Chirurgische Cisterna magna Injektion: eine Methode zur direkten Verabreichung von Tumorzellen in das zentrale Nervensystem des Mausmodells

Das Gehirn der Maus ist von drei meningealen Schichten ausgekleidet - der äußersten Duralmembran, der mittleren Arachnoidalmembran und der innersten Pia-Membran.

Im hinteren Bereich des Gehirns werden die Arachnoidal- und Piamembran durch einen zerebrospinalen oder mit Liquor gefüllten Subarachnoidalraum, die sogenannte Cisterna magna, interveniert.

Um eine intrazisternale Injektion der Tumorzellen durchzuführen, beginnen Sie mit der Entnahme eines anästhesierten Mausmodells. Bereiten Sie die Maus vor, indem Sie die Haare von der Bauchfläche des Kopfes entfernen.

Platzieren Sie nun die Maus in der Bauchlage und befestigen Sie ihren Kopf an einem stereotaktischen Rahmen. Positionieren Sie die Nase der Maus und richten Sie sie leicht nach unten, um die Wirbelsäule mit der Cisterna magna zu begleichen.

Machen Sie mit einer Schere einen kleinen Schnitt in der Mittellinie am hinteren Ende des Gehirns, auf Höhe der Ohren.

Ziehe die oberflächliche Muskelschicht vorsichtig zur Seite. Die Cisterna magna kann man sich als umgekehrtes Dreieck vorstellen, das von der transparenten Duralmembran bedeckt ist.

Nehmen Sie als nächstes eine Spritze mit zirkulierender Tumorzellsuspension.

Halten Sie die umgebende Muskulatur zurückgezogen, führen Sie die Spritze unter die Duramembran ein und stechen Sie durch die Arachnoidalmembran. Dieser Schritt ermöglicht die Injektion von Tumorzellen direkt in den Liquor, der in der Cisterna magna vorhanden ist.

Schließen Sie abschließend die Schnittstelle, indem Sie Wundklammern anbringen, und lassen Sie die Maus sich erholen.

Beginnen Sie damit, der Maus subkutan 1 Milligramm pro Kilogramm Buprenorphin mit verzögerter Freisetzung zu injizieren. Nachdem Sie die Maus betäubt haben, bereiten Sie sie für die Operation vor. Schneiden Sie die Operationsstelle mit genügend Randbereich ab, um zu verhindern, dass das Fell die Inzisionsstelle kontaminiert.

Rasieren Sie das Fell der gesamten Oberfläche des Kopfes und bereiten Sie die Haut mit steriler Technik vor. Sättigen Sie dann die Stelle mit einem keimtötenden Hautantiseptikum, das von der Mitte der Stelle zur Peripherie arbeitet, und lassen Sie es trocknen.

Positionieren Sie den Körper so, dass die Wirbelsäule auf gleicher Höhe mit der Cisterna magna bleibt. Während du leichten Zug auf das Heck ausübst, lege Klebeband an die Heckbasis, um es zu sichern.

Tragen Sie entweder ein steriles Abdecktuch oder ein steriles Kunststoffabdeckmaterial mit selbstklebender Rückseite auf, um die Operationsstelle vor Kontamination zu schützen. Führen Sie den Hals in voller Streckung mit den chirurgischen Scherenspitzen mit leichtem Druck über das Hinterhauptbein nach unten, beginnend direkt zwischen den Ohrmuscheln.

Machen Sie einen kleinen Schnitt von 3 bis 5 Millimetern in der Mittellinie etwas oberhalb der palpierten Konkavität. Ziehen Sie 5 Mikroliter der Zellsuspension in eine 30G Hamilton-Spritze. Verwenden Sie eine stumpfe Pinzette mit einer 1- bis 2-Millimeter-Spitze, um die Cisterna magna sanft nach unten zu drücken.

Führen Sie die Spitzen in geschlossener Position ein und öffnen Sie sie, während Sie nach unten Druck auf die Dura ausüben. Wiederholen Sie die stumpfe Dissektion, bis die Duralmembran leicht zu erkennen ist und die zugehörigen Blutgefäße im freiliegenden Bereich sichtbar sind.

Während Sie die Pinzette halten, öffnen Sie sie, um die umgebende Muskulatur zurückzuziehen. Führen Sie eine 30G-Nadel ohne Kern unter die Dura ein, um die Fase zu visualisieren, und stellen Sie sicher, dass die Nadel nur knapp hinter der Fase selbst eingeführt wird.

Setzen Sie langsam einen Spritzenkolben ein und geben Sie die Zellen direkt unter der Dura ab. Wenn eine Leckage an der Injektionsstelle festgestellt wird, üben Sie mit einem Applikator mit Wattespitze sanften Druck aus. Verschließen Sie die Haut, indem Sie einen Wundclip oder einen Mikrotropfen Hautkleber auftragen.

Überwachen Sie die Mäuse in der ersten Woche täglich nach der Operation. Wenn eine Maus Schmerzen oder Ängste zu haben scheint, behandeln Sie sie mit einer subkutanen Injektion von 10 Milligramm pro Kilogramm Carprofen, einmal alle 12 bis 24 Stunden für bis zu 5 Tage, basierend auf tierärztlicher Beratung und Anweisung.