Endothelzellkultur aus Mikrogefäßen des Rattengehirns: Ein Verfahren zur Isolierung und Kultivierung von Endothelzellen aus Mikrogefäßen des Rattengehirns

Um Endothelzellen des Gehirns zu isolieren, wird zunächst ein geerntetes Rattengehirn in eine Schale mit gekühltem Puffer gegeben.

Nachdem Sie das Kleinhirn und den Sehnerv entfernt haben, teilen Sie das Gehirn in Gehirnhälften. Trennen Sie dann das Mittelhirn vom Vorderhirn.

Entfernen Sie die Hirnhäute und die myelinhaltige weiße Substanz aus dem Vorderhirn, wobei die Hirnrinde zur Isolierung der Mikrogefäße zurückbleibt.

Homogenisieren Sie als Nächstes den Kortex, um das Nervengewebe und die Bestandteile zu brechen.

Zentrifugieren Sie das Homogenat, um Zelltrümmer und Myelin zu entfernen.

Behandeln Sie anschließend das Gewebepellet mit einem Verdauungscocktail, der Kollagenase-, Disparase- und Desoxyribonuklease-Enzyme enthält.

Kollagenasen und Dispasen verdauen die extrazelluläre Matrix, die die Mikrogefäße einbettet, und lösen die Mikrogefäßfragmente aus dem Gewebe. Desoxyribonukleasen bauen jegliche freie DNA ab, die aus lysierten Zellen freigesetzt wird.

Das gewünschte Volumen des aufgeschlossenen Homogenats mit einem geeigneten Dichtegradientenmedium mischen und zentrifugieren.

Die oberste Schicht mit Myelin und Hirnparenchymzellen wird verworfen, gefolgt vom Überstand.

Beha