Name: Bioluminescent Reporter Phage für den Nachweis von Kategorie A bakteriellen Erregern (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: Erfahren Sie die Detektion von Yersinia pestis mit biolumineszenten Reporter-Phagen. Diese Methode ermöglicht eine schnelle Identifizierung des Erregers durch spezifische Bindung und Signaltransduktion in wenigen Minuten.

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Diese Arbeit wurde von der Small Business Innovation Research-Programm des National Institutes of Health (NIAID, 1R43AI082698-01) und der USDA National Institute of Food and Agriculture (NIFA, 2009-33610-20028) unterstützt.

1. Y. pestis Platte Impfung <ol><li> Streak Y. pestis A1122 (BeiResources # NR15) Stammkulturen auf Luria-Bertani (LB)-Agar (Miller). Verwenden Sie sterile Technik und erfüllen alle Y. pestis Manipulationen in einer Klasse-II-Typ A Biosicherheitswerkbank. Y. pestis A1122 ist ein Biosafety Level (BSL) 2 ausgeschlossen wählen Agent Belastung. Es fehlt sowohl die 75 kb Paar Low-Calcium-Reaktion (LCR) Virulenzplasmid und pgm locus, dass für die Virulenz erforderlich sind. Wachsen Sie Y. pestis bei 28 ° C für 48 h in einer statischen temperaturgeregelten Luft Inkubator. Die Wachstumsrate von Y. pestis ist langsam mit einer Generationszeit von 1,25 h 9. </li></ol> 2. Y. pestis flüssigen Medien Impfung <ol><li> Übertragen einer einzigen Y. pestis Kolonie in eine sterile 17 x 100 mm Kultur Röhrchen mit 2 ml LB-Medium mit einer sterilen Impföse Metall. Wählen Sie eine Kolonie, die eine einheitliche Größe ist, ist bezeichnend für die anderen Kolonien, und sich deutlich von dem Rest der Kolonien auf der Platte getrennt. Vortex Tube kurz und wachsen bei 28 ° C für ca. 20 h in einem Schüttelinkubator (225 rpm). </li></ol> 3. Y. pestis Auswuchs, Reporter Phagen hinaus und Biolumineszenz-Erkennung <ol><li> Verdünnen Sie die Nacht Y. pestis Kultur 1:20 in frischem LB-Medium in einem 50 ml Falcon-Röhrchen (z. B. 500 ul der Zellen in 9,5 ml Medium) und wachsen bei 28 ° C unter Schütteln (225 rpm). Wachsen, bis eine optische Dichte bei 600 nm (A 600) von 0,2 erreicht ist (ca. 5 h). Aktiv wachsende Zellen sind zu bevorzugen für den Nachweis, da die Fähigkeit des Phagen zu transduzieren einem biolumineszierenden Reaktion auf die Lebensfähigkeit und die Fitness des Wirtes Bakterien korreliert ist. Dennoch hat das Detektionssystem konnte gezeigt werden, kompatibel mit Zellen in allen Phasen des Wachstumszyklus 7 geerntet. </li><li> Generieren Sie das Substrat, die für die Biolumineszenzreaktion durch Herstellung einer 2% n-Decanal Lösung. Mix 200 ul n-Decanal mit 9,8 ml LB-Brühe. Vortex kräftig 5 s. Prime der Mikroplatten-Luminometer Injektor mit 2 ml der 2%-n-Decanal Lösung. Pre-set das Luminometer auf 67 ul der Decanal Lösung für jede Mikrotiterplatten und dann autoinject sofort lesen Sie die Probe für 10 s. </li><li> Dispense 1 mL Aliquots von LB-Medium in 3 Kulturröhrchen. Add 20 uL des Reporters Phagen-Stammlösung (stock von 5 x 10 9 Plaque-bildenden Einheiten [PFU] / ml) in jedes Röhrchen, die Phagen-und Medien-alone-Proben dient als negative Kontrolle. In Abwesenheit von Y. pestis-Zellen, sollte die Zugabe des Reporters Phagen nicht entlocken eine Biolumineszenz Antwort. </li><li> Dispense 1 mL Aliquots der Y. pestis Kultur (aus Schritt 3.1) in 6 Kulturröhrchen. Add 20 uL des Reporters Phagenstock bis 3 der Kulturen (Testkulturen). Die restlichen 3 Kulturen dienen als "Zellen allein" Negativ-Kontrolle (Hintergrund autobioluminescence). Mix Kulturen durch Vortexen kurz, und die Ernte 200 ul von jeder Probe (für die Zeit 0 zu lesen) und verzichten in eine weiße 96-well Mikrotiterplatten. Inkubieren Sie die verbleibenden Kultur bei 28 ° C unter Schütteln (225 rpm). </li><li> Messen Sie die Zeit 0 Muster für Biolumineszenz (relative light units, RLU) mit dem Mikrotiterplatten-Luminometer. </li><li> Ernte 200 ul jeder Probe nach 10, 20, 30, 40, 50 und 60 min post-Reporter Phagen hinaus und messen Sie die Probe für die Biolumineszenz. Wenn Y. pestis Zellen vorhanden sind, wird der Reporter Phagen spezifisch an die Zellen binden, injizieren ihre DNA, und die Gastgeber der Transkription und Translation Maschinen zu transkribieren und übersetzen die luxAB Reportergene (Abbildung 1). </li><li> Die Stärke des Signals und der Signal-Response-Zeit ist proportional zu der Anzahl der Zellen zu präsentieren. Bei hohen Konzentrationen von Zellen (10 5 -10 8 CFU / ml), einen signifikanten Anstieg in RLU im Vergleich zu den Kontrollen sollten innerhalb von 20 min deutlich. Am unteren Zelle Konzentrationen (10 2 -10 4 KBE / ml), sollte eine deutliche Steigerung in RLU werden innerhalb von 40-60 min deutlich. </li><li> Alternativ zur Erkennung ohne die Notwendigkeit für Y. beschleunigen pestis Auswuchs, eine Kolonie von einer frisch gewachsenen Platte gemischt (durch Vortexen) direkt in ein 1,5 ml Eppendorf-Röhrchen mit 200 ul LB-Brühe, Beherbergung der Reporter Phagen werden. Dosieren Sie die Zelle / Phagen Mischung in eine Vertiefung einer Mikrotiterplatte. Inkubieren Sie die Mikrotiterplatte bei 28 ° C und lesen Sie die Probe für die Biolumineszenz nach 60 min (single Zeitpunkt nur). </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse: Ein Vertreter Zeitverlauf Experiment Reporter Phagen-vermittelte Erkennung von Y. pestis ist in Abbildung 2 dargestellt. Die negativen Kontrollen von 1) Phagen allein (keine Zellen), oder 2)-Zellen allein (ohne Phagen) bieten Baseline-Wertes der Biolumineszenz von ca. 20 RLU während der 60 min inkl.ubation (Ausgangswerte sind Luminometer spezifisch). Im Gegensatz dazu ist eine Zunahme der Biolumineszenz für die Testproben (reporter Phagen und Zellen) bei 15 min nach dem Phagen Neben evident. Die Signalstärke sollte stetig über 60 min. Inkubationen für längere Zeit (über 80 min), wird in ein Signal, das von der Spitze Signal aufgrund vermittelte Lyse der Wirtszellen Phagen Rückgang führen wird. Ähnliche Ergebnisse werden bei einer Inkubationstemperatur von 37 ° C gewonnen wurde, obwohl die optimale Temperatur für Y. pestis Wachstum beträgt 28 ° C 9. <img src="/files/ftp_upload/2740/2740fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Phage-vermittelte Biolumineszenz Detektion von Y. pestis. Zum Zeitpunkt 0, Reporter Phagen und Zellen wurden gemischt, bei 28 ° C, und Biolumineszenz (RLU) wurde im Laufe der Zeit überwacht. Ein signifikanter Anstieg in RLU (* Studenten t-Test, p &lt;0,05) liegt auf der Hand innerhalb von 15 min.

<ol><li>Darling, R. G., Catlett, C. L., Huebner, K. D., Jarrett, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Threats+in+bioterrorism.+I%3A+CDC+category+A+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Med+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Threats in bioterrorism. I: CDC category A agents.</a> Emerg Med Clin North Am. 20, 273-309 (2002).</li>
<li>Chu, M. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChu%2C+MC+%22Laboratory+manual+of+plague+diagnostic+tests.%22">Laboratory manual of plague diagnostic tests.</a>. , Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta. (2000).</li>
<li>, (1999).</li>
<li>Inglesby, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthrax+as+a+biological+weapon%2C+2002%3A+updated+recommendations+for+management%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Anthrax as a biological weapon, 2002: updated recommendations for management.</a> JAMA. 287, 2236-2252 (2002).</li>
<li>Schuch, R., Fischetti, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+genomic+analysis+of+the+Wbeta+and+gamma+phages+infecting+Bacillus+anthracis%3A+implications+for+evolution+of+environmental+fitness+and+antibiotic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Detailed genomic analysis of the Wbeta and gamma phages infecting Bacillus anthracis: implications for evolution of environmental fitness and antibiotic resistance.</a> J Bacteriol. 188, 3037-3051 (2006).</li>
<li>Garcia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+sequence+of+Yersinia+pestis+bacteriophage+phiA1122+reveals+an+intimate+history+with+the+coliphage+T3+and+T7+genomes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">The genome sequence of Yersinia pestis bacteriophage phiA1122 reveals an intimate history with the coliphage T3 and T7 genomes.</a> J Bacteriol. 185, 5248-5262 (2003).</li>
<li>Schofield, D. A., Molineux, I. J., Westwater, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioluminescent+phage+for+detection+of+Yersinia+pestis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioluminescent phage for detection of Yersinia pestis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 47, 3887-3894 (2009).</li>
<li>Schofield, D. A., Westwater, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phage-mediated+bioluminescent+detection+of+Bacillus+anthracis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Phage-mediated bioluminescent detection of Bacillus anthracis.</a> Journal of Applied Microbiology. 107, 468-478 (2009).</li>
<li>Chu, M. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChu%2C+MC+%22CDC%3A+Basic+laboratory+protocols+for+the+presumptive+identification+of+Yersinia+pestis%22">CDC: Basic laboratory protocols for the presumptive identification of Yersinia pestis</a>. , Centers for Disease Control and Prevention. 1-19 (2001).</li>
<li>Gunnison, J. B., Larson, A., Lazarus, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+differentiation+between+Pasteurella+pestis+and+Pasteurella+pseudotuberculosis+by+action+of+bacteriophage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Rapid differentiation between Pasteurella pestis and Pasteurella pseudotuberculosis by action of bacteriophage.</a> J Infect Dis. 88, 254-255 (1951).</li>
<li>Lazarus, A. S., Gunnison, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Action+of+Pasteurella+pestis+Bacteriophage+on+Strains+of+Pasteurella%2C+Salmonella%2C+and+Shigella%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">The Action of Pasteurella pestis Bacteriophage on Strains of Pasteurella, Salmonella, and Shigella.</a> J Bacteriol. 53, 705-714 (1947).</li>
<li>Sergueev, K. V., He, Y., Borschel, R. H., Nikolich, M. P., Filippov, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+Yersinia+pestis+using+amplification+of+plague+diagnostic+bacteriophages+monitored+by+real-time+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of Yersinia pestis using amplification of plague diagnostic bacteriophages monitored by real-time PCR.</a> PLoS One. 5, e11337-e11337 (2010).</li>
</ol>

Diese Methode zeigt die Fähigkeit des Reporters Phagen schnell erkennen Y. pestis, da die Reporter Phagen können transduzieren eines Biolumineszenz-Signal Antwort auf kultivierten Y. pestis-Zellen innerhalb von 20 min nach dem Phagen hinaus. Der Reporter Phagen ist auch in der Lage direkt nachzuweisen Y. pestis in klinischen Matrizen, ohne die Voraussetzung der Isolation und der anschließende Kultivierung 7. Im Vergleich zu den Standard-Phagen-Lyse-Assays die in der Regel 48 h für d...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th></tr><tr><td> Difco LB-Agar, Miller </td><td> VWR </td><td> 90003-346 </td></tr><tr><td> Difco LB Brühe, Miller </td><td> VWR </td><td> 90003-350 </td></tr><tr><td> 17 x 100 mm Kulturröhrchen </td><td> USA Scientific </td><td> 1485-0810 </td></tr><tr><td> n-Decanal </td><td> Sigma </td><td> D7384 </td></tr><tr><td> Veritas Mikroplatten-Luminometer </td><td> Turner Biosystems </td><td> 9100-001 </td></tr><tr><td> Microlite Mikrotiterplatten 96-Well-Platte </td><td> VWR </td><td> 62402-984 </td></tr></tbody></table>

&quot;bioluminescent &#39;reporter phage für den nachweis von kategorie a bakteriellen erregern

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

Yersinia pestis und Bacillus anthracis sind Kategorie A bakterielle Erreger, die die Erreger der Pest und Milzbrand sind jeweils 1. Obwohl das natürliche Vorkommen beider Krankheiten "ist jetzt relativ selten sind, ist die Möglichkeit terroristischer Gruppen mit diesen Erregern als Biowaffe Echtzeit. Wegen der Krankheit innewohnende Kommunikationsfähigkeit, schnelle klinischen Verlauf und eine hohe Sterblichkeitsrate, ist es entscheidend, dass ein Ausbruch schnell erkannt werden. Deshalb Methoden, die eine schnelle Erkennung und Diagnose stellen sind unerlässlich, um eine sofortige Umsetzung der Maßnahmen des Gesundheitswesens und die Aktivierung des Krisenmanagements gewährleisten. Rekombinante Phagen-Reporter kann einen schnellen und spezifischen Ansatz für den Nachweis von Y. pestis und B. anthracis. Die Centers for Disease Control and Prevention nutzen derzeit das klassische Phagen Lyse-Assays für die bestätigten Identifizierung dieser bakteriellen Erregern 2-4. Diese Assays profitieren von natürlich vorkommenden Phagen, die spezifisch und lytisch sind für ihre bakteriellen Wirten. Nach Wachstum über Nacht der kultivierten Bakterien in Gegenwart der spezifischen Phagen, bietet die Bildung von Plaques (bakterielle Lyse) eine positive Identifikation der bakteriellen Ziel. Obwohl diese Tests robust sind, leiden sie unter drei Mängel: 1) sie sind im Labor basiert, 2) die sie benötigen bakterielle Isolierung und Kultivierung von den verdächtigen Probe, und 3) nehmen sie 24-36 h in Anspruch nehmen. Um diese Probleme anzugehen, wurden rekombinante "light-Tag"-Reporter Phagen genetisch durch die Integration der Vibrio harveyi luxAB Gene in das Genom von Y. entwickelt pestis und B. anthracis spezifische Phagen 5-8. Die daraus resultierende luxAB Reporter Phagen konnten ihre spezifische Ziel von schnell zu erkennen (in Minuten) und sensibel Übertragung einer Biolumineszenz Phänotyp an den Empfänger-Zellen. Wichtig ist, war die Detektion entweder mit kultivierten Zellen oder Empfänger mit Mock-infizierte klinische Proben 7 erhalten. Zu Demonstrationszwecken hier beschreiben wir das Verfahren für die Phagen-vermittelte Erkennung eines bekannten Y. pestis isolieren mit einem luxAB Reporter Phagen von der CDC Pest diagnostische Phagen ΦA1122 6,7 (Abb. 1) konstruiert. Eine ähnliche Methode, mit geringfügigen Änderungen (zB Änderung des Wachstums Temperatur und Medien), kann für den Nachweis von B. verwendet werden anthracis-Isolate mit der B. anthracis Reporter Phagen Wβ: luxAB 8. Die Methode beschreibt die Phagen-vermittelte Transduktion eines biolumescent Phänotyp angebaut Y. pestis Zellen, die anschließend gemessen werden mit einem Mikrotiterplatten-Luminometer. Die wesentlichen Vorteile dieser Methode gegenüber der traditionellen Phagen Lyse-Assays ist die einfache Handhabung, die schnelle Ergebnisse, und die Möglichkeit, mehrere Proben gleichzeitig Test in einer 96-well Mikrotiterplatten-Format. <img src="/files/ftp_upload/2740/2740fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Erkennung schematisch. Die Phagen werden mit der Probe vermischt, infiziert der Phage die Zelle, luxAB ausgedrückt sind, und die Zelle bioluminesces. Probenvorbereitung ist nicht notwendig, die Phagen und Zellen vermischt und anschließend für Licht gemessen.

Eine einfache Methode zur Identifizierung der prioritären bakteriellen Erregern ist gentechnisch Reporter Phagen verwenden. Diese Reporter-Phagen, die spezifisch für ihre besonderen Wirtsarten sind, sind in der Lage schnell Transduktion eines Biolumineszenz-Signal Antwort auf Wirtszellen. Hier beschreiben wir die Verwendung von Reporter Phagen für den Nachweis von<em&gt; Yersinia pestis</em&gt;.

&quot;Bioluminescent &#39;Reporter Phage für den Nachweis von Kategorie A bakteriellen Erregern

Yersinia pestis und Bacillus anthracis sind bakterielle Pathogene der Kategorie A, die jeweils die Erreger der Pest bzw. des Milzbrandes sind 1. ...

Yesinia Pestis und Bacillus Anthrax sind bakterielle Erreger der Kategorie A, die jeweils die Pest und Milzbrand verursachen. Obwohl das natürliche Auftreten beider Krankheiten heutzutage relativ selten ist, besteht die reale Möglichkeit, dass terroristische Gruppen diese Erreger als Biowaffe einsetzen. Dieses Video demonstriert eine Methode zum Nachweis und zur Identifizierung von Yersinia pestis.Zunächst wird das Mikroorganismus auf Agarplatten und in flüssigen Medien kultiviert. Anschließend wird ein y pesti-spezifischer Reporter-pH zur Kultur gegeben. Der Reporter-pH enthält die Gene, die für die bakterielle Luciferase, luxE AB, in seinem Genom kodieren.Wenn Y. pestis-Zellen vorhanden sind, bindet der Reportersphage spezifisch an die Zelle, injiziert seine rekombinante DNA, die die luxAB-Gene trägt, und nutzt die transkriptionellen und translationalen Mechanismen des Wirts, um die luxAB-Reportergene zu transkribieren und zu translatieren. Die Ergebnisse zeigen, dass die Proben ein biolumineszentes Phänotyp angenommen haben, was darauf hinweist, dass das unbekannte Mikroorganismus positiv als Yersinia pestis identifiziert wurde. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehen

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Methoden für die Biolumineszenz-Bildgebung von bakteriellen Infektionen in lebenden Tieren beschrieben. Krankheitserreger werden geändert, um auszudrücken Luciferase ermöglicht optische Ganzkörperbildgebungssysteme von Infektionen in lebenden Tieren. Tiermodelle können mit Luciferase exprimierenden Krankheitserreger infiziert werden und die daraus resultierende Verlauf der Erkrankung visualisiert in Echtzeit durch Biolumineszenz-Bildgebung.

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Wir haben vor kurzem einen neuartigen Ansatz zur Erzeugung von fluorogenen DNAzym Sonden, die angewendet zur Einrichtung eine einfache, "Mix-and-read" Fluoreszenz-Assay für die bakterielle Nachweis kann berichtet werden. Diese speziellen DNA-Sonden katalysieren die Spaltung eines Chromophors-modifizierten DNA-RNA-chimären Substrat in Gegenwart von rohem extrazellulären Mischung (CEM) von einem bestimmten Bakteriums fort, wodurch Nachweis von Bakterien in Fluoreszenz-Erzeugungseinheit erzeugt...

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Bioluminescent Bakterielle Imaging<em&gt; In Vivo</em

Quelle: de Vries, C. R., et al., Ein verzögertes Impfungsmodell der chronischen Wundinfektion von Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020).Dieses Video demonstriert eine biolumineszente Bildgebungstechnik zur Überwachung des Verlaufs bakterieller Infektionen in einem lebenden Mausmodell. Pathogene Bakterien, die mit dem luxABCDE-Reportersystem konstruiert wurden, senden Licht an der Infektionsstelle aus, was die Visualisierung metabolisch aktiver Bakterien ermöglicht. Durch die Abbildung...

Biolumineszenzbildgebung bakterieller Infektionen bei Mäusen

Dieses Video zeigt die Reporterenzym-Fluoreszenz (REF) Bildgebung für den in vivo Nachweis von Mycobacterium tuberculosis-Infektionen. Den infizierten Mäusen wird intraperitoneal ein Substrat für die REF-Bildgebung injiziert. Nach der Hydrolyse durch ein bakterielles β-Lactamase-Enzym emittiert das Substrat Fluoreszenz, deren Nachweis die Bewertung der Infektion erleichtert.

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Bakterien produzieren sezernierten Verbindungen, die das Potenzial, die Physiologie der Mikroorganismen ihre Nachbarn beeinflussen. Hier beschreiben wir eine Co-Kultur Bildschirm, der Nachweis solcher chemisch vermittelte Inter Wechselwirkungen durch Mischen von Bodenmikroben mit fluoreszierenden Reporter-Transkriptions Stämmen von Bacillus subtilis auf festen Medien ermöglicht.

Mit Cokultur zur Erkennung chemisch vermittelte Interspezies-Interaktionen

Erweiterung der Grundlagen und Anwendbarkeit der Fluoreszenz von Unbound Anregung von Lumineszenz (FUEL) durch Vermessung der einschlägigen Grundsätze und demonstriert seine Kompatibilität mit einer Vielzahl von Fluorophore und Antikörper-bezogene Bedingungen.

A Step Beyond BRET: Fluoreszenz von Unbound Anregung von Lumineszenz (FUEL)

Ein detailliertes Protokoll von einem Maus-Modell für Enterohemorrhagic E. Coli (EHEC) Besiedlung durch mit Hilfe von Bakterien mit der Bezeichnung der Biolumineszenz wird vorgestellt. Die Erkennung dieser biolumineszenten Bakterien durch eine nicht-invasive in Vivo imaging-System mit lebenden Tieren kann unser gegenwärtige Verständnis der EHEC Besiedlung voraus.

Erkennung von Enterohemorrhagic Escherichia Coli Besiedlung in murinen Host durch nicht-invasive In Vivo Biolumineszenz-System

Biolumineszente Bakterien regulieren Licht Produktion durch eine Vielzahl von Mechanismen, wie z. B. Quorum sensing. Diese neuartige Methode ermöglicht die in Situ -Untersuchung von Biolumineszenz und die Korrelation der Lichtemission, Zelldichte. Eine künstliche Biolumineszenz Escherichia coli System ermöglicht die Charakterisierung des Lux -Operons, Lux Proteine und deren Zusammenspiel.

In Situ Messung und Korrelation der Zelldichte und Lichtemission von Biolumineszenten Bakterien

Hier beschrieben ist eine Methode zur Analyse von bakteriellen Genexpression in tierischem Gewebe auf zellulärer Ebene. Diese Methode bietet eine Ressource für das Studium der phänotypische Vielfalt innerhalb einer Bakterienpopulation in Reaktion auf die Umwelt Gewebe während einer Infektion auftreten.

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Hier beschreiben wir ein Verfahren, das den organweiten Nachweis pathogener Bakterien während der Infektion und die Quantifizierung der fluoreszierenden Reporteraktivitäten ermöglicht.

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"Bioluminescent 'Reporter Phage für den Nachweis von Kategorie A bakteriellen Erregern

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