Orthotope Langzeittransplantation von Tumorzellen in Zebrafischembryonen: Eine effiziente Methode zur Verlagerung von Tumorzellen in den vierten Ventrikel von Zebrafischembryonen zur Langzeitanalyse des Verhaltens von Tumorzellen

Bei der orthotopen Transplantation werden Tumorzellen oder Gewebe eines tumortragenden Spenders in das entsprechende Gewebe eines Empfängers derselben Spezies transplantiert. Bereiten Sie zunächst eine einheitliche Suspension - in einem geeigneten Puffer - von fluoreszenzmarkierten Hirntumorzellen her, die von einem tumortragenden Zebrafisch entnommen wurden. Laden Sie diese Zellsuspension mit einer feinen Gelladespitze in eine Mikroinjektionsnadel.

Befestigen Sie anschließend die geladene Nadel in der Halterung eines Mikromanipulators. Anschließend übertragen Sie einen anästhesierten Zebrafischembryo auf eine vorgefertigte Injektionsplatte. Für einen einfachen Zugang während der Mikroinjektion positionieren Sie den Embryo seitlich, um die Hirnventrikel sichtbar zu machen - ein Netzwerk von mit Liquor gefüllten Hohlräumen im Gehirn.

Stellen Sie die Nadelspitze so ein, dass die Tumorzellsuspension in den vierten Ventrikel, die rautenförmige Höhle des Hinterhirns des Embryos, injiziert wird. Die Tumorzellen nehmen den Hohlraum innerhalb der Herzkammer ein. Ziehen Sie die Nadel zurück. Übertragen Sie den Embryo in eine Kulturschale mit Kochsalzlösung. Beobachten Sie den Embryo unter e