den Konzentrationen proinflammatorischer Zytokine, die von stimulierten Zellen verschiedener Spender produziert werden, schnell bewertet werden. Diese Methode ist besonders nützlich, um eine durch I one vermittelte entzündliche Erkrankung bei Patienten mit pathologisch antiinflammatorischer Manifestation zu identifizieren, insbesondere unter Bedingungen, bei denen das verfügb

accurate-simple-measurement-pro-inflammatory-cytokine-il-1-using

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Video zeigt die Quantifizierung von Entzündungsmediatoren während einer Infektion durch Inkubation von Immunzellen aus menschlichem Lungengewebe mit Haemophilus influenzae. Die Durchflusszytometrie wird verwendet, um die Zytokinfluoreszenz in markierten Lymphozyten zu messen, die mit der Produktion von proinflammatorischen Zytokinen als Reaktion auf eine bakterielle Infektion korreliert.

Quantifizierung von Entzündungsmediatoren in infizierten menschlichen Gewebezellen

Dieses Video zeigt die Quantifizierung der Immunmediator-Spiegel im Extrakt aus der Nasenschleimhautschleimhaut von Neugeborenen. Ein auf Elektrochemilumineszenz basierendes Multiplex-Assay-System misst diese Mediatoren, indem es die Intensität des emittierten Lichts bewertet, wenn es angeregt wird.

Quantifizierung der Immunmediator-Spiegel in der menschlichen Schleimhautschleimhaut

Dendritische Zellen (DCs) sezernieren IL-1β in Reaktion auf TLR8 Anerkennung von synthetischen Purin, R848, gefolgt von NLRP3 Inflammasom Aktivierung mit Nigericin daher, IL-1β kann verwendet werden, um NLRP3 Inflammasom Aktivität zu messen. Die intrazelluläre Zytokin-Färbung, Immunoblotting und ELISA werden verwendet, um NLRP3 Inflammasom Grundieren und Aktivierung über IL-1β Ausdruck genau zu messen.

Aktivierung und Messung der NLRP3 Inflammasom Aktivität mit IL-1β in humanen Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen

Analyse der Tränenfilm hilft Zytokine in verschiedene augenfällige Krankheiten zu studieren. Wulst basierte Multiplex-Assays sind einfach und empfindlich und ermöglichen das Testen von mehreren Zielen in Proben mit kleinen Volumina. Hier beschreiben wir ein Protokoll für Tear Film Zytokin Profilierung eines mit Wulst basierte Multiplex-Assays.

Wulst basierte Multiplex-Assays für die Analyse der Träne Cytokine Profile

Dieses Protokoll beschreibt die Quantifizierung der mehrere Zytokin Ziele gleichzeitig in Gewebekultur Überstände von stimulierten Maus Splenocyten Multiplex-Perle-basierte Immunoassay-Plattform mit einem Durchflusszytometer gesammelt.

Multiplex-Zytokin Profilierung der stimulierten Maus Splenocyten mit Hilfe einer durchflusszytometrischen Bead-basierte Immunoassay-Plattform

Hier präsentieren wir ein Protokoll um die Entwicklung und Validierung eines einzelnen Moleküls Array digitale ELISA Assays, ermöglicht ultra-sensitive Detektion von allen IFN-α-Subtypen in humanen Proben zu beschreiben.

Entwicklung und Validierung eines empfindsamen Einzelmolekül Array digitale Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay für menschliche Interferon-α

Hier beschreiben wir einen Einzellige Proteomic Ansatz um Immune phänotypische und funktionelle (intrazelluläre Zytokin Induktion) bewerten Veränderungen in peripheren Vollblut Proben, über Masse zytometrie analysiert.

Einzellige Analyse der Immunophenotype und Produktion von Zytokinen im peripheren Blut über Masse Zytometrie

Die Verwendung von Referenzreagenzien für Zytokinfreisetzungsassays ermöglicht reproduzierbarere und standardisierte In-vitro-Sicherheitsprofile von immuntherapeutischen monoklonalen Antikörpern. Im Folgenden wird beschrieben, wie Zytokin-Freisetzungsassays zusammen mit einem Referenzreagenzienpanel verwendet werden können, um die Sicherheit einiger therapeutischer monoklonaler Antikörper vorherzusagen.

Verwendung von Referenzreagenzien zur Bestätigung der Robustheit von Zytokin-Freisetzungsassays für die Vorhersage der Sicherheit monoklonaler Antikörper

Das Protokoll beschreibt eine fortschrittliche mikrofluidische Plattform zur quantitativen Messung der Zytokinsekretionsdynamik einzelner mononukleärer Zellen des menschlichen peripheren Blutes. Die Plattform misst bis zu drei Zytokine parallel (IL-6, TNFα und IL-1β) für jede einzelne Zelle, die beispielsweise mit Lipopolysaccharid stimuliert wird.

Mikrofluidischer Ansatz zur Auflösung der gleichzeitigen und sequentiellen Zytokinsekretion einzelner polyfunktioneller Zellen 

Vollblutbasierte Immunoassays bieten ein einfaches und ressourceneffizientes Werkzeug zur Analyse der antigenspezifischen Immunität für Diagnose- und Forschungszwecke. Dieser Artikel bietet ein optimiertes Vollblut-basiertes Protokoll mit dualer Co-Stimulation für eine umfassende Analyse der Immunität des Wirts gegen pilzliche und virale Krankheitserreger, einschließlich einer Version mit geringem Volumen für pädiatrische Patienten und Kleintiere.

Vollblutassay mit dualer Co-Stimulation zur antigenspezifischen Analyse der Immunität des Wirts gegen pilzliche und virale Krankheitserreger

Erfahren Sie eine einfache Methode zur Messung pro-inflammatorischer Zytokine wie IL-1β im Vollblut-Stimulation-Assay mit LPS. Diese Technik ermöglicht die schnelle Bewertung von Zytokinspiegeln bei Patienten mit autoinflammatorischen Erkrankungen.

Genaue und einfache Messung der pro-inflammatorischen Zytokins IL-1β mit einem Vollblut Stimulation Assay

Weitere Videos entdecken