Modellierung der Besiedlung von Ovarialkarzinomzellen mit Omentum: Eine ex vivo Methode zur Etablierung der Milchfleckenbesiedlung von fluoreszenzmarkierten Ovarialkarzinomzellen in murinen Omentum-Explantaten

Das Omentum, ein fettreiches Gewebe innerhalb der Bauchhöhle, besteht aus Fettdepots, die eine geeignete Mikroumgebung für metastasierende Krebszellen bieten, um sich anzusiedeln und Sekundärtumore zu bilden. Um diese Besiedlung ex vivo zu untersuchen, positionieren Sie zunächst einen permeablen membranösen Zellkultureinsatz in einer Kulturplatte.

Tragen Sie einen Gewebekleber auf den inneren Bereich der Einlegebahn auf. Legen Sie ein Maus-Explantat auf den Klebstoff, um das Gewebe zu immobilisieren. Säen Sie vorsichtig eine Suspension von fluoreszenzmarkierten Eierstockkrebszellen auf das Omentum.

Füllen Sie dann die Seiten der Vertiefung mit einem geeigneten Medium, um das Zellwachstum zu ergänzen, und inkubieren Sie für die gewünschte Zeit. Das omentale Gewebe enthält spezialisierte Strukturen, die als Milchflecken bezeichnet werden, bei denen es sich um Cluster von Immunzellen handelt, die um Netzwerke von Blutgefäßen gedrängt sind. Diese Immunzellen sezernieren bestimmte chemische Faktoren, die Krebszellen anziehen und ihre Einnistung fördern. Die kolonisierten Krebszellen vermehren sich und simulieren metastasierende Zustände.

Entsorgen Sie abschließend die ausgegebenen Medien. Beobachten Sie die Kultur mit einem Fluoreszenzmikroskop, um fluoreszierende Krebszellkolonien im Omentalgewebe zu beurteilen.

Züchten und bereiten Sie fluoreszenzmarkierte Zellen vor und resuspendieren Sie sie in einer Konzentration von 2 Millionen Zellen pro Milliliter. Tragen Sie ca. 6 Mikroliter des Gewebeklebers auf die Membran des Kultureinsatzes auf und lassen Sie ihn an der Luft trocknen. Waschen Sie die Membran dann zweimal mit sterilem Wasser, um überschüssigen Klebstoff zu entfernen, bevor Sie die Membranen unter einer laminaren Haube an der Luft trocknen.

Schneiden Sie die Omenta vorsichtig aus und befestigen Sie sie mit einer sterilen Pinzette an der mit Klebstoff beschichteten Membran. Nachdem Sie das Gewebe eine Minute lang an der Membran haften gelassen haben, geben Sie 500 Mikroliter der Zellsuspension auf jedes Omentum in jedem Kultureinsatz.

Füllen Sie dann den Bereich um die Transwell-Kammer mit 2,5 Millilitern DME/F-12-Medien. Inkubieren Sie die Omenta mit Zellsuspension für sechs Stunden bei 37 Grad Celsius in einer Umgebung mit 5 % CO2. Entfernen Sie vorsichtig die Omenta und waschen Sie sie mit etwa 10 Millilitern PBS. Visualisieren Sie schließlich fluoreszierende Krebszellherde mit einem geeigneten Fluoreszenzbildgebungssystem.

• Omentum – An adipose-rich tissue within the peritoneal cavity.
• Omental Tissue – Tissue providing a microenvironment for cancer cells.
• Ovarian Cancer – Cancer that seeds and proliferates on the omentum.
• Milky Spots – Structures that attract and support cancer cell implantation.
• Omental Metastasis – Secondary tumor colonization within the omental tissue.

• Omentum is a fat-rich depot providing a home for cancer cells (e.g., omental tissue).
• The omental tissue contains specialized structures known as milky spots (e.g., theory).
• Milky spots secrete chemicals, attracting and supporting cancer cells (e.g., processes).
• The seeded cancer cells proliferate, simulating metastatic conditions (e.g., experiment).

• What is the role of omentum and milky spots in ovarian cancer metastasis?
• What causes proliferation of cancer cells within the omental tissue?
• How do milky spots support cancer cell implantation?

• This research can contribute to new treatment strategies for ovarian cancer (e.g., technology).
• The findings can impact healthcare by improving understanding of metastasis (e.g., healthcare).
• The research could lead to improved quality of life for patients with ovarian cancer (e.g., sustainability).
• The research paves the way for advancement in the treatment of metastatic cancers (e.g., innovations).