Name: Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) von Venenthrombosen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Lernen Sie das elektrolytische Modell der Vena cava inferior zur Induktion venöser Thrombosen bei Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Thrombusentwicklung unter kontrollierten Bedingungen mit intaktem Blutfluss.

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1. Maus Anästhesieverfahren <ol><li> Die Tiere sind aus ihrem Käfig genommen und in ein Betäubungsmittel präoperativen Induktion Kammer für Gas Induktion mit 2% Isofluran und 100% Sauerstoff mit einer Flussrate von 0,5 Liter pro Minute (Verdampfer gesteuert). </li><li> Mäuse sind in der Narkoseeinleitung Kammer sediert, entfernt von Kammer-und der ventralen Bauch ist mit elektrischen Haarschneider rasiert, gepflegt oder in der Kammer, wenn ein Haar Enthaarungsmittel verwendet wird (1 min). </li><li> Noch unter Sedierung, sie wogen, werden die Augen mit einer sterilen Augensalbe und dann in Rückenlage recumbancy an einem warmen Wasser zirkuliert Heizgerät gelegt unter Vollnarkose mit einer Nase Konus mit Isofluran und Sauerstoff geschmiert. An diesem Punkt der Sauerstoffmenge auf 0,2 Liter pro Minute reduziert. </li><li> Der Bauch ist mit Chlorhexidin-Lösung besprüht (Chlorhexidindiacetat schnell bacterialcidal und persistent) und wischte sich mit steriler Gaze dreimal oder bis zum OP-Gebiet ist sauber. </li></ol> 2. Maus Micro-chirurgischen und Recovery-Verfahren <ol><li> Ein ventralen Mittellinie Schnitt (2 cm) ist mit Iris Schere durch die Haut und Bauchwand Freilegung der Bauch gemacht. Ein steriler Kochsalzlösung getränkt 2x2 in Gaze wird verwendet, um den Darm des Tieres linken Seite widerspiegeln. Eine Maus restrainer ist in Ort ermöglicht die Visualisierung der unteren Hohlvene (IVC) setzen. </li><li> An diesem Punkt ist die Isofluran zu einer Wartung Niveau von 2% reduziert und der Sauerstoff bleibt bei 0,2 Liter pro Minute für den Rest des chirurgischen Eingriffs. </li><li> Stumpfe Präparation wird erleichtert, mit einem sterilen Tupfer Applikator und extra zarte Iris halbgebogen Gewebe Zange. Es muss im Umgang mit Maus Gewebe für sie äußerst fragil eingenommen werden. </li><li> Alle IVC Seitenäste, von der Nierenvenen der iliakalen Bifurkation, werden mit 7-0 nicht-reaktiven Prolene Fäden ligiert. Zurück Niederlassungen blieb Patent. </li><li> Bei der elektrolytischen IVC-Modell (EIM), eine 25G Edelstahl-Nadel, die an einer versilberten Kupferdraht (KY-30 bis 1-GRN, Electrospec, Dover, NJ) in der exponierten caudal IVC, (Abbildung 1) eingefügt und gegen die vordere Wand (Anode) positioniert. </li><li> Ein weiterer Draht wird subkutan implantiert Abschluss der Schaltung (Kathode). </li><li> Ein Strom von 250 μAmps über 15 Minuten wurde mit einem Grass S48 Rechtecksignal Stimulator und ein konstanter Strom-Einheit (Grass Technologies, ein Astro-Med, Inc., West Warwick, RI). Der Gleichstrom führt zur Bildung von toxischen Produkten der Elektrolyse, dass die Endothel-Oberfläche des IVC zur Förderung einer thrombogenen Umwelt und nachfolgende Thrombusbildung erodieren. </li><li> Nach 15 Minuten wird die Nadel entfernt und ein Wattestäbchen wird sanft in Kontakt mit der Umgebung, um die Blutung zu verhindern statt </li><li> In sham Tieren ist die Nadel in die IVC gelegt und dann entfernt, ohne Anwendung des Stroms. </li><li> Die Laparotomie Website wird in einem Zwei-Schicht verschlossen. Unser Labor verwendet 5-0 Vicryl, ein synthetisches Nahtmaterial, in einem kontinuierlichen Muster, um die Bauchdecke zu schließen. Adhesive Hautleim wird verwendet, um die Haut zu schließen. Es gibt keine externen Nähte für die Herausnahme. </li><li> Mäuse werden dann in einer individuellen Maus Käfig wieder, dicht postoperativ (45 Minuten bis 2 Stunden) unter einer Wärmelampe (min Abstand 24 cm entfernt von Käfig) beobachtet, dann wieder an ihren ursprünglichen Wohneinheiten. Schmerzmittel und entzündungshemmende Mittel können verwendet werden, wenn sie nicht mit Studienziel nicht stören. Wissenschaftliche Begründung für Schmerzmittel vorenthalten, Veterinär-und ICUCA Genehmigung erforderlich sind. Unser Labor hat festgestellt, dass Buprenorphin ,0.05-0 .1 mg / kg SQ ein ausgezeichnetes pre-und post-operative Analgetikum für Mäuse ist. Darüber hinaus kann Lidocain bei 4mg/kg (0,4 ml / kg einer 1% igen Lösung) in die Inzisionsstelle infundiert werden, wenn systemische Analgetika können experimentelle Ergebnisse zu verwechseln. </li><li> Wir in der Regel nicht erleben postoperativen Beeinträchtigungen durch DVT. Allerdings können negative post-operative Effekte sind spontane Anästhesie Tod, chirurgische Blutverlust und partielle Parese aufgrund Nerventrauma. Tiere, die nur langsam regenerieren können eingespeist Nutria Gel oder feuchten chow auf dem Boden des Käfigs, das Tier die Genesung zu erleichtern platziert. Tiere mit sever postoperative Komplikationen human eingeschläfert werden. </li><li> Am zugewiesen Zeitpunkt ist die Euthanasie menschlich in Übereinstimmung mit den Empfehlungen der American Veterinary Medical Association Richtlinien zur Euthanasie für Nager gesetzt durchgeführt. </li></ol> 3. Repräsentative Ergebnisse Die EIM ist ein Modell, Thrombus bildet in Gegenwart von kontinuierlichen Blutfluss. Die folgenden Abbildungen zeigen Parameter in diesem Roman Modell untersucht. <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1 definesthe anatomischen Bereich in dem ein 25G EdelstahlNadel, an einem versilberten Kupferdraht (KY-30 bis 1-GRN, Electrospec, Dover, NJ) eingesetzt wird. Beachten Sie, dass ein Lymphknoten fast vorhanden ist und hilft als ein Wahrzeichen der kaudalen IVC zu finden. <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2: Thrombus Gewicht von 2 Tagen nach EIM in verschiedene Stämme. Wie erwartet, war Thrombusgewichts niedriger PAI-1 KO-Mäuse und größere in Hyperkoagulabilität Delta CT-Mäuse (^ CT). <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3: Löslich P-Selektin, einem Hersteller für tiefe Venenthrombose, wurde in verschiedenen Stämmen gemessen. Die niedrigsten Werte wurden in PAI-1 KO Mäusen gefunden, während die höchsten in Hyperkoagulabilität delta CT-Mäusen gefunden wurden. <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig4.jpg" alt="Abbildung 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4 Zusammenhang zwischen Thrombus Gewicht und löslichen P-Selektin wurde in verschiedene Stämme gefunden. Zu beachten ist, in die Gruppe, desto kürzer Thrombus Größe erzeugt, wurde das lösliche P-Selektin nachgewiesen dem niedrigsten (PAI-1 KO-Mäuse). In der Gruppe, der größte Thrombus Größe erzeugt, wurde das lösliche P-Selektin erkannt höchsten (Hyperkoagulabilität delta CT). <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig5.jpg" alt="Abbildung 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 5"> Abbildung 5: Um die Anwesenheit von Blut fließen zu demonstrieren, Ultraschall wurde in Mäusen unterziehen EIM durchgeführt. Abbildung 5 zeigt die Ultraschall in einem Maus-2 Tage nach EIM durchgeführt. Dann wurde die Probe zu ernten. Beachten Sie die, dass der Thrombus Form Thrombusbildung schlage in Anwesenheit von Flow

<ol><li>Diaz, J. A., Hawley, A. E., Alvarado, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104, 366-375 (2010).</li>
<li>Eitzman, D. T., Westrick, R. J., Nabel, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+vitronectin+promote+vascular+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice.</a> Blood. 95, 577-580 (2000).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Barker, J. H., Stikovac, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+human+IgG+antiphospholipid+antibodies+on+an+in+vivo+thrombosis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice.</a> Thromb Haemost. 71, 670-674 (1994).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+thrombosis+in+a+mouse+model+by+IgG%2C+IgM+and+IgA+immunoglobulins+from+patients+with+the+antiphospholipid+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome.</a> Thromb Haemost. 74, 1361-1367 (1995).</li>
</ol>

Die Maus ist eine hervorragende Recherche-Tool für in vivo-Experimente. So sind die Entwicklung von Mausmodellen, die genau imitieren Krankheiten oder pathologischen Bedingungen notwendig. Mehrere Venenthrombose Mausmodellen wurden verwendet, um DVT einschließlich Studie: photochemische (2), Stase (3-4) und mechanisches Trauma (5-6). Allerdings verwenden keines dieser Modelle eine interne endothelial Reiz Thrombus in Gegenwart von kontinuierlichen Blutfluss erzeugen. Die EIM, mit Elektrolyt-Stimulus in der IVC, fördert den venösen Thrombosen durch endotheliale Aktivierung in Gegenwart des Blutflusses (1). Es ist technisch einfach, leicht reproduzierbar und hat eine hohe Überlebensrate (99%). Trotz der Tatsache, dass ein elektrischer Strom verwendet wird, um die Elektrolyse zu schaffen, wird die Wärme nicht erzeugt (1). Die EIM-Modell eng simuliert klinische DVT, und dient daher als ein wertvolles Werkzeug für die Untersuchung der inneren Mechanismen der Thrombusbildung und Auflösung. Die EIM-Modell ist auch für die Weiterentwicklung neuer Therapieansätze gegen Thrombose Krankheit nützlich.

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare (optional) </th></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> ABCD1234 </td><td></td></tr></tbody></table>

elektrolytische inferior vena cava model (eim) von venenthrombosen

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Tiermodelle dienen eine wichtige Rolle in tiefe Venenthrombose (DVT) Forschung, um Thrombenbildung Thrombus Auflösung zu untersuchen und mögliche therapeutische Verbindungen (1) zu testen. Neue Verbindungen in der Behandlung und Prävention von TVT ausgenutzt werden derzeit entwickelt. Die Auslieferung der potenziellen therapeutischen Antagonist Verbindungen an ein betroffenes thrombosierten Vene wurde problematisch. Im Rahmen der therapeutischen Anwendungen, ein Modell, das partielle Stasis nutzt und konsequent erzeugt Thromben innerhalb einer großen Vene wurde vor kurzem gegründet. Die elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) ist Mausmodell der DVT, dass Thrombusbildung in Gegenwart von kontinuierlichen Blutfluss ermöglicht. Dieses Modell erlaubt Therapeutika in Kontakt mit dem Thrombus in einer dynamischen Art und Weise sein, und ist empfindlicher als andere Modelle der DVT (1). Darüber hinaus dieses Thrombose-Modell eng simuliert klinische Situationen der Thrombusbildung und ist ideal, um venöse Endothelzellaktivierung, Leukozytenmigration, venösen Thrombosen, zu studieren und therapeutischen Anwendungen (1) zu testen. Die EIM-Modell ist technisch einfach, leicht reproduzierbar, schafft einheitliche Thromben Größen und ermöglicht einer großen Stichprobe (dh Thrombus und Venenwand), die für analytische Zwecke erforderlich ist.

Die elektrolytische Induktion der endothelialen Aktivierung der inneren Oberfläche der Inferior Vena Cava Ergebnisse im venösen Typ Thrombusbildung durch eine endotheliale Aktivierung und teilweisen Blut-Stase, zwei Komponenten der Virchow-Trias.

Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) von Venenthrombosen

Tiermodelle spielen eine entscheidende Rolle in der Forschung zur tiefen Venenthrombose (TVT), um die Thrombusbildung und die Thrombusauflösung zu untersuchen sowie potenzielle ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, bei Mäusen mittels eines elektrolytischen Modells eines venösen Thrombus in der unteren Vena cava (V. cava inferior oder VCI) einen venösen Thrombus zu induzieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die Bauchhöhle geöffnet wird, um die untere Vena cava (VCI) freizulegen. Anschließend werden die Seitenäste der VCI ligiert.Dann werden eine Anode und eine Kathode eingeführt, und eine Stromquelle wird angelegt, um ein Thrombus zu induzieren. Abschließend wird das Tier verschlossen und zur Genesung freigegeben. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die ein im Vena-cava-inferior-Mausmodell unter Fließbedingungen gebildetes venöses Thrombus sowie eine Korrelation zwischen den Pektin-Konzentrationen und der Größe des Thrombus in verschiedenen Mausstämmen zeigen.Dr. Lucchesi veröffentlichte das Konzept dieser Technik im Jahr 1980 und setzte sie erfolgreich im arteriellen System ein. Als ich dem Labor an der University of Michigan beitrat, wurde mir die Aufgabe übertragen, diese ursprüngliche Technik so zu modifizieren, dass sie im venösen System angewendet werden konnte. Während dieses Prozesses kam mir die Idee, die Nadel nahe der Einmündung der Vena cava inferior einzuführen, basierend auf der Strömungsrichtung.Um eine tiefe Venenthrombose bei einer Maus zu induzieren, anästhesieren Sie das Tier zunächst in einer präoperativen Induktionskammer mit 5 % Isofluran und 100 % Sauerstoff bei einer Flussrate von 0,5 Litern pro Minute. Nachdem die Maus sediert ist, nehmen Sie sie aus der Induktionskammer, rasieren Sie den ventralen Bauchbereich mit einer elektrischen Schermaschine und wiegen Sie anschließend die Maus.Tragen Sie dann Augensalbe auf und legen Sie das Tier unter Vollnarkose mit Isofluran und 100 % Sauerstoff auf den Rücken auf eine wassergeführte Heizplatte. Zur Desinfektion der Schnittstelle sprühen Sie die Bauchregion mit einer Chlorhexidinlösung ein und wischen sie mit steriler Gaze ab. Wiederholen Sie diesen Vorgang dreimal oder bis die Operationsstelle sauber ist.Um die Operation zu beginnen, führen Sie mit einer Iris-Schere einen zwei Zentimeter langen ventralen Mittellinien-Schnitt durch Haut und Bauchwand durch, um die Bauchhöhle freizulegen. Benutzen Sie ein steril mit Kochsalzlösung getränktes zwei mal zwei Zoll großes Gazestück, um den Darm auf die linke Seite des Tieres zu verlagern. Befestigen Sie anschließend einen Mäuserestriktor, um die untere Hohlvene (Vena cava inferior, IVC) freizulegen.Ab diesem Zeitpunkt verwenden Sie eine Erhaltungskonzentration von 2 % Isofluran und 0,2 Litern Sauerstoff pro Minute. Nutzen Sie einen sterilen Applikatorpinsel und besonders feine halbrunde Iris-Debakey-Beißzangen, um eine stumpfe Präparation der Faszie auf beiden Seiten der V. cava inferior durchzuführen, um vollständigen Zugang zur V. cava inferior und ihren Seitenästen zu erhalten. Beachten Sie, dass sich in der Nähe ein Lymphknoten befindet, der als Orientierungspunkt zur Lokalisation der V. cava inferior dienen kann, unter Verwendung von sieben nicht-resorbierbaren Polypropyl-Nähten.Ligieren Sie alle Seitenäste der V. cava inferior von den Nierenvenen bis zur Iliacusbifurkation. Die Rückenäste bleiben geöffnet. Führen Sie als Nächstes eine 25-Gauge-Edelstahlnadel, die mit einem versilberten Kupferdraht verbunden ist, in die freigelegte untere Hohlvene ein und positionieren Sie sie an der vorderen Wand.Dies ist die Anode. Dann implantieren Sie eine weitere Nadel mit einem Draht subkutan, um den Stromkreis zu schließen. Dies ist die Kathode.Unter Verwendung eines Gras-S-48-Quadraturwellenstimulators und einer Konstantstromquelle einen Strom von 250 Mikroampere über einen Zeitraum von 15 Minuten anlegen. Dadurch wird die endotheliale Oberfläche der V. cava inferior (IVC) beschädigt und ein Thrombus zur Kontrolle gebildet. Tiere: Die Nadel 15 Minuten lang in die IVC einführen, ohne Strom anzulegen. Geringfügige Veränderungen, wie kleine schwarze Flecken in der Nähe der Nadel, werden üblicherweise während des Verfahrens beobachtet und bestätigen den Erfolg des Verfahrens.Nach 15 Minuten entfernen Sie die Nadel, indem Sie die Nadel dorsal absenken und das Blut über einen Wattestäbchen oberhalb der Nadeleinstichstelle erlauben, den Lumina der V. cava inferior um die Nadel herum wieder aufzufüllen. Drücken Sie auf die Vene, während Sie die Nadel entfernen. Üben Sie vorsichtig Druck mit dem Wattestäbchen aus, bis die Blutung gestoppt ist.Um die Laparotomiestelle zu schließen, verwenden Sie eine synthetische Naht mit Vicryl 5-0 in kontinuierlicher Nahttechnik zum Verschluss der Bauchdecke. Anschließend verschließen Sie die Haut mit einem Klebeharz. Lassen Sie die Mäuse einzeln in Käfigen unter einer Wärmelampe regenerieren und überwachen Sie sie sorgfältig, bevor Sie sie in ihre ursprünglichen Haltungseinheiten zurückbringen.Das EIM ist ein Modell, das bei kontinuierlichem Blutfluss ein Thrombus bildet. Die folgenden Abbildungen zeigen Parameter, die in diesem neuartigen Modell untersucht wurden. Das Thrombusgewicht, eine Messgröße für die Größe des Thrombus, ist zwei Tage nach EIM in Mausstämmen wie erwartet dargestellt.Das Thrombusgewicht war bei PA I-einem Knockout-Mäusen niedriger, von denen bekannt ist, dass sie eine erhöhte Fibrinolyse aufweisen und infolgedessen ein kleineres Thrombus bilden, und höher bei hyperkoagulablen Delta-CT-Mäusen unter Verwendung eines wasserlöslichen Pektins vom Typ ELA. Ein Marker für die tiefe Venenthrombose wurde in verschiedenen Stämmen gemessen. Die niedrigsten Werte wurden bei PI-einem Knockout-Mäusen gefunden, während die höchsten Werte bei hyperkoagulablen Delta-CT-Mäusen beobachtet wurden.Dieses Diagramm zeigt die Korrelation zwischen Thrombusgewicht und löslichem Pektin in verschiedenen Mausstämmen bei PI-eins-Knockout-Mäusen, die eine kleinere Thrombosgröße erzeugten. Das nachgewiesene lösliche Pektin war am niedrigsten, während die delta-CT-Mäuse die größte Thrombosgröße erzeugten und ihre nachgewiesenen löslichen Pektinspiegel am höchsten waren. Um das Vorhandensein von Blutfluss zu demonstrieren, wurde bei Mäusen, die einer EIM unterzogen wurden, eine Ultraschalluntersuchung durchgeführt.Diese Abbildung zeigt die Ultraschallergebnisse einer Maus zwei Tage nach EIM. Beachten Sie, dass die Form des Thrombus darauf hindeutet, dass er in Gegenwart von Fluss gebildet wurde. Während dieses Verfahrens ist es wichtig, den Patienten stets im Blick zu behalten.Hypothermie ist der wichtigste Faktor, der das Tier in seiner postoperativen Phase schwerwiegend beeinträchtigen und sowohl sein Leben als auch Ihre Forschung gefährden kann.

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