Isolierung von Mesothelzellen: Eine Technik zur Isolierung primärer Mesothelzellen aus menschlichen Omentumgewebeproben

Menschliche primäre Mesothelzellen (HPMCs) kleiden viele viszerale Organe wie das Omentum oder die Fettgewebeschicht in der Bauchhöhle aus.

Um die Mesothelzellen zu isolieren, tauchen Sie zunächst eine menschliche Omentumprobe in einen geeigneten Puffer, um die überschüssigen roten Blutkörperchen oder Erythrozyten zu entfernen. Anschließend das Omentum in eine Glasschale geben und in Stücke hacken. Dadurch wird das Gewebe dissoziiert und HPMCs zusammen mit den kontaminierenden Erythrozyten freigesetzt.

Übertragen Sie die Stücke in eine konische Röhre und lassen Sie sie für die gewünschte Zeit ruhig stehen. Das zerkleinerte Gewebe, das reich an Fett geringer Dichte ist, steigt nach oben, während sich die dichten Zellbestandteile unten absetzen. Als nächstes saugen Sie die Flüssigkeit am Boden, die HPMCs und RBCs enthält, in ein frisches Röhrchen ab.

Zentrifuge, um die Zellen zu sammeln. Entfernen Sie den pufferhaltigen Überstand. Resuspendieren Sie das Pellet in einem mesothelialen Wachstumsmedium und inkubieren Sie es für die gewünschte Dauer. Das Medium erleichtert das selektive Wachstum von HPMC gegenüber Erythrozyten.

Beobachten Sie die Zellen mit einem Lichtmikroskop, um das Wa