JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:08 Min. • April 30th, 2023
Beginnen Sie für die Rückenmarksextraktion mit einer euthanasierten Maus in Bauchlage. Sprühen Sie Ethanol, um eine mögliche Kontamination durch Fell zu verhindern.
Schneiden Sie die Mittellinie vom Kopf bis zum Schwanz durch und öffnen Sie die Haut, um das darunter liegende Gewebe freizulegen. Untersuche den Schädel der Maus, um den kraniozervikalen Übergang zu lokalisieren, der den Schädel mit der Halswirbelsäule verbindet.
Als nächstes schneiden Sie den kraniozervikalen Übergang senkrecht ein, um die Verbindung zwischen Kopf und Hals zu durchtrennen. Präparieren Sie die Wirbelsäule bis zum fünften Lendenwirbel. Anschließend schneiden Sie die Wirbelsäule am fünften Lendenwirbel durch, um die Verbindung zu den unteren Wirbelebenen zu lösen.
Drehen Sie nun die Maus in die Rückenlage. Schlitzen Sie das Bauchfell und die Brustwand auf, um sowohl die Bauch- als auch die Brusthöhle freizulegen. Entfernen Sie die Peritoneal- und Retroperitonealorgane, um Zugang zur Wirbelsäule zu erhalten.
Schneide die Rippen ab, um die Wirbelsäule vom restlichen Körper zu trennen. Spülen Sie zuletzt das isolierte Rückenmark mit einer kalten Kochsalzlösung aus, um alle Blutverunreinigungen wegzuspülen.
Nachdem Sie das Tier in einer CO2-Kammer eingeschläfert haben, tränken Sie das Fell mit 70% Ethanol und lassen Sie es trocknen. Fixieren Sie die Maus in Bauchlage und machen Sie dann einen Schnitt in der Mittellinie, der sich kraniokaudal vom hinteren Hals bis zur Lendenwirbelsäule erstreckt.
Als nächstes verwenden Sie eine Pinzette, um die Hautlappen beidseitig anzuheben und das Unterhautgewebe freizulegen. Palpieren Sie den Schädel der Maus, bis der kraniozervikale Übergang identifiziert ist. Verwenden Sie eine Schere, die senkrecht zum Tier steht, um die Halsmuskulatur und die Wirbelsäule am kraniozervikalen Übergang zu durchtrennen. Präparieren Sie dann die Wirbelsäule kaudal und führen Sie mit einer Schere eine vollständige kaudale Durchtrennung am fünften Lendenwirbel durch.
Positionieren Sie die Maus anschließend in Rückenlage und ziehen Sie nach einem Schnitt entlang der Mittellinie vom Hals bis zum Bauch die Haut seitlich zurück und schneiden Sie dann das Bauchfell auf.
Öffne die Brustwand mit einer Schere. Nach der Entnahme der Peritoneal- und Retroperitonealorgane werden die Rippen mit einer Pinzette und einer chirurgischen Klinge durchtrennt, so dass etwa 5 Millimeter Rippen aus der Wirbelsäule herausragen. Entfernen Sie die Wirbelsäule vom restlichen Körper und waschen Sie sie zweimal mit kaltem PBS.