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Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:27 Min. • April 30th, 2023
Prostata-Organoide stellen in erster Linie eine äußere Schicht aus basalen Epithelzellen und innere Schichten aus luminalen Epithelzellen dar, die um ein zentrales Lumen angeordnet sind.
Die Whole-Mount-Bildgebung ermöglicht die Untersuchung intakter 3D-Organoide unter Beibehaltung ihrer Morphologie und Heterogenität. Um mit der Färbung zu beginnen, behandeln Sie die Organoide mit einem geeigneten Fixiermittel, um ihre zellulären Bestandteile an Ort und Stelle zu fixieren und so zu erhalten. Waschen Sie die Probe, um überschüssige Fixiermittel zu entfernen.
Inkubieren Sie mit einem Cocktail aus Blockierungslösung und DNA-Färbefarbstoff. Proteine in der Blockierungslösung binden passiv an unspezifische Stellen der Zellen und reduzieren die Hintergrundfärbung. Gleichzeitig färbt der DNA-färbende Farbstoff die Zellkerne.
Fügen Sie zwei Sätze von Primärantikörpern hinzu, die auf spezifische Antigene abzielen, die von den beiden konstituierenden Zellpopulationen exprimiert werden. Inkubieren Sie mit zwei verschiedenen Fluoreszenzfarbstoff-konjugierten Sekundärantikörpern, die an die Primärantikörper binden. Waschen Sie die Probe, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
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