Astrozytenisolierung: Eine Methode zur reinen Präparation von kortikalen Astrozyten der Maus
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Krebsforschung
0 Aufrufe • 6:41 Min. • April 30th, 2023
Die In-vitro-Kultur der Astrozyten hilft dabei, die biologische Rolle der Astrozyten - der am häufigsten vorkommenden Gehirnzellen - zu untersuchen.
Beginnen Sie mit einem neugeborenen Mausgehirn, das unter ein Präpariermikroskop gelegt wird.
Entferne die Riechkolben und das Kleinhirn.
Führen Sie einen Schnitt in der Mittellinie zwischen den beiden Hemisphären durch, um den Kortex zu trennen.
Entfernen Sie die Hirnhäute, um eine Kontamination der Astrozytenkultur durch Fibroblasten und Hirnhautzellen zu vermeiden.
Die Rindenhälften in ein eiskaltes Medium geben und in kleine Stücke hacken.
Sammeln Sie die kortikalen Stücke in einem Röhrchen, das Trypsin enthält. Trypsin, ein Proteaseenzym, verdaut die Zelladhäsionsproteine und erleichtert so die Zelltrennung.
Zentrifugieren Sie, um das verdaute Gewebe zu pelletieren.
Entfernen Sie den Überstand und fügen Sie dem Pellet ein Astrozytenmedium hinzu. Pipettieren Sie kräftig, um eine gemischte Zellpopulation aus Astrozyten, Mikroglia und Oligodendrozyten-Vorläuferzellen (OPCs) freizusetzen.
Diese Zellsuspension wird in einen mit Polylysin beschichteten Gewebekulturkolben ausgesät und inkubiert.
Die negativ geladenen Zellen heften sich a
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