Agarose-Spin-Down-Assay: Eine Technik zur Einbettung von Organoiden für die histologische Analyse

3D-Organoidkulturen von Krebszellen rekapitulieren viele pathophysiologische Merkmale menschlicher Krebserkrankungen. Damit bilden diese in vitro Kulturen ein hervorragendes Modell für die Krebsforschung.

Um diese Organoide zu verarbeiten, beginnen Sie mit einer Kultur aus vorgeformten 3D-Organoiden, die in einer geeigneten Basalmembranmatrix gezüchtet werden. Fügen Sie ein gewünschtes Zellwiederherstellungsmedium hinzu und inkubieren Sie. Das Medium erleichtert die Depolymerisation des Matrixgels, wodurch die 3D-Organoide in die Lösung freigesetzt werden.

Zentrifugieren Sie diese Mischung, um die Organoide zu pelletieren. Das Wiederherstellungsmedium mit den Matrixkomponenten verbleibt im Überstand. Entsorgen Sie den Überstand. Fügen Sie als nächstes Paraformaldehydlösung zum Organoid-Pellet hinzu. Die Chemikalie dringt in die Organoidzellen ein und bindet an die Aminosäuren, was zu einer Proteinvernetzung und Probenfixierung führt. Dieser Schritt ist für alle nachgelagerten histologischen Anwendungen von entscheidender Bedeutung.

Pelletieren Sie die Organoide, um den paraformaldehydhaltigen Überstand zu trennen und zu entfernen. Warme geschmolzene Agarose zu den Organoiden geben.