Isolierung von Mikroglia durch Immunfärbung Gekoppelte Zellsortierung: Eine Immunfärbemethode zur Isolierung von Mikroglia aus Gehirnzellen von Zebrafischen mittels fluoreszenzaktivierter Zellsortierung
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Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:50 Min. • April 30th, 2023
Unter pathologischen Bedingungen helfen aktivierte Mikroglia - spezialisierte Hirnmakrophagen - dabei, Krankheitserreger und Zelltrümmer zu eliminieren. Diese Mikroglia exprimieren einzigartige Rezeptoren, die sie von anderen Makrophagen unterscheiden.
Um Mikroglia zu isolieren, beginnen Sie mit einer Gehirnzellkultur, die aus transgenen Zebrafischen gewonnen wurde und spezifische fluoreszierende Moleküle in verschiedenen Zelltypen exprimiert.
Die Kultur enthält eine Mischung aus Neuronen - die rote Fluoreszenz exprimieren, Makrophagen - die grüne Fluoreszenz exprimieren, und nicht-fluoreszierenden Mikroglia.
Fügen Sie nun ein Blockierungsreagenz hinzu und inkubieren Sie die Kultur unter intermittierender Bewegung. Das Blockierungsreagenz bindet an die unspezifischen Stellen auf den Zellen und reduziert das Hintergrundsignal.
Als nächstes fügen Sie primäre Antikörper hinzu und inkubieren. Diese Antikörper binden an spezifische Rezeptoren, die auf der Oberfläche der Mikroglia exprimiert werden.
Die Kultur wird zentrifugiert und der Überstand mit ungebundenen Antikörpern entfernt. Resuspendieren Sie das Zellpellet in einem frischen Medium.
Anschließend Fluoreszenzfarbstoff-konjugiert
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