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Krebsforschung
0 Aufrufe • 2:53 Min. • April 30th, 2023
Folatrezeptoren sind membranassoziierte Glykoproteine, die von der Mehrheit der Eierstockkrebszellen überexprimiert werden. Die Nutzung dieser Rezeptoren ermöglicht die gezielte Abgabe von diagnostischen Nanopartikeln in die Krebszellen.
Beginnen Sie mit einer Suspension der gewünschten Folsäure-gekappten Nanopartikel-Kontrastmittelkonjugate. Geben Sie diese Nanopartikelsuspension in eine adhärente Kultur von Eierstockkrebszellen. Inkubieren Sie die Kultur für den gewünschten Zeitraum.
Die mit den Nanopartikeln funktionalisierte Folsäure hilft, die auf den Krebszellen exprimierten Folatrezeptoren zu erkennen, und fördert die selektive Bindung von Nanopartikel-Konjugaten an die Zellen. Anschließend invagint die Plasmamembran ein und erleichtert die zelluläre Aufnahme und Akkumulation von Nanopartikeln.
Ernte die Krebszellen. Als nächstes zentrifugieren Sie, um die Zellen von dem Überstand zu trennen, der alle ungebundenen Nanopartikel enthält. Entsorgen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Nanopartikel-tragenden Zellen in einem geeigneten Puffer für nachgeschaltete Anwendungen.
Mischen Sie zunächst die mit Folsäure überzogenen Kupfersulfid-Nanopartikel in der richtigen Konzentration in frischen RPMI-Medien. Geben Sie diese Nanopartikellösung in jede Vertiefung der vorbereiteten 24-Well-Platte, die SKOV-3-Zellen in einer Konzentration von 400 Mikrogramm pro Milliliter enthält. Inkubieren Sie bei 37 Grad Celsius mit 5 % Kohlendioxid für zwei Stunden.
Danach trypsinisieren Sie die Zellen mit 0,5 Millilitern 0,25% Trypsin und EDTA. Um das Trypsin zu neutralisieren, fügen Sie mindestens 1 Milliliter folsäurefreies RPMI 1640 vollständiges Wachstumsmedium hinzu und zentrifugieren Sie die Zellen bei 123 x g für sechs Minuten. Um die Zellen zu waschen, entfernen Sie den Überstand.
Resuspendieren Sie die Zellen in 2 Millilitern PBS und zentrifugieren Sie sie sechs Minuten lang bei 123 x g. Wiederholen Sie diesen Waschschritt zweimal, um alle ungebundenen Nanopartikel zu entfernen.
Dann resuspendieren Sie die Zellen mit 1 bis 2 Millilitern einer 2%igen Tween-Lösung in PBS. Zählen Sie die Zellen mit einem Hämozytometer und Trypanblau. Die Zellen werden in einer Lösung von 2 % Tween und PBS auf die für den Nachweis gewählte Konzentration verdünnt.