Peptidaufreinigung: Eine RP-HPLC-basierte Technik zur Extraktion von Peptiden aus verdauten Proteinlysaten

Um Peptide zu isolieren und zu reinigen, beginnen Sie mit einer Suspension aus Proteinlysat, die eine Mischung aus verdauten Peptiden enthält.

Behandeln Sie die Mischung mit Trifluoressigsäure oder Reagenz auf TFA-Basis. Dieses anionische oder negativ geladene Reagenz bildet einen Ionenpaarkomplex mit basischen oder positiv geladenen Resten auf Peptiden, maskiert so deren Ladung und verbessert die Hydrophobizität des Peptids.

Stellen Sie nun eine Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-Säule (RP-HPLC) zusammen, die eine poröse stationäre Phase auf Siliziumdioxidbasis enthält, die mit unpolaren hydrophoben Liganden immobilisiert ist. Geben Sie einen peptidkompatiblen Äquilibrierungspuffer in die Säule, um die stationäre Phase vor der Probenapplikation vorzubereiten.

Laden Sie nun die angesäuerte Probe in die Säule. Innerhalb der Säule adsorbieren die hydrophoben Peptide selektiv an die hydrophoben Liganden der stationären Phase. Lassen Sie einen Waschpuffer durch die Säule laufen, um ungebundene oder unerwünschte Partikel zu eluieren.

Führen Sie als Nächstes einen weniger polaren organischen Elutionspuffer mit hoher Hydrophobie durch die Säule. Aufgrund ihrer selektive