Reinigung von Subpopulationen extrazellulärer Vesikel: Eine Technik zur Aufreinigung von Subpopulationen extrazellulärer Vesikel mittels Dichtegradienten-Ultrazentrifugation

Extrazelluläre Vesikel oder EVs sind nanogroße, heterogene, membrangebundene Vesikel, die von verschiedenen Zellen, einschließlich Hirntumorzellen, sezerniert werden. Bei den kleinen EVs handelt es sich um eine Subpopulation, die aus endosomalen und membranabgestoßenen EVs besteht.

Um die kleinen EVs zu reinigen, beginnen Sie mit der Einnahme von vorextrahierten EVs, die in einem mit Saccharose angereicherten Puffer suspendiert sind, der eine homogene Lösung beibehält und die strukturelle Integrität der EVs bewahrt.

Zu dieser Lösung fügen Sie dann ein geeignetes Volumen Iodixanol hinzu - ein inertes und ungiftiges Dichtegradientenmedium -, um die gewünschte Dichte zu erreichen.

Jodixanol löst die verunreinigenden Proteine auf, die später entfernt werden sollen.

Fügen Sie als Nächstes Schichten von Iodixanollösungen mit sukzessive abnehmender Dichte hinzu, um einen diskontinuierlichen Dichtegradienten zu erzeugen.

Zentrifugieren Sie das Röhrchen mit hoher Geschwindigkeit.

Abhängig von ihren Flotationsraten wandern die dichteren EVs in eine gleich dichte Schicht aus Gradientenmedium, während weniger dichte EVs weiter in eine leichtere Schicht wandern und die dichtesten Verunreinigung